制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品的分子靶标及其应用制造技术

本发明专利技术涉及制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品的分子靶标及其应用，所述分子靶标为β

【技术实现步骤摘要】
制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品的分子靶标及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品的分子靶标及其应用。

技术介绍

[0002]作为蜜蜂最主要的病害之一，蜜蜂微孢子虫病每年对我国养蜂业造成的蜂群损失可占到全部病害损失的30%以上，直接经济损失可达上亿元。蜜蜂微孢子虫病又称为东方蜜蜂微孢子虫病，病原体为蜜蜂微孢子虫，主要借助蜜蜂摄入食物时通过消化系统到达中肠并在中肠上皮细胞大量增殖。感染后蜜蜂因为中肠组织细胞被大量破坏引起消化不良和排泄不畅造成个体死亡，而患病蜜蜂的排泄物会含有大量病原微孢子虫，蜂群中其它健康蜜蜂接触会造成传染。
[0003]由于蜜蜂微孢子虫病是传染性疾病，对该病的早防早治能最大程度地减少养蜂户损失。目前，国内外对蜜蜂微孢子虫病的诊断技术已经比较成熟，且目前的治疗手段也以杀真菌剂等化学药剂或中药或者植物提取物为主，如中国专利技术专利201510302650.6《一种防治蜜蜂微孢子虫病的中药组合物及用途》、中国专利技术专利201410672287.2《天然植物提取物及防治蜜蜂微孢子虫病的用途》，尚无从分子靶标角度对蜜蜂微孢子虫病进行诊断和治疗研发的成功报道。

