一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架制造技术

本发明专利技术提供一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架。一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架包括以下原材料：70～80％可酸溶胶原蛋白干粉、5～10％胎盘源免疫细胞因子、10～16％透明质酸。本发明专利技术在生物支架中融合胎盘源免疫细胞因子，使生物支架具有一定的抗癌功能。使生物支架具有一定的抗癌功能。使生物支架具有一定的抗癌功能。

【技术实现步骤摘要】
一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架


[0001]本专利技术涉及生物制品
，具体提供一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架。

技术介绍

[0002]目前国内外各项研究证实胎盘源免疫细胞可以作为多种癌症适应症的治疗方法，其中在血液系统肿瘤、神经母细胞瘤、卵巢肿瘤、横纹肌肉瘤、乳腺癌、胃癌等癌症上均取得了不错的临床治疗效果。
[0003]在治疗这些癌症的时候，有时会出现需要切割而使用生物支架提供暂时性支撑的情况。另外，癌症本身具有一定的复发概率。现有的生物支架大部分面对癌症导致的组织切除时使用的生物支架基本满足患者日常使用的功能，少部分具有促进生长愈合的作用，很少具有预防及延缓癌症的作用。

技术实现思路

[0004]为了克服现有生物支架在溶解过程中不能够预防及延缓癌症的作用的缺点。一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架包括以下原材料：70～80％可酸溶胶原蛋白干粉、5～10％胎盘源免疫细胞因子、10～16％透明质酸。
[0005]具体地，所述的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架的制备方法为：
[0006]S1：从胎盘提取免疫细胞的胎盘源免疫细胞因子；
[0007]S2：70～80％可酸溶胶原蛋白干粉、5～10％胎盘源免疫细胞因子、10～16％透明质酸后，通过醋酸水进行溶胀，形成生物支架的原料浆液；
[0008]S3：采用制冷剂对所述原料浆液进行预冻，并通过所述原料浆液与制冷剂的距离来控制制冷效果，完成后得预冻生物支架；
[0009]S4：将所述预冻生物支架再进行干燥，完成后即得所述生物支架。
[0010]具体地，所述的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架的胎盘源免疫因子的制备方法为：
[0011]T1：由胎盘中提取胎盘血；通过分离胎盘血得到PBMC细胞，PBMC细胞用培养液重悬；重悬细胞接种于T25培养瓶中时，调整细胞密度为5000～15000个/cm2；
[0012]T2：将所述T25培养瓶置于37℃，体积分数为5％的CO2培养箱培养；
[0013]T3：在T25培养瓶中分别添加IL
‑
2和IL
‑
21因子进行刺激培养，使其在培养液中浓度分别达到10～20ng/ml和50～60ng/ml，培养至21天；
[0014]T4：从细胞培养第6～12天离心收集细胞上清液，在低温环境下，将培养基超速离心，弃沉淀，取细胞上清液超滤、微滤，将获得的胎盘源免疫细胞因子浓缩液置于4℃短期保存备用；将细胞返还细胞T25培养瓶中；
[0015]T5：于无菌条件下，将上述胎盘源免疫细胞因子浓缩液等体积分装于安瓿瓶中，并置于冻干盘内，
‑
20℃预冻滤液至凝固状态，同时抽真空，升华干燥，去除冰晶，塞入卤化丁
基胶塞，加盖铝塑盖封口，于4℃保存冻干粉。
[0016]具体地，所述一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架的原料浆液其制备方法为：
[0017]S2.1：将可酸溶胶原蛋白干粉和透明质酸溶胀于醋酸水溶液中，得到生物支架原液；
[0018]S2.2：用醋酸水将胎盘源免疫细胞因子冻干粉溶解，得到胎盘源免疫细胞因子重悬溶液；
[0019]S2.3：在重悬液中添加人血白蛋白溶液进一步稀释，得到含有胎盘源免疫细胞因子的溶液；
[0020]S2.4：将生物支架原液在低温环境与胎盘源免疫细胞因子溶液进行混合，胎盘源免疫细胞因子溶液与生物支架原液的质量比为1:5～1:10。
[0021]具体地，步骤T4中，对细胞上清液的过滤包括如下步骤：
[0022]T4.1：从第6天开始每隔两天，取T25培养瓶中的培养基，移置离心管中，4℃下以1500rpm的速度离心10分钟，得到细胞上清液；
[0023]T4.2：将离心后离心管底部的沉淀重悬返还细胞T25培养瓶中。
[0024]具体地，步骤S2.2所述的胎盘源免疫因子细胞重悬溶液浓度范围在为0.5～1.0mg/ml。
[0025]具体地，对胎盘源免疫细胞因子浓缩液进行冷冻干燥包括如下步骤：
[0026]T5.1：取胎盘源免疫细胞因子浓缩液，加入5～15％冻干赋形剂，使赋形剂溶解；
