分化诱导用肽制造技术

本发明专利技术的主要课题在于，提供在从多能干细胞向着体细胞(例如心肌细胞)进行分化诱导时能够解决以往课题的新的分化诱导剂(肽)。作为本发明专利技术，可列举例如在分子结构上具有下述序列号1所示的氨基酸序列或该氨基酸序列中的1个或多个氨基酸残基发生了置换、缺失和/或添加而形成的氨基酸序列的合成肽。另外，可列举包含所述合成肽的、用于从多能干细胞向着体细胞进行分化诱导的组合物。CAXXLXXLXXXLXXLXGXXXXXXXXXXXXXXLXXXLXXLXXAC

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分化诱导用肽


[0001](关联申请的相互参照)
[0002]本申请要求2020年4月13日向日本特许厅提出申请的日本申请号第2020
‑
71429号的利益。该日本申请如同在本说明书中明示出其申请文件(说明书、权利要求书、附图、摘要)整体那样，以所有目的通过参照而援引到本说明书中。
[0003]本专利技术属于包括再生医疗在内的细胞培养
本专利技术涉及用于从多能干细胞向着体细胞进行分化诱导的体液因子。详细而言，本专利技术涉及在从多能干细胞向着体细胞进行分化诱导时有用的肽。

技术介绍

[0004]为了治疗器官衰竭等而进行细胞移植时，由于供体不足，难以按需对有需求的患者提供医疗服务这一点已成为问题。因此，在生物体外由ES/iPS细胞等多能干细胞制备所需器官并应用于患者的再生医疗备受关注。为了制备所需器官，常规方法是在合适时机使生长因子、分化诱导因子等体液因子作用于细胞，逐渐地规定细胞分化方向。
[0005]但是，所使用的体液因子较为昂贵，因此制备目标细胞的总成本变高，成为再生医疗普及的壁垒。另外，还可列举所制备的细胞的功能达不到生物体内细胞的功能的问题。前者、即体液因子昂贵的原因在于，体液因子以使用动物细胞等生产的蛋白为主成分。关于后者、即功能，认为在生物体外不能充分模拟生物体内的脏器发生、即所添加的体液因子的组合不足是功能不足的理由之一。
[0006]为了解决前一问题，尝试了用低分子化合物代替蛋白的方法。但是，作用机制不明的情况较多，担心副作用等无法预测的风险(例如，产生感染风险(病毒、支原体、朊病毒等))。对于解决后一问题而言，提高体液因子的添加浓度、增加体液因子的种类、改进体液因子的结构是有效的。但是，导致成本进一步提高、操作进一步复杂化。
[0007]作为在生物体外由ES/iPS细胞等多能干细胞制备所需器官的具体技术，例如已知下述那样的技术。
[0008]专利文献1中记载的专利技术涉及由多能干细胞制造心肌细胞的方法，使用激活蛋白、BMP4、bFGF、VEGF等体液因子能够高效地向着心肌进行分化诱导。但是，由于使用多种体液因子而成本高。
[0009]专利文献2～5中记载的专利技术涉及使用低分子化合物向着心肌进行分化诱导的方法。但是，专利文献2的专利技术使用了作为饲养细胞的OP9，需要使用细胞分选仪的细胞分离，操作复杂。专利文献3、4和5的专利技术是专门针对心肌细胞的方法，尚不清楚能否用于其它分化系统。
[0010]专利文献6中记载的专利技术利用包含细胞穿膜肽和肝配蛋白的部分肽的肽对细胞进行分化诱导。但是，利用该肽的分化诱导显示出促进向肝细胞系分化的作用，因此很可能在其它分化诱导中是无法使用的。
[0011]专利文献7中记载的专利技术涉及一种分化诱导方法，其为使用包含肝素结合生长因
子的培养基将多能干细胞分化诱导为体细胞的方法，其特征在于，使细胞接触将层粘连蛋白E8片段和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的包含生长因子结合部位的片段连接而成的缀合物。根据该专利技术，能够由多能干细胞高效地向任意体细胞进行分化诱导，但是由于制造时使用动物细胞而成本高。
[0012]现有技术文献
[0013]专利文献
[0014]专利文献1：日本专利第6429280号公报
[0015]专利文献2：日本专利第5611035号公报
[0016]专利文献3：国际公开第2012/026491号
[0017]专利文献4：国际公开第2015/182765号
[0018]专利文献5：国际公开第2015/037706号
[0019]专利文献6：日本特开2011
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98900号公报
[0020]专利文献7：国际公开第2018/088501号