技术实现思路

[0004]为了解决以上问题，本专利技术提出制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品的分子靶标及其应用，所述分子靶标为β
‑
catenin蛋白基因，所述β
‑
catenin蛋白基因在NCBI数据库中的基因编号为GB52616，当待测蜜蜂中肠组织样本中β
‑
catenin蛋白基因表达水平显著升高，则表示该待测蜜蜂感染了微孢子虫病。
[0005]进一步，当蜜蜂感染蜜蜂微孢子虫病的时间在72小时以上时，所述β
‑
catenin蛋白基因在感染蜜蜂中肠组织中的表达水平是健康蜜蜂的10倍以上。
[0006]进一步，所述产品中含有检测β
‑
catenin蛋白基因表达水平的试剂，所述试剂包括针对β
‑
catenin蛋白基因的探针、引物。
[0007]进一步，所述引物为：F：5
’
TTACTGCGGAAGAACACGAA3
’
；R：5
’
CCAGCATCGCCAAGATTTCC3
’
。
[0008]进一步，所述产品包括芯片、试剂盒或核酸膜条。
[0009]进一步，所述芯片为基因芯片，所述基因芯片包括用于检测β
‑
catenin蛋白基因表达水平核苷酸探针；所述试剂盒为基因检测试剂盒，所述基因检测试剂盒包括用于检测β
‑
catenin蛋白基因表达水平的试剂或芯片。
[0010]本专利技术同时提供了β
‑
catenin蛋白基因表达抑制剂在制备治疗蜜蜂微孢子虫病药物中的应用。
[0011]进一步，所述β
‑
catenin蛋白基因表达抑制剂包括iCRT
‑
5 β
‑
catenin蛋白表达抑制剂。
[0012]进一步，所述iCRT
‑
5 β
‑
catenin蛋白表达抑制剂在药物中的使用浓度为0.5
‑
1 mg/L。
[0013]本专利技术的有益效果如下：1、本专利技术首次公开了β
‑
catenin蛋白基因与蜜蜂微孢子虫相关，并进一步证实了该基因在感染蜜蜂微孢子虫病的蜜蜂中肠组织中表达显著上升，可作为蜜蜂微孢子虫病的分子靶标，对蜜蜂微孢子虫病进行基因检测。
[0014]、本专利技术提供的β
‑
catenin蛋白基因分子靶标，可以做到蜜蜂感染微孢子虫病后72小时就能确诊，不仅能够快速有效的做到早期检测，还为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。
[0015]、蜜蜂中肠上皮组织是蜜蜂消化道内外的重要屏障，在吸收营养的同时也负责阻挡外界微生物的侵染，是蜜蜂免疫系统的重要组成部分。蜜蜂感染微孢子虫会影响中肠上皮细胞间的粘附连接，影响中肠上皮细胞的正常增殖，破坏中肠组织的完整性，造成患病蜜蜂对其它病原及农药等敏感性增加。本专利技术认为，粘附连接是上皮极性和屏障功能的关键调节因子，而β
‑
catenin蛋白与cadherin的结合则被认为是粘附连接的先决条件。β
‑
catenin蛋白通过介导胞膜上的Cadherin与胞浆中的α
‑
catenin结合，通过β
‑
catenin的Ｃ端链接在细胞骨架上，形成cadherin/catenin adhesive复合体，粘附连接在细胞膜上，在细胞黏附、迁移过程中发挥作用。当β
‑
catenin蛋白在细胞中的量异常增高时会导致细胞凋亡等发生，而蜜蜂微孢子虫侵染可显著上调β
‑
catenin蛋白的表达，造成细胞内β
‑
catenin蛋白的大量积累，从而直接影响中肠上皮细胞间的粘附连接和细胞的正常增殖。因此，抑制β
‑
catenin蛋白基因在感染蜜蜂中的表达水平，能有效降低蜂群对蜜蜂微孢子虫病的患病率。
附图说明
[0016]图1为本专利技术的β
‑
catenin蛋白基因特征引物序列与意大利蜜蜂β
‑
catenin蛋白基因序列同源性分析结果示意图；图2为实施例2的β
‑
catenin蛋白基因在自然感染的患病蜜蜂和健康蜜蜂样本中的表达水平对比图；图3为实施例3的不同时间点人工感染的患病蜜蜂和健康蜜蜂样本中β
‑
catenin蛋白基因表达水平对比图；图4为实施例5的使用iCRT
‑
5 β
‑
catenin表达抑制剂后不同时间点患病蜜蜂和健康蜜蜂样本中β
‑
catenin蛋白基因表达水平对比图。
具体实施方式
[0017]以下结合实施例对本专利技术作进一步说明。
[0018]实施例1：蜜蜂中肠组织β
‑
catenin蛋白基因特征引物设计本专利技术的β
‑
catenin蛋白基因是在本专利技术之前的已知基因，来源于已公开的意大利蜜蜂（Apis mellifera）基因组序列，位于蜜蜂10号染色体上，所述β
‑
catenin蛋白基因在
NCBI数据库中的基因编号为GB52616。
[0019]在NCBI上通过引物设计，获得5对可能的引物，分别将这5对引物进行PCR扩增，将扩增后的产物回收后，在ABI 3730 全自动测序仪上测序，核苷酸序列在NCBI上完成同源性分析，其中第二对引物的扩增产物与NCBI公布的意大利蜜蜂β
‑
catenin蛋白基因序列同源性达到100%，见图1，从而确定本专利技术的β
‑
c本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分子靶标在制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品中的应用，其特征在于，所述分子靶标为β
‑
catenin蛋白基因，所述β
‑
catenin蛋白基因在NCBI数据库中的基因编号为GB52616，当待测蜜蜂中肠组织样本中β
‑
catenin蛋白基因表达水平显著升高，则表示该待测蜜蜂感染了微孢子虫病。2.根据权利要求1所述分子靶标在制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品中的应用，其特征在于，所述产品中含有检测β
‑
catenin蛋白基因表达水平的试剂，所述试剂包括针对β
‑
catenin蛋白基因的探针、引物。3.根据权利要求1所述分子靶标在制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品中的应用，其特征在于，所述产品包括芯片、试剂盒或核酸膜条。4.根据权利要求3所述分子靶标在制备诊断和治疗蜜蜂微孢子虫病产品中的应用，其特征在于，所述芯片为基因芯片，所述基因芯片包括用于检测β
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱炳男，王强，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：