一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用技术

发明专利技术涉及一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用。本发明专利技术以氨基树脂为载体，按照模板FRATtide：Ac

【技术实现步骤摘要】
一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及多肽药物领域，具体涉及一种抑制破骨细胞分化的订书肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]骨质疏松症是以骨量降低、骨组织显微结构发生改变，以骨脆性增加、骨强度下降、易骨折为特征的一种骨病，其病理生理学基础是骨吸收与骨形成的失衡，该平衡由促骨形成的成骨细胞和促骨吸收的破骨细胞进行调控。目前临床使用最广泛的抗骨质疏松药物主要包括抑制破骨细胞分化的双膦酸盐和促进骨形成的特立帕肽等小分子药物。为提高治疗药物的选择性，减少副作用，当前，通过外源性分子来调控成骨细胞和破骨细胞分化相关的重要信号通路已成为骨质疏松研究的热点方向之一。
[0003]本申请专利技术人在现有技术披露的众多信息中注意到，有研究表明糖原合成酶激酶3β(GSK3β)能够促进破骨细胞关键因子NFATc1从细胞核向细胞质的转移，从而抑制破骨细胞的分化；还有文献报道FRATtide与磷酸化的GSK3β能形成稳定的复合物晶体结构；而GSK3β与磷酸化GSK3β之间存在相互转化的关系，因此，本申请专利技术人推测特异性地靶向磷酸化GSK3β进而抑制磷酸化GSK3β可在一定程度上抑制GSK3β的表达，从而达到对破骨细胞的负向调控。
[0004]生物体内蛋白质之间的相互作用在生命过程中起着至关重要的作用。通过人工合成分子来调控蛋白
‑
蛋白相互作用界面是一种有效的策略，其已经广泛地应用于药物化学中以进行疾病干预，其中人工合成多肽即为调控蛋白间相互作用的一种重要手段。但因存在稳定性低，透膜性差等问题，当前，多肽类药物在临床上的应用受到了较大的限制。应用全碳骨架形成侧链环合结构改造多肽来稳定α
‑
螺旋肽的活性构象，即订书肽(stapledpeptide)，成为克服这一缺陷的最直接最有效方法。
[0005]目前现有技术公开了一些具有抑制破骨细胞分化的活性的多肽。例如专利文献CN109111506A，公开了一种用于治疗骨质疏松的多肽，其氨基酸序列为：Asp
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Ser
‑
Ser)6
‑
(D
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Tyr)
‑
Asn
‑
(D
‑
Trp)
‑
Asn
‑
Ser
‑
Phe
‑
(azaGly)
‑
Leu
‑
Arg(Me)
‑
Phe
‑
NH2((AspSerSer)6
‑
Kp
‑
10，并证明了(AspSerSer)6
‑
Kp
‑
10具有较好的骨靶向作用，可以有效地抑制破骨细胞分化，治疗由于卵巢切除导致的骨质疏松。又如专利文献CN109251242A，公开了一种多肽，该多肽不仅与天然的白细胞介素
‑
3功能相同或类似，并且皮肤渗透度非常优秀，可以通过抑制核因子κB受体活化因子配体
‑
核因子κB受体活化因子信号路径，抑制核因子κB的活化及核转录，并抑制由核因子κB受体活化因子配体及炎性细胞因子诱导的抗酒石酸盐酸性磷酸酶、组织蛋白酶K或1型或2型肿瘤坏死因子受体的表达，从而以浓度依赖性的方式抑制破骨细胞的分化。但目前未见FRATtide或其订书肽对破骨细胞分化的作用的研究。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决现有技术中的问题，提供一种抑制破骨细胞分化的订书
肽、提供所述订书肽的用途和提供所述订书肽的制备方法。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术的技术方案是：
[0008]一种订书肽，所述订书肽以Ac
‑
DPHRLLQQLVLSGNLIKEAVRRLHSR
‑
NH2为肽链模板，其中3
H
、7
Q
、19
A
和23
L
被S5替换并分别环合两次。
[0009]为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0010]将所述订书肽应用于制备治疗骨质疏松症的药物中。