技术实现思路

[0021]专利技术要解决的问题
[0022]为了对细胞进行高效率的分化诱导，正在积极推进从ES/iPS细胞等多能干细胞进行分化诱导的方法。另一方面，这样的系统均伴有下述问题中的1种以上问题。
[0023]·
使用多种体液因子。
[0024]·
使用蛋白作为体液因子，因此成本高。
[0025]·
使用细胞制备蛋白，因此难以确定内容物(标准化)。
[0026]·
所制备的例如心肌细胞的功能不充分。
[0027]本专利技术的主要课题在于，提供能够解决从ES/iPS细胞等多能干细胞向着体细胞(例如心肌细胞)进行分化诱导时的上述问题的新的分化诱导剂或体液因子(肽)。另外，作为本专利技术的课题，可以包括例如提供用于从多能干细胞向着体细胞进行分化诱导的新方法、体细胞的新的制造方法。
[0028]用于解决问题的方案
[0029]本专利技术人们进行了深入研究，结果发现，在从多能干细胞向着体细胞进行分化诱导的过程中，通过与激活蛋白一起应用与FGF(Fibroblast Growth Factors；成纤维细胞生长因子)受体结合的肽作为1天后的体液因子，从而能够向着体细胞进行分化诱导，因此能够解决上述课题，至此完成了本专利技术。
[0030]作为本专利技术，例如可列举以下方式。
[0031][1]一种合成肽，其在分子结构上具有下述所示的氨基酸序列(序列号1)或该氨基酸序列中的1个或多个氨基酸残基发生了置换、缺失和/或添加而形成的氨基酸序列。
[0032][0033]式中，从序列(1)的N末端起第1位的X为A、R、Q、V、L、K、F或H，第2位的X为E或H，第3位的X为A、Q、V、Y、R、L或E，第4位的X为A或S，第5位的X为E、L、H、R、G或K，第6位的X为A、K、M、R、G或Y，第7位的X为E或D，第8位的X为A、Q、R、Y、E、K或G，第9位的X为A或I，第10位的X为E、G、
Y、Q、R、K或M，第11位的X为F、A、Q、V、G、I、N、R、M、D、L、S、P、K或E，第12位的X为G、V、K、T、P、R、M、N、E、D、S、C、W、H或A，第13位的X为G、R、E、F、A、K、P、N、L、V、M、D、H、T或Y，第14位的X为V、D、L、M、S、T、A、N、H、G、F、E、R、P、Y或K，第15位的X为V、K、Y、T、N、G、D、E、P、F、Q、H或I，第16位的X为Y、R、H、L、P、N、E、M、A、G、V、I或S，第17位的X为S、K、M、G、H、Q、T、V、C、L、N、A、E、P或R，第18位的X为C、S、A、T、R、E、N、Q、G、K、Y、P、L、V或M，第19位的X为E、K、S、V、L、R、G、I、F、T、A、H、Q、N、M或Y，第20位的X为W或G，第21位的X为Q、K、F或H，第22位的X为A或L，第23位的X为V、M、D、Y、K、L、I、R、S、Q、G、E、H、F、N或A，第24位的X为Y、M、R、S、K、H、G、L、N、E、V、D或A，第25位的X为H、F、Y、K、I、Q、M或V，第26位的X为Y、W、G、L、N、D、Q、E、M、F、R、H、S、K、V或I，第27位的X为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种合成肽，其在分子结构上具有下述所示的氨基酸序列(序列号1)或该氨基酸序列中的1个或多个氨基酸残基发生了置换、缺失和/或添加而形成的氨基酸序列，CAXXLXXLXXXLXXLXGXXXXXXXXXXXXXXLXXXLXXLXXAC
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(序列号1)式中，从序列(1)的N末端起第1位的X为A、R、Q、V、L、K、F或H，第2位的X为E或H，第3位的X为A、Q、V、Y、R、L或E，第4位的X为A或S，第5位的X为E、L、H、R、G或K，第6位的X为A、K、M、R、G或Y，第7位的X为E或D，第8位的X为A、Q、R、Y、E、K或G，第9位的X为A或I，第10位的X为E、G、Y、Q、R、K或M，第11位的X为F、A、Q、V、G、I、N、R、M、D、L、S、P、K或E，第12位的X为G、V、K、T、P、R、M、N、E、D、S、C、W、H或A，第13位的X为G、R、E、F、A、K、P、N、L、V、M、D、H、T或Y，第14位的X为V、D、L、M、S、T、A、N、H、G、F、E、R、P、Y或K，第15位的X为V、K、Y、T、N、G、D、E、P、F、Q、H或I，第16位的X为Y、R、H、L、P、N、E、M、A