细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白的应用制造技术

本发明专利技术公开了细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白在制备治疗哮喘药物中的应用。本发明专利技术将来源于中国大陆株的细粒棘球蚴的重组抗原亲肌肉抗原重组蛋白(NCBI的基因序列号为Z29075))对由卵清白蛋白(OVA)引起的哮喘小鼠模型进行干预，结果发现，本发明专利技术亲肌肉抗原重组蛋白用于制备治疗哮喘药物，该药物能有效升高Th1和Treg细胞数量，降低Th2和Th17细胞数量，降低哮喘中的炎症因子并升高哮喘中降低的IL

【技术实现步骤摘要】
细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白的应用


[0001]本专利技术属于生物制药
，尤其涉及一种细粒棘球蚴(中国大陆株)亲肌肉抗原重组蛋白在制备治疗哮喘药物中的应用。

技术介绍

[0002]哮喘是世界上最常见的慢性炎症性疾病之一，对公众健康构成严重威胁。哮喘的发病机制十分复杂，通常认为哮喘是与遗传因素，急性呼吸道感染，气道反应性增高、精神因素和不稳定的环境等有着一定的关系。过敏性哮喘是最常见的哮喘类型，通常是由环境过敏原的存在来定义的。近几十年来，过敏性哮喘在全世界儿童和成人中变得越来越普遍。过敏性哮喘患者的气道分泌物和CD4
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Th2淋巴细胞及其相关细胞因子(IL
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4)升高是过敏性哮喘的标志特征；嗜酸性粒细胞增多可能与气道阻塞相关，可预测哮喘加重；现如今对于哮喘的治疗主要是采用扩张支气管、抗炎和抗过敏的药物，如糖皮质激素、长效β2受体激动剂、抗IgE的单克隆抗体以及一些急救药物等。这些治疗可以通过有效管理，实现对过敏性哮喘的暂时控制，但药物的副作用以及耐药性等问题尚不能很好的解决。

