确定全血样品血浆成分中分析物浓度的方法技术

通过应用确定可选稀释样品的血细胞比容且在计算分析物浓度时将血细胞比容和稀释系数这两者均考虑在内的综合步骤，可以显著提高用于确定全血样品血浆成分内分析物浓度的侧流检测精度。这一点通过在将样品施加至侧流检测装置内的基底后拍摄样品图像时使用预定波长等方式实现，而且其中，波长根据所使用的稀释系数选择。该血细胞比容测量有利地整合至用于测量血浆内分析物的侧流检测方法和装置中，并且对此类检测精度的提高起到显著的作用。并且对此类检测精度的提高起到显著的作用。并且对此类检测精度的提高起到显著的作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】确定全血样品血浆成分中分析物浓度的方法


[0001]本公开涉及临床分析领域，尤其涉及处理全血样品且确定该样品血浆成分中分析物浓度的方法和装置。本公开尤其涉及处理全血样品、定量确定血细胞比容且在考虑该全血样品的血细胞比容的同时定量确定血浆成分中的一种或多种分析物的浓度的侧流检测方法和装置。

技术介绍

[0002]血液检查是现代医学的基石，目前已经能够对多达数百种分析物的存在和浓度进行确定。血液检查用于确定患者的生理和生化状态，其结果在营养状况、健康状况、各种疾病的存在与否、治疗有效性、器官功能的确定方面至关重要。血液检查还例如用于检测药物滥用。针对这一目的的方法和装置下至相对简易的测试条，上至盛有对同一样品进行数百次测试的试剂的自动化临床仪器。
[0003]全血由悬浮于血浆中的红细胞、血小板及白细胞组成。在健康人的血液中，红细胞明显占各种细胞的大多数。红细胞也称红血细胞(RBC)，含有赋予血液红色且具有氧结合能力的血红蛋白(Hb)。血浆主要由水(约93％)组成，但同时含有盐，各种蛋白质和脂质，以及其他组分，如葡萄糖。血浆还含有数百乃至数千种痕量生化化合物，其中的大量化合物已确定为临床分析物，而其余化合物尚处于研究当中。实验室环境中进行的检测或化验常常基于血浆或血清。然而，对于即时医疗(POC)应用，在有全血样品可用的情况下优选使用全血样品，以避免在将样品应用于检测之前的血清或血浆分离步骤。
[0004]血红蛋白
[0005]血红蛋白(Hb)为一种含铁的金属蛋白，负责所有脊椎动物红血细胞内氧的转运。在哺乳动物中，Hb占红血细胞干含量的约96％重量百分比，以及总含量的约35％重量百分比。
[0006]Hb测量方法首创于一百多年之前，成为可供临床医生使用的最早的诊断性血液检查之一。如今，Hb浓度测量为最常见的血液检查之一，通常作为全血细胞计数的一个环节。例如，献血前后通常会进行Hb浓度测量。测量结果以g/L为单位，有时以g/dL或mol/L为单位。男性的正常水平为14～18g/dl，女性为12～16g/dl(孕妇为11～14g/dl)，儿童为11～16g/dl(比利特(Billett)，1990年)。
[0007]如果浓度低于正常值，则称为贫血。贫血的原因可以为失血、红细胞生成减少以及红细胞分解增加。除了献血之外，失血的原因还包括创伤以及胃肠道出血等。红血细胞生成减少可由缺铁、维生素B12的缺乏、地中海贫血以及若干种骨髓肿瘤引起。红血细胞分解增加的原因可以为镰刀形细胞贫血等若干种遗传疾病，疟疾等感染以及某些自身免疫性疾病。
[0008]首创于1950年代的氰化高铁血红蛋白(HiCN)检测法仍然是国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的对所有新的Hb浓度测量方法进行评判和标准化的方法。ICSH成立于1966年，而且自彼时起一直活跃于制定和修订标准化HiCN法的各建议版本，以及组织和监督具
有确切已知浓度的无菌安瓿瓶装HiCN溶液这一国际标准制品的生产和分销。
[0009]便携式血红蛋白计，如201设备(海莫库公司(HemoCue AB)，瑞典)能够在即时医疗情形中以及献血中心内实现精确的血红蛋白测定。此类设备本质上是能够对溶液的颜色强度进行测量的光度计。
