一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法技术

本发明专利技术提供一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法。一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法包括如下步骤：组织提取、细胞培养、细胞分离、细胞传代。本发明专利技术通过在组织块顶部放置细胞外基质平板，并且在培养瓶底部涂覆胶原涂层，使得组织块能够紧贴在培养瓶的底部，避免组织块漂浮，对间充质干细胞的培养造成阻碍。对间充质干细胞的培养造成阻碍。对间充质干细胞的培养造成阻碍。

【技术实现步骤摘要】
一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法


[0001]本专利技术涉及干细胞制备领域，更具体的说，它涉及一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是干细胞的一种，具有良好的自我复制能力和分化潜力，它能够分化成多种组织细胞。间充质干细胞可以刺激组织生长和修复，能够调控机体内的免疫细胞，具有高免疫调节活力。
[0003]现有的间充质干细胞大部分都是在实验室中进行，现在对于间充质干细胞的分离制备培养通常是通过酶消化法和组织块提取法，其中组织块提取法由于效率高，并且操作简单，是作为常用的手段之一，但是当进行规模化分离制备时，培养瓶中的组织块通常会漂浮起来，而漂浮在培养液中的组织块会分泌有害物质，会对细胞培养造成阻碍。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法，采用如下技术方案，一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法，包括如下步骤：
[0005]S1：组织获取
[0006]采集脐带组织，置于PBS缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有高免疫调节活力的干细胞的规模化分离制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：组织获取采集脐带组织，置于PBS缓冲液中备用；在超净工作台上，取出脐带组织，去除脐带组织上的动静脉组织，再用PBS缓冲液冲洗脐带组织上的血液和碎组织，然后再次放入PBS缓冲液备用；S2：细胞培养取出T175培养瓶，在T175培养瓶底部涂覆一层胶原薄层；将脐带组织取出，在超净工作台上将脐带组织剪碎，得到脐带组织碎块，并用PBS冲洗，去除多余的组织碎屑，然后将脐带组织碎块按一定间隔分布放置在T175培养瓶底部，放置180
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240块，在所有脐带组织碎块的顶部放置多块细胞外基质平板，然后加入1.8
‑
2.4ml完全培养液，然后将培养瓶置于培养箱进行培养18
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24h，再加入30
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50ml的完全培养液培养5
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6天，然后去除残余的培养液；再次加入35
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60ml的完全培养液继续培养6
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8天，然后去除残余的培养液；再次加入60
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80ml的完全培养液继续培养，检测其细胞融合度，当细胞融合度到达80％
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90％时，进入S4；S3：细胞分离S3.1：取出脐带组织碎块顶部的细胞外基质平板，再取出T175培养瓶底部的脐带组织碎块；S3.2：去除培养液残液，向T175培养瓶内部倒入25
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30mlPBS缓冲液，清洗T175培养瓶内部，去除清洗后的残液，重复2
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3次清洗操作；然后加入10
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20ml胰蛋白酶和5
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15mlEDTA，通过显微镜观察T175培养瓶内部的细胞形态，当观察到细胞变小变圆后加入35
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60ml的完全培养液，振荡T175培养瓶，然后将T175培养瓶内部的溶液不断抽吸对T175培养瓶底部进行吹打，重复2
‑
3次；然后将T175培养瓶内部的溶液分成五组，分别置于20ml离心管中，在1000
‑
1500rpm/min的条件下进行离心10
‑
20min；然后弃去离心管内部的上清液，用完全培养液重悬离心管底部的细胞，再将五组重悬液合并，制得细胞悬液；S4：细胞传代然后将细胞悬液进行振荡混匀，用细胞计数板对细胞悬液中的细胞进行计数，再通过密度梯度法对部分细胞悬液进行稀释，直至细胞数为0.6
×
105/cm2～2
×
105/cm2，得到细胞悬液稀释液，将细胞悬液稀释液置于另一个T175培养瓶中，向T175培养瓶中加入15
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【专利技术属性】
技术研发人员：张磊升，韩忠朝，朱军辉，
申请(专利权)人：福建汉氏联合干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：