[0011]将所述订书肽在应用于制备抑制破骨细胞分化的试剂中。
[0012]为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0013]所述订书肽的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)在缩合剂的作用下分别使C端首个氨基酸与固相载体偶联；
[0015](2)使用脱保护试剂脱去氨基酸上的Fmoc保护基；
[0016](3)在缩合剂作用下连接下一个氨基酸；
[0017](4)重复进行脱保护
‑
耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S5分别替代i和i+4位氨基酸；
[0018](5)在环合剂作用下使i和i+4位S5氨基酸发生烯烃复分解反应，环合肽链；
[0019](6)重复进行脱保护
‑
耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S5分别替代i和i+4位氨基酸；
[0020](7)最后一个氨基酸脱保护后乙酰化；
[0021](8)在环合剂作用下使i和i+4位S5氨基酸发生烯烃复分解反应，二次环合肽链；
[0022](9)使用切割试剂将肽链从载体上切下，纯化后得相应订书肽。
[0023]作为本专利技术的一个优选例，步骤(9)采用的纯化方法为反向高效液相色谱法，条件如下：色谱柱：YMC
‑
Pack ODS
‑
AQ柱；流动相：流动相A为0.1％TFA/水，流动相B为0.1％TFA/乙腈；梯度洗脱程序：40％B洗脱0～5min，40％B～60％B、5～60min；流速为15ml/min，进样量为5ml，检测波长214nm。
[0024]作为本专利技术的另一优选例，步骤(1)中采用的缩合剂为DIC
‑
Oxyme缩合体系，活化剂为DIC，以NMP为溶剂。
[0025]更优选地，步骤(1)中氨基酸、Oxyme、DIC的比例为1:1:1:6(mol/mol/mol/ml)或1:0.9:0.9:6(mol/mol/mol/ml)。
[0026]作为本专利技术的另一优选例，步骤(1)中固相合成时，树脂的载样量为0.3mmol/g。
[0027]作为本专利技术的另一优选例，步骤(1)中偶联反应的温度为50～60℃，更优选为55℃；偶联反应的时间为20
‑
30min，更优选为20min。
[0028]作为本专利技术的另一优选例，步骤(2)中，所述脱保护试剂为Oxyme、哌啶及DMF的混合溶液，比例为71:2:4(m/v/v)。
[0029]作为本专利技术的另一优选例，步骤(2)中，脱Fmoc保护是采用保护试剂作用5min后，再次作用5min；脱除Fmoc基团的反应温度为20～30℃，更优选为2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种订书肽，其特征在于，所述订书肽以Ac
‑
DPHRLLQQLVLSGNLIKEAVRRLHSR
‑
NH2为肽链模板，其中3
H
、7
Q
、19
A
和23
L
被S5替换并分别环合两次。2.一种如权利要求1所述的订书肽的应用，其特征在于，该订书肽用于制备治疗骨质疏松症的药物中。3.一种如权利要求1所述的订书肽的应用，其特征在于，该订书肽用于制备抑制破骨细胞分化的试剂中。4.一种制备如权利要求1所述的订书肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在缩合剂的作用下分别使C端首个氨基酸与固相载体偶联；(2)使用脱保护试剂脱去氨基酸上的Fmoc保护基；(3)在缩合剂作用下连接下一个氨基酸；(4)重复进行脱保护
‑
耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S5分别替代i和i+4位氨基酸；(5)在环合剂作用下使i和i+4位S5氨基酸发生烯烃复分解反应，环合肽链；(6)重复进行脱保护
‑
耦合操作，依照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以S5分别替代i和i+4位氨基酸；(7)最后一个氨基酸脱保护后乙酰化；(8)在环合剂作用下使i和i+4位S5氨基酸发生烯烃复分解反应，二次环合肽链；(9)使用切割试剂将肽链从载体上切下，纯化后得相应订书肽。5.根据权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宏岗，丛薇，陈思，苏笠，何世鹏，
申请(专利权)人：上海大学绍兴研究院，
类型：发明
国别省市：