[0010]此类测量在同时用作反应容器的一次性微量比色皿内进行。使红细胞释放Hb以及将Hb转化为稳定的有色产物所需的试剂以干态形式处于比色皿壁上。测量时，只需将少量(通常为10μL)毛细血管、静脉或动脉血样引入微量比色皿且将微量比色皿插入仪器中即可。此类仪器在出厂前利用上述HiCN标准预先校准，而且被测溶液的吸光度自动转换为总血红蛋白(ctHb)浓度。结果会在一分钟之内显示。
[0011]自2006年以来，市场上开始出现无试剂分析仪(301)，最近又推出DiaSpect Tm(EKF诊断有限公司(EKF Diagnostics plc)/戴尔斯派德医疗有限公司(DiaSpect Medical GmbH))，此类分析仪使用无试剂比色皿和光度法，而且在大约一秒钟内提供结果。
[0012]众所周知，在将血红蛋白及其衍生物(除硫化血红蛋白之外)在碱性的铁氰化钾和氰化钾溶液(都氏(Drabkin)试剂)的存在下氧化为高铁血红蛋白后，可在540nm处进行Hb的定量比色测定。高铁血红蛋白与氰化钾反应形成在540nm处达到最大吸收的氰化高铁血红蛋白。540nm处测得的颜色强度与总血红蛋白浓度成正比。
[0013]此外，Yang等人在2013年公开一种用于测量Hb的纸基检测法(Yang等人，2013年)。在该检测法中，将20μL的血液与都氏试剂的混合液滴滴在图案化的色谱层析纸上。所产生的血迹晾干25分钟后，进行扫描，并根据红绿蓝(RGB)颜色模型对数字图像进行分析。绿色通道的线性拟合效果最佳，因此选择用于对血样中的Hb进行量化。
[0014]血细胞比容
[0015]血样中压积红血细胞的体积比例称为血细胞比容(Hct)，并且表示为样品总体积的百分比。正常Hct水平非常稳定，成年男性处于40％～54％范围，成年女性处于36％～48％范围(亨尼(Henny)
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比利特，1990年，同上)。偏离这些标准水平通常被认为是严重疾病的征兆，如贫血、白血病、肾脏感染或饮食不足，但也可能表示怀孕、甚至大量运动等某种明确的状况。
[0016]在测量血浆或血清内不同分析物的浓度时，Hct的干扰被认为是一个重要问题。对于所有的定性和定量临床血液分析检测，Hct的差异均可导致严重的误差。
[0017]为了说明了解Hct的重要性，可以考虑两份全血样品，一份来自低Hb(100g/l)患者，另一份来自高Hb(180g/l)患者，此两值均具有生理学上的意义。第一名患者的Hct约为30％，而第二名患者的Hct约为54％。对于25μl的样本量，这表示，对于第一名患者而言，需17.5μl的血浆供分析之用，而对于第二名患者而言，仅需11.5μl即可。在确定血浆中的分析物浓度时，此类差异可具有非常重要的意义。
[0018]目前，已提出采用非接触式漫反射光谱法的Hct预测方法(卡皮奥(Capiau)等人，2016年)。结果表明，仅需对干血斑进行扫描，便足以得出近似Hct。利用以肝素锂作为抗凝剂的采血管，对同意采血的健康志愿者采集静脉血。在采血当天，通过将25μL的血沉积在沃特曼903滤纸上，制备干血斑。血斑始终在环境条件下干燥至少2个小时。所得干血斑要么在干燥后立刻分析，要么在干燥剂的存在下存放于带拉链的塑料袋中，以待分析。经发现，干
血斑在室温下稳定至少5个月，在温度升高(60℃)后，稳定3天以内的时间。干血斑以10W的卤钨光源照射，并以光谱仪记录354nm和1042nm之间反射光强与波长之间的依存关系。