[0027]T5.2：加入赋形剂后的溶液用70μm滤器过滤，随后分装入玻璃瓶中，每瓶2～5ml，盖好分叉胶塞，置冷冻干燥机中，开启如下冻干程序：
[0028]T5.2.1：在常压下预冷冻3.5小时，温度为
‑
30～
‑
40℃；
[0029]T5.2.2：开启真空泵，使真空度值为0.04mbar，在
‑
38～
‑
40℃温度下冷冻1～3小时；
[0030]T5.2.3：维持真空度不变，升温至
‑
20～
‑
25℃温度下冷冻干燥10～15小时；
[0031]T5.2.4：维持真空度不变，升温至
‑
2～2℃温度下冷冻干燥1～3小时；
[0032]T5.2.5：维持真空度不变，升温至33～37℃温度下干燥2～5小时；
[0033]T5.3：塞入卤化丁基胶塞，加盖铝塑盖封口，于4℃保存冻干粉或运输。
[0034]本专利技术具有以下优点：
[0035]1、本专利技术通过在生物支架中添加胎盘源免疫细胞因子，降低癌症患者在进行手术后癌症复发的概率，并且在一定时间内提高患者术后身体免疫力，降低术后伤口感染风险。
[0036]2、本专利技术利用胎盘源免疫因子细胞、可酸溶胶原蛋白干粉、透明质酸，实现一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架能够自行溶解，使得患者减少服药，也避免了对肝肾功能造成的损伤。
附图说明
[0037]图1为本专利技术所采用的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架的制备方法的流程示意图。
具体实施方式
[0038]为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0039]实施例1
[0040]一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架包括以下原材料：75％可酸溶胶原蛋白干粉、5％胎盘源免疫细胞因子、15％透明质酸。
[0041]一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架的制备方法，如图1所示，其步骤为：
[0042]S1：从胎盘提取免疫细胞的胎盘源免疫细胞因子；
[0043]具体地，所述的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架的胎盘源免疫因子的制备方法为：
[0044]T1：无菌条件下从人胎盘中提取胎盘血。胎盘血在37℃培养箱包被4h，后通过Ficoll密度梯度法分离提取得到PBMC细胞；PBMC细胞用培养液重悬；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架，其特征在于，包括以下原材料：70～80％可酸溶胶原蛋白干粉、5～10％胎盘源免疫细胞因子、10～16％透明质酸。2.如权利要求1所述的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架，其特征在于，所述生物支架的制备方法为：S1：从胎盘提取免疫细胞的胎盘源免疫细胞因子；S2：将70～80％可酸溶胶原蛋白干粉、5～10％胎盘源免疫细胞因子、10～16％透明质酸混合后，通过醋酸水进行溶胀，形成生物支架的原料浆液；S3：采用制冷剂对所述原料浆液进行预冻，并通过所述原料浆液与制冷剂的距离来控制制冷效果，完成后得预冻生物支架；S4：将预冻生物支架再进行干燥，完成后即得所述生物支架。3.如权利要求2所述的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架，其特征在于，所述胎盘源免疫因子的制备方法为：T1：由胎盘中提取胎盘血；通过分离胎盘血得到PBMC细胞，PBMC细胞用培养液重悬；重悬细胞接种于T25培养瓶中时，调整细胞密度为5000～15000个/cm2；T2：将T25培养瓶置于37℃，体积分数为5％的CO2培养箱培养；T3：在T25培养瓶中分别添加IL
‑
2和IL
‑
21因子进行刺激培养，使其在培养液中浓度分别达到10～20ng/ml和50～60ng/ml，培养至21天；T4：从细胞培养第6～12天离心收集细胞上清液，在低温环境下，将培养基超速离心，弃沉淀，取细胞上清液超滤、微滤，将获得的胎盘源免疫细胞因子浓缩液置于4℃短期保存备用；将细胞返还细胞T25培养瓶中；T5：于无菌条件下，将上述胎盘源免疫细胞因子浓缩液等体积分装于安瓿瓶中，并置于冻干盘内，
‑
20℃预冻滤液至凝固状态，同时抽真空，升华干燥，去除冰晶，塞入卤化丁基胶塞，加盖铝塑盖封口，于4℃保存冻干粉或运输。4.如权利要求2所述的一种富含胎盘源免疫细胞因子的生物支架，其特征在于，在步骤S2中，所述原料浆液其制备方法为：S2.1：将可酸溶胶原蛋白干粉和透明质酸溶胀于醋酸水溶液中，得到生物支架原液；S2.2：用醋酸水将胎盘源免疫细胞因子冻干粉溶解，得到胎盘源免疫细胞因子...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊升，韩忠朝，朱军辉，
申请(专利权)人：福建汉氏联合干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：