具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环色-缬-缬-丙-亮-苯丙肽及制备方法技术

本发明专利技术涉及具有肝癌细胞毒性和α

【技术实现步骤摘要】
具有肝癌细胞毒性和
α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
缬
‑
缬
‑
丙
‑
亮
‑
苯丙肽及制备方法


[0001]本专利技术属于生物制品的提取制备
，涉及具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
缬
‑
缬
‑
丙
‑
亮
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苯丙肽（Trp
‑
Val
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Val
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Ala
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Ile
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Phe环肽）提取和纯化。

技术介绍

[0002]环色
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缬
‑
缬
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丙
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亮
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苯丙肽是从一种蛙粪霉(Basidiobolussp. )培养物中分离制备得到的具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的生物活性物质。
[0003]蛙粪霉(Basidiobolussp. )为虫霉目蛙粪霉科蛙粪霉属的真菌；在我国常见的有蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉和裂孢蛙粪霉等。上述菌种可从土壤和两栖类动物粪便中分离得到。
[0004]细胞毒性：目前，癌症在中国患发率持续增长，已成为不可忽视的公共卫生挑战。据公开数据统计，2020年全国新发肿瘤病例和死亡人数均名列全球第一，肿瘤预防与治疗道阻且。在癌症的治疗过程中，相当重要的一个环节就是药物治疗，使用有效的抗癌药物，可以帮助患病的人获得更长的生存时间。通过细胞毒性实验可以评估药物的有效性、毒性、耐药性、药物对癌细胞凋亡、增殖等作用的影响，对新的抗癌药物的研发具有重要价值。
[0005]α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性：2型糖尿病(T2DM)已成为严重的公共卫生问题，到2030年将影响全球5亿人的生活。T2DM 的特征是碳水化合物、脂质和蛋白质代谢紊乱，这是由胰腺β细胞分泌的胰岛素逐渐减少引起。α
‑
葡萄糖苷酶被确定为治疗 T2DM 和碳水化合物疾病的核心靶。位于肠细胞刷状缘表面膜的α
‑
葡萄糖苷在碳水化合物消化中将双糖或寡糖水解成单糖。因此，抑制α
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葡萄糖苷酶活性可以延缓碳水化合物的消化，从而缓解T2DM。α
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葡糖苷酶抑制剂在抑制剂与二糖或寡糖之间竞争结合到α
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葡萄糖苷酶，从而导致α
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葡萄糖苷酶的抑制活性以及碳水化合物水解和葡萄糖吸收的减少。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
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缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽及制备方法。
[0007]为寻找新型天然高效的具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的物质，专利技术人通过对中国的100余株昆虫病原真菌代谢物进行活性研究，发现了从一种蛙粪霉中提取的环色
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缬
‑
缬
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丙
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亮
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苯丙肽具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的作用。
[0008]具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
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缬
‑
缬
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丙
‑
亮
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苯丙肽的结构式如下：
所述环色
‑
缬
‑
缬
‑
丙
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亮
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苯丙肽是由色氨酸、缬氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸，以酰胺键连接而成的十五元环状五肽；所述环色
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缬
‑
缬
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丙
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亮
‑
苯丙肽具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性；对肝癌细胞HepG2的半抑制浓度（IC
50
）为：96.64 μg/mL，α
‑
葡萄糖苷酶的半抑制浓度（IC
50
）为：54.44 μg /mL。
[0009]具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽的制备操作步骤如下：（1）菌种培养将蛙粪霉（Basidiobolussp.）经过斜面菌种培养、二级液体种子培养、三级液体种子培养和四级培养，得到液体的最终发酵物或固体的最终发酵物；所述蛙粪霉（Basidiobolussp.）为蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉或裂孢蛙粪霉中的一种；（2）最终发酵物中有效成分的提取和精制用甲醇或乙醇提取最终发酵物中的有效成分，采用反相色谱方法纯化，得到白色粉末状的环色
‑
缬
‑
缬
‑
丙
‑
亮
‑
苯丙肽。
[0010]进一步限定的制备技术方案如下：所述步骤（1）的具体操作如下：（1.1）斜面种子培养将蛙粪霉菌株接种于土豆琼脂（PDA）斜面培养基，于25～36℃恒温、培养4～8d，得到一级菌种；（1.2）二级液体种子培养将一级菌种接种至液体摇瓶培养基培养；在大于等于100 ml三角瓶中加入30～50%三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种1～3支斜面菌种，在恒温振荡培养箱中，温度25～36℃、转速150～250 rpm条件下，培养3～7d，即得到二级菌种；液体摇瓶培养基由葡萄糖25.0～50.0 g/L、麦芽提取物10.0～30.0 g/L、蛋白胨2.0～6.0 g/L、酵母浸出粉1.0～4.0 g/L、氯化钾（KCl）0.3～2.0 g/L、七水硫酸镁（MgSO4.7H2O）0.3～2.0 g/L、磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3～2.0 g/L；（1.3）三级液体种子培养将二级菌种接种到大于等于5L的发酵罐，装液量为罐体积的50～80%，接种量3～10%，在通气量按体积比1:1～2（v/v）、压力0.1～0.2MP、25～36℃条件下，恒温通气培养2～5天，得到三级菌种；
发酵罐中的培养基同步骤（1.2）中的液体培养基；（1.4）四级培养四级培养为液体培养，将三级菌种接种到大于等于50L的发酵罐，装液量为罐体积的50～80%，接种量3～10%，在通气量按体积比1:1～2（v/v）、压力0.1～0.2MP、25～36℃条件下，恒温通气培养5～15天，得到液体的最终发酵物；发酵罐中的培养基步骤（1.2）中的液体培养基。
[0011]所述步骤（1.4）中，四级培养为固体培养，将三级液体菌种拌入固体培养基中，接种量为固体料量的3～10%， 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
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缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽，其特征在于：所述环色
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缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽的结构式如下：所述环色
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缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽是由色氨酸、缬氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸，以酰胺键连接而成的十五元环状五肽；所述环色
‑
缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性；对肝癌细胞HepG2的半抑制浓度（IC
50
）为：96.64 μg/mL，α
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葡萄糖苷酶的半抑制浓度（IC
50
）为：54.44 μg /mL。2.权利要求1所述具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
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缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽的制备方法，其特征在于操作步骤如下：（1）菌种培养将蛙粪霉（Basidiobolussp.）经过斜面菌种培养、二级液体种子培养、三级液体种子培养和四级培养，得到液体的最终发酵物或固体的最终发酵物；所述蛙粪霉（Basidiobolussp.）为蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉或裂孢蛙粪霉中的一种；（2）最终发酵物中有效成分的提取和精制用甲醇或乙醇提取最终发酵物中的有效成分，采用反相色谱方法纯化，得到白色粉末状的环色
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缬
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缬
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丙
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亮
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苯丙肽。3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于所述步骤（1）的具体操作如下：（1.1）斜面种子培养将蛙粪霉菌株接种于土豆琼脂（PDA）斜面培养基，于25～36℃恒温、培养4～8d，得到一级菌种；（1.2）二级液体种子培养将一级菌种接种至液体摇瓶培养基培养；在大于等于100 ml三角瓶中加入30～50%三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种1～3支斜面菌种，在恒温振荡培养箱中，温度25～36℃、转速150～250 rpm条件下，培养3～7d，即得到二级菌种；液体摇瓶培养基由葡萄糖25.0～50.0 g/L、麦芽提取物10.0～30.0 g/L、蛋白胨2.0～6.0 g/L、酵母浸出粉1.0～4.0 g...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡丰林，陆瑞利，赵铖，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：