内含肽C端序列变体及其应用制造技术

本申请涉及一种内含肽C端序列变体，其中与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列相比，所述内含肽C端序列变体包含至少一个位于选自下组的氨基酸位置处的突变：K2、K7、K11和K28。所述内含肽C端序列变体可以参与抗体偶联类药物的制备，包括抗体偶联药物、抗体偶联超分子纳米纤维(如光热治疗ICG等)、抗体偶联蛋白降解剂(如PROTAC分子)，使药物进行定点偶联。本申请提供了利用该内含肽C端序列变体的缀合物的制备方法。法。

【技术实现步骤摘要】
内含肽C端序列变体及其应用


[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种内含肽C端序列变体及其应用。

技术介绍

[0002]蛋白质剪接是一种翻译后成熟的过程，在此过程中，一种命名为“内含肽“的插入序列能进行自我剪接，以肽键连接两侧外蛋白子形成成熟蛋白质。
[0003]抗体药物虽然具有一定的疗效且高活性特异性靶向作用，但抗体药物作为单一药物对癌症特别是恶性肿瘤的疗效也不尽如人意；同时，有些高活性细胞毒类小分子化学药物由于靶向性差、治疗窗口窄和/或毒副作用大在临床失败而无法成药，为了解决这些问题，科学家将高活性细胞毒类小分子药物与抗体药物通过化学偶联技术开发出新一代靶向药物即抗体偶联药物(Antibody
‑
drug conjugate，ADC)。目前上市的抗体偶联药物主要以小分子通过共价键随机偶联至抗体的赖氨酸或半胱氨酸。
[0004]然而，随机偶联在工艺稳定性、偶联位点重现性、药效稳定性、代谢一致性等方面存在潜在的问题。因此亟待获得可以实现抗体偶联药物定点偶联的制备工艺，同时拓展应用范围，将抗体免疫治疗与光热治疗、蛋白降解等相结合，获得抗体偶联类药物。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种内含肽C端序列变体及其应用。本申请所述的内含肽C端序列可以在还原条件下保留剪切活性。所述内含肽C端序列变体可以与相应的内含肽N端序列一起参与制备抗体偶联类药物。例如，通过所述内含肽C端序列变体，可以实现药物在抗体或其抗原结合片段上的定点偶联。例如，通过所述内含肽C端序列变体，可以解决抗体偶联类药物因随机偶联而产生的均一性和/或安全性问题。通过所述内含肽C端序列变体所制备的抗体偶联类药物，其与原始抗体或其抗原结合片段相比，可以对抗原的结合活性、对表达抗原的靶细胞(例如肿瘤细胞)的结合亲和力和/或对表达抗原的靶细胞(例如肿瘤细胞)的杀伤能力显著提高。
[0006]一方面，本申请提供了一种内含肽C端序列变体，其中与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列相比，所述内含肽C端序列变体包含至少一个位于选自下组的氨基酸位置处的突变：K2、K7、K11和K28。
[0007]在某些实施方式中，与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列相比，所述内含肽C端序列变体包含K2、K7、K11和K28氨基酸位置处的突变。
[0008]在某些实施方式中，所述K2处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为带正电荷的氨基酸，或者不带电荷但具有极性的氨基酸，或者与K的侧基大小相近的氨基酸。
[0009]在某些实施方式中，所述K7处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为带正电荷的氨基酸，或者不带电荷但具有极性的氨基酸，或者与K的侧基大小相近的氨基酸。
[0010]在某些实施方式中，所述K11处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为带正电荷的氨基酸，或者不带电荷但具有极性的氨基酸，或者与K的侧基大小相近的氨基酸。
[0011]在某些实施方式中，所述K28处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为带正电荷的氨基酸，或者不带电荷但具有极性的氨基酸，或者与K的侧基大小相近的氨基酸。
[0012]在某些实施方式中，所述K2处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为K2R、K2Q、K2M、K2E或K2G。
[0013]在某些实施方式中，所述K7处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为K7R、K7Q、K7M、K7E或K7G。
[0014]在某些实施方式中，所述K11处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为K11R、K11Q、K11M、K11E或K11G。
[0015]在某些实施方式中，所述K28处包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为K28R、K28Q、K28M、K28E或K28G。
