一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法技术

本发明专利技术属于食品生物加工领域，涉及一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法，包括如下步骤：步骤一、取破壁松花粉溶于柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液中，搅拌均匀；步骤二、将松花粉培养基进行巴氏杀菌，沸水浴加热，保温，冰水降温至室温；步骤三、用Na2HPO4溶液调节pH；步骤四、接种米根霉菌，发酵；步骤五、发酵后固液分离，重复提取，合并滤液，冻干，得到提取物。本发明专利技术通过米根霉发酵的方法释放松花粉中酚类活性物质，提升松花粉酚类含量，得到具有更强降脂活性的发酵松花粉提取物，所述提取物具有更强的减脂活性，且该方法温和绿色、安全性高、成本低，便于大规模生产，为开发具有更高降脂活性的松花粉产品提供理论指导。活性的松花粉产品提供理论指导。活性的松花粉产品提供理论指导。

【技术实现步骤摘要】
一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法


[0001]本专利技术属于食品生物加工
，尤其涉及一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法。

技术介绍

[0002]松花粉是我国药食同源的花粉品种，富含酚类等活性物质。研究表明，松花粉具有保护肝脏、调节糖脂代谢、免疫调节、卵巢保护等功效。马尾松花粉可显著控制小鼠的体重增长以及改善体内脂质代谢水平，且酚类成分可能是控制肥胖的有效成分。然而，前期研究结果发现，松花粉中的酚类活性成分大多以结合态形式存在，导致其无法充分地发挥功效。微生物发酵可以促进活性物质的释放及转化。为了提升松花粉中活性成分的释放及功能，目前多采用破壁的方法以破坏细胞壁中结合的活性成分，但尚未有采用发酵方法的研究。