、G、V、I或S，第17位的X为S、K、M、G、H、Q、T、V、C、L、N、A、E、P或R，第18位的X为C、S、A、T、R、E、N、Q、G、K、Y、P、L、V或M，第19位的X为E、K、S、V、L、R、G、I、F、T、A、H、Q、N、M或Y，第20位的X为W或G，第21位的X为Q、K、F或H，第22位的X为A或L，第23位的X为V、M、D、Y、K、L、I、R、S、Q、G、E、H、F、N或A，第24位的X为Y、M、R、S、K、H、G、L、N、E、V、D或A，第25位的X为H、F、Y、K、I、Q、M或V，第26位的X为Y、W、G、L、N、D、Q、E、M、F、R、H、S、K、V或I，第27位的X为K、R或Q，第28位的X为M、E、W、V、H、S、N、I、Q、Y、G、L、R、F或A，第29位的X为R、L、V、S、H、Y、F、N、K、Q、W、E、I、G或A，第30位的X为F、R、D、Q、M、K、L或H，第31位的X表示Q、G、Y、R、N、I、S、H、E、M、L、D、C、W、V或F。2.根据权利要求1所述的合成肽，其在分子结构上具有下述所示的氨基酸序列(序列号2)或该氨基酸序列中的1个或多个氨基酸残基发生了置换、缺失和/或添加而形成的氨基酸序列，CAAELAALEAELAALEGXXXXXXXXXXXXXXLKXXLXXLKXAC
···
(序列号2)式中，从序列(2)的N末端起第1位的X为F、A、Q、V、G、I、N、R、M、D、L、S、P、K或E，第2位的X为G、V、K、T、P、R、M、N、E、D、S、C、W、H或A，第3位的X为G、R、E、F、A、K、P、N、L、V、M、D、H、T或Y，第4位的X为V、D、L、M、S、T、A、N、H、G、F、E、R、P、Y或K，第5位的X为V、K、Y、T、N、G、D、E、P、F、Q、H或I，第6位的X为Y、R、H、L、P、N、E、M、A、G、V或I，第7位的X为S、K、M、G、H、Q、T、V、C、L、N、A、E或R，第8位的X为C、S、A、T、R、E、N、Q、G、K、Y、P、L、V或M，第9位的X为E、K、S、V、L、R、G、I、F、T、A、H、Q、N、M或Y，第10位的X为W或G，第11位的X为Q或K，第12位的X为A或L，第13位的X为V、M、D、Y、K、L、I、R、S、Q、G或E，第14位的X为Y、M、R、S、K、H、G、L、N、E或V，第15位的X为Y、W、G、L、N、D、Q、E、M、F、R、H、S、K或V，第16位的X为K或R，第17位的X为M、E、W、V、H、S、N、I、Q、Y、G、L或R，第18位的X为R、L、V、S、H、Y、F、N、K、Q、W、E、I或G，第19位的X表示Q、G、Y、R、N、I、S、H、E、M、L、D、C、W或V。3.根据权利要求2所述的合成肽，其中，从所述氨基酸序列(2)的N末端起第1位的X为F、A、Q、V、G、I、N、R、M、D、L、S或P，第2位的X为G、V、K、T、P、R、M、N、E、D、S、C、W或H，第3位的X为G、R、E、F、A、K、P、N、L、V或M，第4位的X为V、D、L、M、S、T、A、N、H、G、F、E或R，第5位的X为V、K、Y、T、N、G、D、E、P、G、F、Q或H，第6位的X为Y、R、H、L、P、N、E、M、A、G或V，第7位的X为S、K、M、G、H、Q、T、V、C、L、N或A，第8位的X为C、S、A、T、R、E、N、Q、G、K、Y或P，第9位的X为E、K、S、V、L、R、G、I、F、T、A或H，第10位的X为W或G，第13位的X为V、M、D、Y、K、L、I或R，第14位的X为Y、M、R、S、K、H、G、L、N或E，第15位的X为Y、W、G、L、N、D、Q、E、M、F或R，第16位的X为K，第17位的X为M、E、W、V、H、S、N、I、Q或Y，第18位的X为R、L、V、S、H、Y、F、N或K，第19位的X为Q、G、Y、R、N、I、S、H、E、M、L或D。
4.根据权利要求3所述的合成肽，其中，所述氨基酸序列(1)为选自由序列号4～26组成的组中的任意氨基酸序列。5.根据权利要求2所述的合成肽，其中，从所述氨基酸序列(2)的N末端起第1位的X为A、Q、V、G、R、L、S、K或E，第2位的X为G、V、K、T、P、R、N、E、D、S、H或A，第3位的X为E、F、A、P、N、V、M、D、H、T或Y，第4位的X为V、L、M、S、T、H、F、E、R、P、Y或K，第5位的X为...

【专利技术属性】
技术研发人员：松井勇人，榎本询子，道上雅孝，藤井郁雄，
申请(专利权)人：公立大学法人大阪，
类型：发明
国别省市：