技术实现思路

[0003]为克服现有技术的缺点和不足，本专利技术的目的在于提供一种细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白在制备治疗哮喘药物中的应用。
[0004]本专利技术是这样实现的，一种细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白在制备治疗哮喘药物中的应用，该重组蛋白的氨基酸序列公开在NCBI中，其基因序列号为Z29075。
[0005]优选地，所述重组蛋白通过降低哮喘鼠中Th2和Th17细胞数量及炎症因子的表达，以及通过增加Th1和Treg型的细胞数量、升高哮喘中降低的IL
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10细胞因子水平来治疗哮喘。
[0006]优选地，所述哮喘为由卵清白蛋白所致的气道炎症。
[0007]优选地，所述治疗包括预防、干预和/或缓解。
[0008]优选地，所述药物还含有一种或者是至少两种药学上可以接受的载体；所述载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂和润滑剂中的至少一种。
[0009]优选地，所述亲肌肉抗原重组蛋白来源于中国大陆株的细粒棘球蚴。
[0010]本专利技术克服现有技术的不足，提供一种细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白在制备治疗哮喘药物中的应用。基于“卫生假说”，本专利技术认为现代卫生保健和医疗措施创造的相对清洁的环境，减少了人们暴露于细菌、病毒和真菌等病原体的机会，从而引起免疫系统的失衡，最终导致过敏性疾病增加的现象。现已发现，细粒棘球绦虫的感染可明显抑制由OVA诱导的小鼠气道炎症
[1～2]，但通过成虫感染存在一定的生物安全性及副作用，因此本专利技术将来源于中国大陆株的细粒棘球蚴的重组抗原亲肌肉抗原重组蛋白(NCBI的基因序列号为Z29075)对由OVA引起的哮喘小鼠模型进行干预，通过肺组织苏木素
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伊红(HE)染色反映肺
部组织炎症、马松(masson)染色检测肺组织纤维化程度，过氧化物酶(MPO)组织化学染色观察肺组织中性粒细胞的表达水平；流式细胞术检测肺组织嗜酸性粒细胞水平反映炎症细胞浸润程度；肺组织流式细胞术检测小鼠肺组织辅助性T细胞(Th1、Th2、Th17细胞)和调节性T细胞(Treg细胞)水平，通过多重液相蛋白定量技术检测小鼠血浆中细胞因子的变化水平。结果发现，经过亲肌肉抗原重组蛋白的哮喘小鼠，可明显降低肺组织的炎症细胞的浸润及纤维化程度，上调Th1和Treg细胞水平，下调Th2和Th17细胞水平，从而可有效缓解小鼠气道炎症，因此，可以作为治疗哮喘疾病的有效候选药物之一。
[0011]相比于现有技术的缺点和不足，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白用于制备治疗哮喘药物，该药物能有效升高Th1和Treg细胞数量，降低Th2和Th17细胞数量，降低哮喘中的炎症因子并升高哮喘中降低的IL
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10型细胞因子，能对哮喘起到很好的预防、干预和/或缓解效果，并且，该药物还具有副作用小、耐药性低的特点。
附图说明
[0012]图1是本专利技术实施例的实验操作流程图；
[0013]图2是专利技术实施例OVA诱导的哮喘小鼠模型造模方法；
[0014]图3是肺部的病理切片染色图；其中，图A为肺组织HE切片染色图，图B为肺组织MASSON切片染色图，图C为肺组织过碘酸
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雪夫PAS切片染色图，图D为肺组织MPO切片染色图；
[0015]图4是肺组织嗜酸性粒细胞数量；
[0016]图5是肺组织Th2细胞数量；
[0017]图6是肺组织Th1细胞数量；
[0018]图7是肺组织Treg细胞数量；
[0019]图8是肺组织Th17细胞数量；
[0020]图9是血清中Th1/Th2/Th17细胞因子的数量；
[0021]图3～9中，Con为空白对照组，Con+rEg.myo为空白对照组+亲肌肉抗原重组蛋白对照组，OVA为哮喘模型组，OVA+rEg.myo为哮喘模型组+亲肌肉抗原重组蛋白处理组。
具体实施方式
[0022]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0023]本专利技术实施例的整体操作思路，如图1所示，具体包括以下内容：
[0024]一、OVA诱导造模
[0025]取6～8周的雌性BALB/C雌鼠分为四组，每组6只。OVA诱导的哮喘小鼠模型造模方法，如图2所示，具体为：
[0026](1)在0、7、14天向小鼠腹腔注射200μL致敏液，即20μg OVA和2mg氢氧化铝乳化后定容于PBS溶液中；
[0027](2)21～27天用含100μg OVA总体积为50μL的PBS溶液进行滴鼻来激发。
[0028]二、中国大陆株细粒棘球蚴的重组抗原亲肌肉抗原重组蛋白(NCBI的基因序列号为Z29075)的用药
[0029](1)亲肌肉抗原重组蛋白哮喘鼠处理组为(OVA+rEg.myo)：在OVA诱导造哮喘模型的基础上在
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1、6、13天皮下注射亲肌肉抗原重组蛋白20μg(PBS，1μg/μL)；
[0030](2)空白对照组小鼠(Con)：PBS代替致敏液，给药剂量及给药方式与上述哮喘鼠处理组相同；
[0031](3)空白对照组+亲肌肉抗原重组蛋白对照组(Con+rEg.myo)：空白对照组小鼠在
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1、6、13天皮下注射亲肌肉抗原重组蛋白20μg。
[0032]第28天剖杀小鼠，各组分别提取肺组织的单个核细胞做流式分析以及肺部病理切片，保留血浆，通过流式细胞术检测Th1、Th2、Th17的数量，通过多重液相蛋白定量技术检测相关细胞因子，具体操详见文献
[3]。
[0033]三、实验结果
[0034]1、肺部的病理切片，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细粒棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白在制备治疗哮喘药物中的应用，该重组蛋白的氨基酸序列公开在NCBI中，其基因序列号为Z29075。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组蛋白通过降低哮喘鼠中Th2和Th17细胞数量及炎症因子的表达，以及通过增加Th1和Treg型的细胞数量、升高哮喘中降低的IL
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10细胞因子水平来治疗哮喘。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵嘉庆，赵巍，史春丽，肖静，吴建文，白敏，辛云卓，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：