[0019]2017年提出的一种分析技术将直方图用于血液血细胞比容的比色定量分析，研究人员还开发了一种基于智能手机的“直方图应用程序”，用于血细胞比容的测定，该程序通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种处理全血样品且确定该样品的血浆成分内的分析物的水平的侧流检测方法，包括确定所述样品的血细胞比容值且在确定所述血浆成分内的所述分析物的所述水平时应用所述血细胞比容值的步骤，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)以基本上不溶血的缓冲液将所述样品稀释至预定稀释系数，制得稀释样品；2)将所述稀释样品施加至侧流检测装置的基底；3)在自所述施加样品已被吸收于所述基底内起的1～600秒内拍摄所述基底的图像；4)分析所述图像，以从所述图像确定至少一种参数的值；5)将所述值与针对具有已知血细胞比容值的样品获得的值相关联，以获得所述样品的血细胞比容值；6)在下游的所述侧流检测装置中确定所述分析物的所述水平，在确定所述血浆内的所述分析物的所述水平时，应用(1)中使用的所述稀释系数以及(5)中获得的所述样品的所述血细胞比容值。2.如权利要求1所述的方法，其中，在步骤3)中拍摄所述图像时，所述基底在预定波长处照射，而且其中，所述波长根据步骤1)中使用的所述稀释系数选择。3.如权利要求1所述的方法，其中，所述基底以白光照射，且步骤3)中拍摄的所述图像以透射预定波长的光的滤光片拍摄，而且其中，所述被透射的波长根据步骤1)中使用的所述稀释系数选择。4.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述样品以等渗缓冲液稀释至1～2500这一区间内的稀释系数。5.如权利要求2或3所述的方法，其中，当所述稀释系数为1(无稀释)至10时，在以具有处于约600至约950nm这一区间的波长的光对具有被施加样品的所述基底进行照射的同时，拍摄所述图像。6.如权利要求2或3所述的方法，其中，当所述稀释系数大于10但小于50时，在以具有处于约575nm至约950nm这一区间的波长的光对具有被施加样品的所述基底进行照射的同时，拍摄所述图像。7.如权利要求2或3所述的方法，其中，当所述稀释系数为50至2500时，在以具有处于约400nm至约575nm这一区间的波长的光对具有被施加样品的所述基底进行照射的同时，拍摄所述图像。8.如权利要求2或3所述的方法，其中，当所述稀释系数为1(无稀释)至10时，在以白光且使用透射具有约600nm至约950nm这一区间的波长的光的滤光片对具有被施加样品的所述基底进行照射的同时，拍摄所述图像。9.如权利要求2或3所述的方法，其中，当所述稀释系数大于10但小于50时，在以白光且使用透射具有约575nm至约950nm这一区间的波长的光的滤光片对具有被施加样品的所述基底进行照射的同时，拍摄所述图像。10.如权利要求2或3所述的方法，其中，当所述稀释系数为50至2500时，在以白光且使用透射具有约400nm至约575nm这一区间的波长的光的滤光片对具有被施加样品的所述基底进行照射的同时，拍摄所述图像。11.如权利要求1所述的方法，其中，4)中确定的所述至少一种参数为具有施加于其上的样品的所述基底的所述反射率。
12.如权利要求1所述的方法，其中，在自所述样品已被吸收于所述基底内起的约1至约600秒内，优选约1至约360秒内，更优选约1至约180秒内，最优选约1至约90秒内，拍摄所述图像。13.如权利要求1至12当中任何一项所述的方法，其中，所述基底为能够分离红血细胞和血浆的纤维基底。14.如权利要求13所述的方法，其中，所述纤维基底适于基本上避免所述样品内的红血细胞的溶血。15.如权利要求1至14当中任何一项所述的方法，其中，所述分析物选自铁蛋白、转铁蛋白、血浆钙卫蛋白、C反应蛋白(CRP)、胱抑素C、血浆降钙素原(PCT)、N端脑钠肽前体、肌钙蛋白T、肌钙蛋白I及抗CCP抗体。16.一种处理全血样品且确定该样品的血浆成分内的分析物的浓度的侧流检测装置，所述装置适于执行如权利要求1至15当中任何一项所述的方法。17.如权利要求16所述的侧流检测装置，其中，所述分析物...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃尔林，
申请(专利权)人：挪威金田有限公司，
类型：发明
国别省市：