[0016]在某些实施方式中，所述的内含肽C端序列变体包含两个以上被取代为相同种类的氨基酸的所述氨基酸取代。
[0017]在某些实施方式中，所述的内含肽C端序列变体包含SEQ ID NO.2
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6中任一项所示的氨基酸序列。
[0018]另一方面，本申请提供一种缀合物，其包含本申请所述的内含肽C端序列变体。
[0019]在某些实施方式中，所述缀合物用于制备抗体偶联类药物。
[0020]在某些实施方式中，所述缀合物包括抗体或其抗原结合片段。
[0021]在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链。
[0022]在某些实施方式中，所述内含肽N端序列的N端与所述轻链的C端直接或间接连接。
[0023]另一方面，本申请提供一种分离的核酸分子，其编码本申请所述的内含肽C端序列变体。
[0024]另一方面，本申请提供一种制备抗体偶联类药物的方法，其包括以下的步骤：
[0025](1)获得第一分子，其中所述第一分子包含与本申请所述的内含肽C端序列变体和所述药物，其中所述内含肽C端序列与所述药物直接或间接连接。
[0026]在某些实施方式中，所述方法包括以下的步骤：
[0027](2)获得第二融合蛋白，其中所述第二融合蛋白包含本申请所述的内含肽C端序列变体所对应的内含肽N端序列与抗体或其抗原结合片段，其中所述的内含肽N端序列与抗体或其抗原结合片段直接或间接连接。
[0028]在某些实施方式中，所述方法包括以下的步骤：
[0029](3)将所述第二融合蛋白与所述第一分子接触，所述内含肽C端序列变体与所述内含肽N端序列的反式剪接，获得包含所述抗体或其抗原结合片段和所述药物的抗体偶联类药物。
[0030]在某些实施方式中，所述第二融合蛋白包括抗体轻链，所述内含肽N端序列的N端与所述轻链的C端直接或间接连接。
[0031]在某些实施方式中，所述抗体偶联类药物中，所述轻链的C端与所述药物的N端直接或间接连接。
[0032]在某些实施方式中，所述间接连接包含使用连接子连接。
[0033]在某些实施方式中，所述抗体偶联类药物特异性结合肿瘤相关抗原。
[0034]另一方面，本申请提供根据本申请所述的方法制备的抗体偶联类药物。
[0035]在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段与药物直接或间接连接。
[0036]在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段中轻链的C端与所述药物的N端间接连接。
[0037]在某些实施方式中，所述间接连接包含使用连接子连接。
[0038]在某些实施方式中，所述的抗体偶联类药物特异性结合肿瘤相关抗原。
[0039]在某些实施方式中，所述药物定点偶联于所述抗体或其抗原结合蛋白。
[0040]在某些实施方式中，所述的抗体偶联类药物的药物/抗体比率(DAR)为2。
[0041]另一方面，本申请提供了本申请所述的内含肽C端序列变体在制备抗体偶联类药物中的应用。
[0042]另一方面，本申请提供了本申请所述的内含肽C端序列变体在向抗体或其抗原结合片段定点偶联类药物中的应用。
[0043]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.内含肽C端序列变体，其中与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列相比，所述内含肽C端序列变体包含至少一个位于选自下组的氨基酸位置处的突变：K2、K7、K11和K28。2.根据权利要求1所述的内含肽C端序列变体，其中与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列相比，所述内含肽C端序列变体包含K2、K7、K11和K28氨基酸位置处的突变。3.缀合物，其包含权利要求1
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2中任一项所述的内含肽C端序列变体。4.分离的核酸分子，其编码权利要求1
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2中任一项所述的内含肽C端序列变体。5.一种制备定点偶联的抗体偶联类药物的方法，其包括以下的步骤：(1)获得第一分子，其中所述第一分子包含与权利要求1
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2中任一项所述的内含肽C端序列变体和所述药物，其中所述内含肽C端序列与所述药物直接或间接连接。6.根据权利要求5所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宝红，张敬仪，朱建伟，闵益佳，乔俣，韩雷，丁凯，宗会芳，边延林，江华，谢跃庆，
申请(专利权)人：美国杰科实验室有限公司杰科天津生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：