重组III型胶原水凝胶组合物、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了重组III型胶原水凝胶组合物、制备方法及应用。该重组III型胶原水凝胶组合物，其以百分比计，包含1～10％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、0.0001～2.5％(w/v)重组III型胶原、0.05～5％(w/v)PEG400、10～35％(v/v)的乙醇，余量为水。该水凝胶为一种温敏性的重组III型胶原水凝胶，其利用对罗望子木葡聚糖进行改性得到的酶解酯化罗望子木葡聚糖进行包裹，不仅具有皮肤修复功能，还对炎症皮肤具有治愈作用，并且特殊的空间构象预料不到的对重组III型胶原的释放效果能够保持长期有效，具有作为医用皮肤修复凝胶、妇科修复凝胶、面膜等应用前景。面膜等应用前景。面膜等应用前景。

【技术实现步骤摘要】
重组III型胶原水凝胶组合物、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及重组III型胶原水凝胶
，尤其涉及重组III型胶原水凝胶组合物、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]重组III型胶原蛋白(recombinant human collagen III，Rhc
‑
III)是利用基因工程技术以人胶原III型原始基因序列经过优化重组表达得到的，与人体天然胶原氨基酸序列高度一致。将Rhc
‑
III用于创伤愈合，一方面Rhc
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III具有丰富的亲水基团，可以增加成纤维细胞的粘附和增殖，另一方面可以直接补充创面的III型胶原蛋白，降低瘫痕的发生几率。但是水溶性的Rhc
‑
III难以穿透角质层细胞间的脂质结构，且作用时间短，因此，需要依靠载体的帮助穿透角质层，延长其作用时间，从而达到与其治疗的效果。
[0003]但是RhC
‑
III作为生物药物载体，存在着易被酶解、热不稳定的问题，且水溶性的RhC
‑
III难以穿透角质层细胞间的脂质结构，为了解决这些问题，需要对其进行合理的制剂学设计。
[0004]对于高亲水性和稳定性差的生物大分子类药物，其经皮给药技术主要包括微针、离子电渗、超声介导、脂质囊泡和脂质体等。脂质体中的磷脂结构与人体的皮肤脂质相似，所以脂质体的生物相容性高，生物降解性好，能够促进药物的透皮吸收，因此，脂质体作为经皮给药载体有着良好的应用前景。例如，“重组人源III型胶原蛋白脂质体凝胶剂的制备及其促创伤愈合的研究[D]山东大学硕士学位论文，2021年5月”公开了采用以蛋黄卵磷脂和胆固醇作为脂质体，制备重组III型胶原水凝胶具有良好的凝胶性能，在48h内持续释放重组III型胶原蛋白，并且无皮肤毒性，能够修复破损皮肤。然而，开发新型重组III型胶原水凝胶，提高其释药时间，赋予其具有更加优异的生物相容性和生物体敏感性仍然具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种重组III型胶原水凝胶组合物、制备方法及应用，以在一定程度上解决上述技术问题之一。
[0006]第一方面，本专利技术实施例公开了一种重组III型胶原水凝胶组合物，其以百分比计，包含1～10％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、0.0001～2.5％(w/v)重组III型胶原、0.05～5％(w/v)PEG400、10～35％(v/v)的乙醇，余量为水。
[0007]进一步的，所述重组III型胶原水凝胶组合物，以百分比计，包含2％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、0.2％(w/v)重组III型胶原、5％(w/v)PEG400、35％(v/v)的乙醇，余量为水。
[0008]进一步的，所述重组III型胶原水凝胶组合物，以百分比计，包含4％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、1.5％(w/v)重组III型胶原、5％(w/v)PEG400、35％(v/v)的乙醇，余量为水。
[0009]进一步的，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的酯化度为74.8～91.2％，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的半乳糖含量为37.8～41.4％，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的分子量为17500～19200。
[0010]第二方面，本专利技术实施例公开了一种重组III型胶原水凝胶组合物的制备方法，所述重组III型胶原水凝胶组合物，以百分比计，包含4％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、1.5％(w/v)重组III型胶原、5％(w/v)PEG400、35％(v/v)的乙醇，余量为水；按照配方量配制该重组III型胶原水凝胶组合物。
