跨膜蛋白106A在制备抗手足口病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种跨膜蛋白106A在制备抗手足口病药物中的应用。所述跨膜蛋白106A(TMEM106A)具有通过干扰肠病毒吸附至宿主细胞表面而发挥抗EV71和CVA16病毒的活性，具有开发为治疗手足口病的药物的潜在应用价值。开发为治疗手足口病的药物的潜在应用价值。开发为治疗手足口病的药物的潜在应用价值。

【技术实现步骤摘要】
跨膜蛋白106A在制备抗手足口病药物中的应用


[0001]本专利技术属于医药新用途领域。更具体地，涉及跨膜蛋白106A(TMEM106A)在制备抗手足口病药物中的新用途。

技术介绍

[0002]手足口病(HFMD)是由肠道病毒引起的急性传染病，主要在5岁以下儿童中发病。HFMD主要临床症状为手、足、口腔等部位斑丘疹、疱疹，重症患者可出现严重的神经系统疾病，甚至死亡。引发HFMD的肠道病毒有20多种(型)，其中以柯萨奇病毒A16型(CVA16)和肠道病毒71型(EV71)最为常见，其它不同型的肠道病毒和柯萨奇病毒也可致病。EV71和CAV16具有高度传染性，感染呈全球性分布，特别是在亚太地区，所引起的手足口病已成为一种严重危害社会公众健康的疾病。由于缺乏特异、高效的抗病毒药物，根据手足口病诊疗指南(2018年版)，目前主要采取隔离和对症治疗。因此，急需抗EV71和CVA16等肠病毒药物的研制与开发。
[0003]肠道病毒是非包膜的RNA正链病毒，是一种二十面体病毒颗粒，由四种结构蛋白VP1、VP2、VP2、VP3、VP4组成病毒衣壳结构。EV71和CVA16病毒主要使用宿主编码的受体清清夫受体B类成员2(SCARB2)或p
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选择素糖蛋白配体
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1作为受体与宿主细胞结合。与受体结合后，病毒粒子通过内吞作用进入细胞；内吞小体的酸性环境促进了病毒颗粒的脱壳和病毒RNA的释放；正链RNA通过位于其5
‘‑
非翻译区(5
’‑
UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)来指导病毒蛋白的翻译；合成的病毒多聚蛋白经病毒编码的蛋白酶2A和3C作用后切割成功能蛋白；病毒外壳与病毒基因组RNA组装成熟的病毒颗粒，经宿主细胞裂解后释放。
[0004]宿主细胞通过膜表面模式识别受体特异性结合病毒的模式分子来感知病毒感染，并激活干扰素(IFN)转录表达；IFN蛋白合成分泌后激活细胞的IFN信号通路促使细胞产生抗病毒应答，其中干扰素刺激基因(ISG)的表达上调发挥了关键的抗病毒作用。跨膜蛋白106A(TMEM106A)是一种II型跨膜蛋白，全长262个氨基酸，经鉴定为一种肿瘤抑癌基因；同时在巨噬细胞质膜上组成性表达，具有调节巨噬细胞M1极化和促炎的功能。研究还发现TMEM106A的表达受IFN的调控，细胞经IFN
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α2b刺激后，TMEM106A的表达显著上调，是一种ISG。进一步研究发现，TMEM106A具有抗人免疫缺陷病毒I型(HIV
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1)和其他包膜病毒的活性，通过捕获病毒颗粒的释放来发挥抗病毒活性，该活性依赖于质膜和病毒包膜的相互作用。TMEM106A是否具有抑制非包膜病毒如EV
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A71或其他肠道病毒的活性，尚未见任何相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种跨膜蛋白106A(TMEM106A)的新用途，即抗肠病毒EV71和柯萨奇病毒CAV16等病毒，从而用于制备治疗手足口病的药物，同时为手足口病药物研发提供可能的作用靶位和新思路。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0007]本专利技术提供了一种跨膜蛋白106A在制备抗肠病毒感染所致手足口病药物中的应用。
[0008]进一步的，所述肠病毒为柯萨奇病毒A16型或肠道病毒71型。
[0009]本专利技术鉴定出跨膜蛋白106A具有抗肠道病毒EV71和CVA16的活性，提示IFN介导的抗EV
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A71和CV
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A16感染存在新机制；重要的是，TMEM106A具有开发为手足口病治疗药物的潜在应用价值，为手足口病治疗提供了一种新策略和新思路。
附图说明
[0010]图1TMEM106A稳定表达细胞株293A
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SCARB2
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TMEM106A的抗肠病毒活性分析；将EV71
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MZ(A)、CVA16
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GZ(B)分别感染293A
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SCARB2
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TMEM106A细胞和表达空白载体的对照细胞(293A
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SCARB2
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Ctrl)，MOI为0.01；感染后24h、36h、48h和60h分别取上清，用TCID50检测不同时间点的病毒产量。数据为三次独立实验的平均值
±
标准差。
[0011]图2通过RNAi技术合并病毒感染考察TMEM106A表达抑制后对IFN
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α2b抗EV71复制活性的影响；将106A
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shRNA转染293A
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SCARB2和Vero细胞，以空白载体pSUPER
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GFP(Ctrl)为对照，转染24小时后流式分选GFP阳性细胞，然后用IFN
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α2b处理12小时，采用RT
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qPCR检测TMEM106AmRNA水平，以GAPDH mRNA水平为内对照，与转染对照质粒的细胞相比，评估其敲除效率(A)；上述流式分离的GFP阳性细胞，用IFN
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α2b刺激12h后，感染EV
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A71(MOI＝0.1)感染12小时，采用RT
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qPCR方法检测病毒蛋白酶2C mRNA水平，以GAPDH mRNA水平作为内对照。对照细胞和106A
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shRNA转染细胞之间的统计学差异采用t检验。
[0012]图3TMEM106A对EV71附着和内吞的影响；将对照细胞(293A
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SCRB2
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Ctrl)和TMEM106A表达细胞(293A
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SCRB2
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TMEM106A)与EV71(MOI＝100)在4℃孵育1小时，使用抗EV
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A71VP2的一抗和Alexa
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Fluor555偶联的二抗检测EV71病毒颗粒，用DAPI染色显示细胞核，考察TMEM106A对EV71吸附宿主细胞的影响(左)；将上述细胞和病毒在4℃孵育1小时后置于37℃孵育1小时，进行同样的荧光免疫分析，考察TMEM106A对细胞内吞EV71的影响(右)。
[0013]图4通过EV71
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GFP RNA转染分析TMEM106A对病毒蛋白翻译的影响。将体外转录的病毒EV71
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GFP RNA转染293A
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SCRB2
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TMEM106A细胞，以293A
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SCRB2细胞为对照，转染后9h、12h、18h、24h用荧光显微镜观察GFP的表达情况(A)，每种细胞计数100个视野，计算平均每个视野中的GFP阳性(GFP
+
)细胞数(B)。
具体实施方式
[0014]为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例对本专利技术做进一步的说明。本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.跨膜蛋白106A在制备抗肠病毒感染所致手足口病药物中的应用。2.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭学敏，曾施暖，孟小斌，雷南凤，
申请(专利权)人：梅州市人民医院梅州市医学科学院，
类型：发明
国别省市：