技术实现思路

[0003]本专利技术针对上述的现有技术存在的不足，提供一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法。
[0004]本专利技术的具体技术方案如下：
[0005]一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法，包括如下步骤：
[0006]步骤一、取破壁松花粉溶于柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液中，搅拌均匀；
[0007]步骤二、将松花粉培养基进行巴氏杀菌，沸水浴加热至中心温度达到80
‑
90℃，置于80
‑
90℃水浴中保温20
‑
40min，保温时间到后立即冰水降温至室温；
[0008]步骤三、用Na2HPO4溶液和松花粉培养基混匀，调节pH；
[0009]步骤四、从活化好的菌悬液中接种米根霉菌，在20
‑
40℃、150
‑
250r/min条件下，摇瓶发酵3
‑
5天；
[0010]步骤五、发酵结束后，以3500
‑
5500rpm离心10
‑
20min，固液分离；所得固体用体积浓度为70％乙醇在40
‑
50℃下超声搅拌提取2
‑
3h，重复提取三次，合并滤液，冻干，得到提取物。
[0011]本专利技术采用上述技术特征具有如下技术效果：
[0012]利用所发现的酚类含量的增加是由于米根霉发酵产生蛋白酶、淀粉酶以及糖化酶，使结合在细胞壁上的多酚类物质被释放出来，从而提升了松花粉酚类含量，得到具有更强降脂活性的发酵松花粉提取物。所述提取物具有更强的减脂活性，且该方法温和绿色、安全性高、成本低，便于大规模工厂化生产。
[0013]进一步地，所述柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液的浓度为0.1mol/L，PH为4.3。
[0014]进一步地，所述Na2HPO4溶液的浓度为0.2mol/L。
[0015]进一步地，所述步骤五中，所述所得固体与所述体积浓度为70％乙醇的质量比为1:(15
‑
25)。
[0016]进一步地，所述米根霉菌为3010米根霉菌。
[0017]进一步地，所述破壁后松花粉与(柠檬酸缓冲液+Na2HPO4溶液)的重量比为1:(15
‑
25)；
[0018]进一步地，所述Na2HPO4溶液调节的pH为6.2
‑
6.8。
[0019]进一步地，所述活化好的菌悬液的孢子数为106个/mL。
[0020]进一步地，所述步骤四中米根霉菌的接菌量为10％(V/V)。
[0021]本专利技术的有益效果为：
[0022]本专利技术通过米根霉发酵的方法释放松花粉中酚类活性物质，提升松花粉酚类含量，得到具有更强降脂活性的发酵松花粉提取物。而呈现更强抑制脂质积累作用的原因可能是由于酚类含量的增加，利用3T3
‑
L1细胞模型验证所述提取物更强的减脂活性，且该方法温和绿色、安全性高、成本低，便于大规模工厂化生产，为开发具有更高降脂活性的松花粉产品提供理论指导。
附图说明
[0023]图1为本专利技术发酵前后松花粉酚类物质的高效液相色谱图；
[0024]a
‑
未发酵(NFPP)；b
‑
发酵(FPP)；c
‑
标准品；
[0025]1‑
与胺儿茶酸；2
‑
儿茶素；3
‑
对香豆酸；4
‑
花旗松素；5
‑
柚皮素；
[0026]图2为本专利技术油红染色3T3
‑
L1细胞脂质积累效果图；
[0027]a
‑
空白组；b
‑
未发酵组(200μg/mL)；c
‑
未发酵组(400μg/mL)；d
‑
绿原酸组；e
‑
发酵组(200μg/mL)；f
‑
发酵组(400μg/mL)。
[0028]图3为本专利技术松花粉和柚皮素对3T3
‑
L1细胞脂质积累的定量结果图；不同字母标识有显著性。
具体实施方式
[0029]以下结合实例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0030]一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法，包括如下步骤：
[0031]步骤一、取6.5g的破壁松花粉溶于65ml浓度为0.1mol/L，pH为4.3的柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液中，搅拌均匀；
[0032]步骤二、将松花粉培养基进行巴氏杀菌，沸水浴加热至中心温度达到85℃，置于85℃水浴中保温30min，保温时间到立即冰水降温至室温；
[0033]步骤三、在超净台上，用0.2mol/LNa2HPO4溶液和松花粉培养基混匀，调节pH为6.6；其中，松花粉与培养基的重量比为1:20；
[0034]步骤四、从活化好的菌悬液(孢子数106个/mL)中以10％接种量(V/V)接种3010米根霉菌，在30℃、180r/min条件下，用摇床摇瓶发酵4天；
[0035]步骤五、发酵结束后，以5000rpm离心15min，固液分离；所得固体用体积浓度为70％乙醇在45℃下超声搅拌3h提取，所得固体与体积浓度为70％乙醇的质量比为1:20；重复提取三次，合并滤液，冻干，得到提取物。
[0036](1)HPLC检测发酵前后酚类物质的变化
[0037]以未发酵的松花粉为对照，实验结束后，用HPLC检测发酵前后酚类物质的变化。色
谱柱：X
‑
Bridge(250
×
4.6mm，5μm)，柱温35℃，进样量10μL，检测波长200
‑
600nm；流动相：B相：0.1％甲酸，C相：乙腈，流速1.0mL/min。洗脱方法：0
‑
6.0min，5％～25％C；6.0
‑
15.0min，25％～40％C；15.0～18.0min，40％～70％C；18.0～20.0min，70％～100％C，其检测结果如图1、表1所示。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、取破壁松花粉溶于柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液中，搅拌均匀；步骤二、将松花粉培养基进行巴氏杀菌，沸水浴加热至中心温度达到80
‑
90℃，置于80
‑
90℃水浴中保温20
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40min，保温时间到后立即冰水降温至室温；步骤三、用Na2HPO4溶液和松花粉培养基混匀，调节pH；步骤四、从活化好的菌悬液中接种米根霉菌，在20
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40℃、150
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250r/min条件下，摇瓶发酵3
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5天；步骤五、发酵结束后，以3500
‑
5500rpm离心10
‑
20min，固液分离；所得固体用体积浓度为70％乙醇在40
‑
50℃下超声搅拌提取2
‑
3h，重复提取三次，合并滤液，冻干，得到提取物。2.根据权利要求1所述的利用米根霉菌发酵提升松花粉降脂活性的方法，其特征在于，所述柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液的浓度为0.1mol/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘其耸，曾茂茂，高福凯，陈洁，鞠东，何志勇，
申请(专利权)人：烟台新时代健康产业有限公司，
类型：发明
国别省市：