[0011]进一步的，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的制备方法包括：
[0012]将罗望子木葡聚糖溶于水甲酰胺中，充分搅拌混匀后，将其加入到己经制备好的酯化试剂中，此反应装置置于恒温水浴中搅拌反应，反应完成后，冷却，用4mol/L的NaOH调节pH至7，蒸馏水透折96h，浓缩、冷冻干燥得酯化罗望子木葡聚糖；
[0013]将所述酯化罗望子木葡聚糖用0.1M醋酸钠缓冲液配制成浓度为2％(w/v)的pH＝5母液；向母液中加入β
‑
半乳糖苷酶于50℃下反应20h得到酶解酯化罗望子木葡聚糖。
[0014]进一步的，所述酯化罗望子木葡聚糖经纯化后再进行β
‑
半乳糖苷酶酶解，其中，所述纯化的步骤包括：
[0015]将所述酯化罗望子木葡聚糖溶解在去离子水中，离心去除不溶物后，向上清液中逐滴加入无水乙醇至乙醇浓度为80％(v/v)，离心后的沉淀用无水丙酮和无水乙醚洗涤，各重复三次，最后的沉淀经冷冻干燥，得到纯度较高的酯化罗望子木葡聚糖。
[0016]第三方面，本专利技术实施例公开了所述重组III型胶原水凝胶组合物、或所述制备方法制得的重组III型胶原水凝胶组合在制备医用皮肤修复凝胶和/或妇科修复凝胶中的应用。
[0017]与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果：
[0018]本专利技术提供了一种温敏性的重组III型胶原水凝胶，其利用对罗望子木葡聚糖进行改性得到的酶解酯化罗望子木葡聚糖进行包裹，不仅具有皮肤修复功能，还对炎症皮肤具有治愈作用，并且对重组III型胶原的释放效果能够保持长期有效，具有作为医用皮肤修复凝胶、妇科修复凝胶、面部护理面膜等应用前景。
附图说明
[0019]图1为本专利技术提供的咪唑
‑4‑
S,S
‑
二硫羧酸(A)、罗望子木葡聚糖(B)和酯化罗望子木葡聚糖(C)的HPLC图。
[0020]图2为本专利技术实施例1提供的罗望子木葡聚糖(A)和酯化反应产物(B)的FT
‑
IR图。
[0021]图3为本专利技术实施例1提供的重组III型胶原水凝胶作用L929细胞前(A)和作用后(B)的细胞微观图。
[0022]图4为本专利技术实施例1～7提供的重组III型胶原水凝胶释放分别在pH为2.0、5.0和7.8以及37℃的释放曲线。
[0023]图5为本专利技术对比例1～8提供的重组III型胶原水凝胶释放分别在pH为2.0、5.0和7.8以及37℃的释放曲线。
[0024]图6为本专利技术动物实验中试验组(A和B分别代表实施例1和2给药后的小鼠皮肤组织)和对照组(C和D分别代表对比例2和3给药后的小鼠皮肤组织)的HE染色图。
[0025]图7为本专利技术动物实验中试验组(A和B分别代表实施例1和2给药后的小鼠皮肤组织)和对照组(C和D分别代表对比例2和3给药后的小鼠皮肤组织)的BrdU免疫荧光染色图。
具体实施方式
[0026]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0027]本专利技术实施例对罗望子木葡聚糖进行改性，得到了一种具有明显适用于人体温度的温敏性水凝胶，该水凝胶包裹重组III型胶原不仅具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长效重组III型胶原水凝胶组合物，其以百分比计，包含1～10％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、0.0001～2.5％(w/v)重组III型胶原、0.05～5％(w/v)PEG400、10～35％(v/v)的乙醇，余量为水。2.根据权利要求1所述的重组III型胶原水凝胶组合物，其特征在于，以百分比计，包含2％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、0.2％(w/v)重组III型胶原、5％(w/v)PEG400、35％(v/v)的乙醇，余量为水。3.根据权利要求1所述的重组III型胶原水凝胶组合物，其特征在于，以百分比计，包含4％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、1.5％(w/v)重组III型胶原、5％(w/v)PEG400、35％(v/v)的乙醇，余量为水。4.根据权利要求1所述的重组III型胶原水凝胶组合物，其特征在于，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的酯化度为74.8～91.2％，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的半乳糖含量为37.8～41.4％，所述酶解酯化罗望子木葡聚糖的分子量为17500～19200。5.一种重组III型胶原水凝胶组合物的制备方法，其特征在于，所述重组III型胶原水凝胶组合物，以百分比计，包含4％(w/v)酶解酯化罗望子木葡聚糖、1.5％(w/v)重组III型胶原、5％(w/v)PEG400、35％(v/v...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵策，
申请(专利权)人：浙江双糖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：