一种铁蛋白重链抗体及其用途制造技术

本公开涉及一种铁蛋白重链抗体及其用途，所述抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，其中：所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与其分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与其具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3。所述抗体通过竞争性筛选，与铁蛋白重链具有较高的亲和力。与铁蛋白重链具有较高的亲和力。

【技术实现步骤摘要】
一种铁蛋白重链抗体及其用途


[0001]本公开涉及一种铁蛋白重链(Ferritin heavy chain)的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及所述的 抗体的应用。

技术介绍

[0002]铁是细胞生存必需的微量元素之一，铁缺乏导致人体的缺铁性贫血、儿童发育迟缓；但细胞内的铁过多则可诱 发自由基增多，进而造成脂质、蛋白质、碳水化合物及核酸等生物大分子的损伤，最终导致细胞死亡。铁蛋白对于 保持细胞内的铁平衡至关重要。铁蛋白(Ferritin)是一种大约450kDa的大蛋白，由24个亚基自组装成球形笼状结 构，其内部和外部尺寸分别为大约8和大约12nm，笼状结构容纳包含多达4500个铁原子的铁核。真核生物铁蛋白 包含重链(H；21kDa)和轻链(L；19kDa)。H链负责Fe(II)氧化成Fe(III)并包括催化性铁氧化酶位点，而L链在铁成 核中发挥作用。H和L链共同组装成24聚体的杂聚体铁蛋白。
[0003]铁蛋白的水平是机体健康水平的指征之一。铁蛋白水平降低是缺铁性贫血的表现，水平升高则反映了包括恶性 肿瘤、炎症、肝脏疾病和反复输血等诸多因素的影响。通常，血清铁蛋白水平维持在相对稳定的范围内，而WHO规 定男性和女性的铁蛋白正常浓度分别为30
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300ng/mL和15
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200ng/mL。血清铁蛋白的异常升高可能反映了多种疾病， 例如肝炎、肝硬化、肝癌、肺癌和白血病等。此外，血清铁蛋白的降低可导致贫血和营养不良。因此检测血清中的 铁蛋白对临床有指导价值。
[0004]同时，由于铁蛋白具有可包裹药物的笼状结构、显著的稳定性、较小且尺寸均一等特点，本领域已经尝试将铁 蛋白用作药物载体以递送药物。铁蛋白的药物递送方式可以是将药物，如小分子药物阿霉素装载在笼状空腔内。另 外，由于H
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铁蛋白具有与受体TfR1结合的活性，其能够靶向多个高表达TfR1的肿瘤组织，并能穿越血脑屏障。 因此本领域尝试用H
‑
铁蛋白作为肿瘤药物载体以及作为潜在能够穿越血脑屏障的纳米药物载体，将H
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铁蛋白与不 同的治疗剂、示踪剂等偶联亦能达到治疗和诊断的效果。
[0005]上述研究同时也引发了对于铁蛋白本身的测定的需求，虽然已经建立了一些测定铁蛋白的方法，例如电化学免 疫传感器、放射免疫分析和电感耦合等离子体质谱(ICPMS)等。尽管这些方法是相对灵敏和有着优良的选择性，但 这些仪器昂贵，操作复杂，需要特定的专业知识和训练有素的操作员。因此，快捷、方便的免疫检测方法仍是最具 有潜力的铁蛋白测定方法，但目前现存的免疫测定试剂盒由于抗体灵敏性、特异性的问题，成为免疫测定准确性和 可靠性的瓶颈，也是目前医院使用的铁蛋白免疫检测普遍灵敏度不高的原因之一。目前已经有若干关于铁蛋白抗体 的相关报道，如CN110468108B和CN105821004A公开了轻链铁蛋白的单克隆抗体和应用，但对于具有巨大载药潜力 的H铁蛋白的检测仍旧缺乏有效抗体，因此本领域仍有开发灵敏度高、特异性好的铁蛋白单克隆抗体的需求。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本公开第一方面提供了一种杂交瘤细胞株3A71B6，保藏于中
NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的3个轻链CDR；以及
[0035](ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
[0036]在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签。
[0037]在另一优选例中，所述的重组蛋白(或多肽)包括融合蛋白。
[0038]在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。
[0039]在本公开的第四方面，提供了一种抗体制剂，所述的抗体制剂包括：
[0040](a)如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段；以及
[0041](b)药学上可接受的运载体，所述的运载体包括：缓冲剂、无菌水，任选的表面活性剂。
[0042]在本公开的第五方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段、 如本公开第三方面所述的重组蛋白和/或如本公开第四方面所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。
[0043]在本公开的第六方面，提供了一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物含有：
[0044](a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段和/或如本公开第三方 面所述的重组蛋白；和
[0045](b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射 性核素和/或酶。
[0046]在本公开的第七方面，提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：
[0047](1)如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段；或
[0048](2)如本公开第三方面所述的重组蛋白。
[0049]在本公开的第八方面，提供了一种载体，所述的载体含有如本公开的第七方面所述的多核苷酸。
[0050]在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病 毒、逆转录病毒、或其他载体。
[0051]在本公开的第九方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞含有如本公开的第八方面所述的载 体或基因组中整合有如本公开的第七方面所述的多核苷酸。
[0052]在本公开的第十方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如本公开第二方面所述的抗体或 其抗原结合片段、如本公开第三方面所述的重组蛋白、如本公开第四方面所述的抗体制剂、如本公开第六方面所述 的抗体药物偶联物、如本公开第七方面所述的多核苷酸、如本公开第八方面所述的载体和/或如本公开第九方面所述 的宿主细胞，所述活性成分用于：
[0053](a)制备检测试剂或试剂盒；
[0054](b)制备预防和/或治疗铁蛋白相关疾病的药物或制剂；和/或
[0055](c)制备预防和/或治疗癌症药物或制剂。
[0056]在另一优选例中，所述癌症或肿瘤选自下组：肺癌、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、 前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃肠癌、肝癌、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病。
[0057]在本公开的第十一方面，提供了一种体外非诊断目的的检测样品中重链铁蛋白的
方法，所述方法包括步骤：
[0058](1)在体外，将所述样品与如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段、如本公开第三方面所述的重组蛋 白、如本公开第四方面所述的抗体制剂和/或如本公开第六方面所述的抗体药物偶联物接触；
[0059](2)检测是否形成抗原
‑
抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在重链铁蛋白。
[0060]在本公开的第十二方面，提供了一种体外的检测(包括诊断性目的或非诊断性目的)样品中重链铁蛋白的方法， 所述方法包括步骤：
[006本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合铁蛋白重链的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中：所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；优选地，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区；优选地，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区；优选地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列；优选地，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO.:6所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.:6所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体还包括重链恒定区和/或轻链恒定区；优选地，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的；优选地，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的；优选地，所述抗体为人源化抗体；优选地，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体和/或人源化抗体；优选地，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体；优选地，所述的抗体为单克隆抗体；优选地，所述的抗体包括单特异性、双特异性、或三特异性抗体；优选地，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'
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SH、Fv、scFv、和F(ab')2；优选地，所述抗体的重链包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的重链的氨基酸序列，或与所述杂交瘤产生的抗体的重链的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列；优选地，所述抗体的轻链包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的轻链的氨基酸序列，或与所述杂交瘤产生的抗体的轻链的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列；优选地，所述抗体包含保藏号...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯天一，郁倩文，劳芳，孙雯倩，姚德惠，张鹏飞，刘岩，阎西冲，
申请(专利权)人：昆山新蕴达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：