急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，包含正向引物、反向引物和荧光标记探针，其中引物和探针如下：正向引物Vea005：5

【技术实现步骤摘要】
急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及检测试剂盒
，具体为急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒。

技术介绍

[0002]目前养殖行业用得比较多的是胶体金法、Elisa法等，其方法的灵敏度和阳性符合率均比荧光PCR法，“ELISA，即酶联免疫吸附实验，其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。”，但其不适合畜牧类病毒感染后的早起诊断，错失了最佳了治疗或处理时间。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒已解决目前养殖行业的检测方法不适当的问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，包含正向引物、反向引物和荧光标记探针，其中引物和探针如下：
[0005]正向引物Vea005：5
′‑
aaatcacatgtggtacaac
‑3′
；
[0006]反向引物Vea006：5
′‑
cgactagcgccattgttaat
‑3′
；
[0007]探针Vea004：5
′
tgaaacttaccatttacaacgcc
‑3′
；
[0008]所述试剂盒还包含VpAHPND_PCR反应液、VpAHPND阳性质控品和VpAHPND阴性质控品。
[0009]所述VpAHPND_PCR反应液主要成分为dUTP、dATP、dGTP、dCTP、MgCl2、ASFV引物及探针、IC引物及探针、热启动核酸聚合酶、UNG酶。
[0010]所述VpAHPND阳性质控品主要成分为ASFV质粒、阴性基质、缓冲液。
[0011]所述VpAHPND阴性质控品主要成分为阴性基质、缓冲液。
[0012]所述荧光定量PCR检测的反应体系为8
‑
20μl，包括5
×
HS HiTaq Buffer 6～12uL，Solution I(10
×
)2～7uL，dATP 200～500uM，dUTP 200～500uM，dGTP 200～500uM，dCTP 200～500uM，EP001 0.1～0.5uM，EP002 0.1～0.5uM，EP003 0.1～0.5uM，Hotstart HiTaq DNA Polymerase 0.02～0.06U/uL，UNG酶0.02～0.06U/uL。
[0013]所述荧光定量PCR检测的反应条件为50℃反应3min一个循环，95℃预变性3min一个循环，94℃变性和60℃荧光信号采集30S45个循环，25℃仪器冷却30S一个循环。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过荧光PCR法，Taqman探针技术，达到高灵敏度、高度特异性、重复性好、快速高效、可进行多重定量的检测方法，其方法更适合病原体入侵后的早发现早治疗的兽医体外诊断需求，为目前养殖业预防和早期诊断提供高精准的技术平台。
附图说明
[0015]图1为本专利技术引物和探针序列图；
[0016]图2为本专利技术Buffer配置图；
[0017]图3为本专利技术试剂组装合成图；
[0018]图4为本专利技术PCR上机检测条件图；
[0019]图5为本专利技术CP基因扩增曲线图。
具体实施方式
[0020]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0021]请参阅图1
‑
5，本专利技术提供一种技术方案：急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，包含正向引物、反向引物和荧光标记探针，其中引物和探针如下：
[0022]正向引物Vea005：5
′‑
aaatcacatgtggtacaac
‑3′
；
[0023]反向引物Vea006：5
′‑
cgactagcgccattgttaat
‑3′
；
[0024]探针Vea004：5
′
tgaaacttaccatttacaacgcc
‑3′
；
[0025]所述试剂盒还包含VpAHPND_PCR反应液、VpAHPND阳性质控品和VpAHPND阴性质控品。
[0026]所述VpAHPND_PCR反应液主要成分为dUTP、dATP、dGTP、dCTP、MgCl2、ASFV引物及探针、IC引物及探针、热启动核酸聚合酶、UNG酶。
[0027]所述VpAHPND阳性质控品主要成分为ASFV质粒、阴性基质、缓冲液。
[0028]所述VpAHPND阴性质控品主要成分为阴性基质、缓冲液。
[0029]所述荧光定量PCR检测的反应体系为8
‑
20μl，包括5
×
HS HiTaq Buffer 6～12uL，Solution I(10
×
)2～7uL，dATP 200～500uM，dUTP 200～500uM，dGTP 200～500uM，dCTP 200～500uM，EP001 0.1～0.5uM，EP002 0.1～0.5uM，EP003 0.1～0.5uM，Hotstart HiTaq DNA Polymerase 0.02～0.06U/uL，UNG酶0.02～0.06U/uL。
[0030]VpAHPND_PCR反应液15μL分装到八连排管中，加入经过核酸提取后的DNA样本，以及阴阳性对照各5μL。
[0031]所述荧光定量PCR检测的反应条件为50℃反应3min一个循环，95℃预变性3min一个循环，94℃变性和60℃荧光信号采集30S45个循环，25℃仪器冷却30S一个循环。
[0032]尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本专利技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，其特征在于：包含正向引物、反向引物和荧光标记探针，其中引物和探针如下：正向引物Vea005：5
′‑
aaatcacatgtggtacaac
‑3′
；反向引物Vea006：5
′‑
cgactagcgccattgttaat
‑3′
；探针Vea004：5
′
tgaaacttaccatttacaacgcc
‑3′
。2.根据权利要求1所述的急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含VpAHPND_PCR反应液、VpAHPND阳性质控品和VpAHPND阴性质控品。3.根据权利要求2所述的急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，其特征在于：所述VpAHPND_PCR反应液主要成分为dUTP、dATP、dGTP、dCTP、MgCl2、ASFV引物及探针、IC引物及探针、热启动核酸聚合酶、UNG酶。4.根据权利要求2所述的急性肝胰腺坏死病(VpAHPND)病原核酸检测试剂盒，其特征在于：所述VpAHPND阳性质控品主要...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎梅连，温建新，付雨思，庄其山，
申请(专利权)人：百吉泰厦门医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：