经修饰的TFF2多肽制造技术

本文描述了经修饰的TFF2多肽、包含这些多肽的组合物和它们用于治疗癌症和炎症的用途。肽的组合物和它们用于治疗癌症和炎症的用途。肽的组合物和它们用于治疗癌症和炎症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的TFF2多肽
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年8月27日提交的美国临时申请号62/892,520、2019年12月4日提交的美国临时申请号62/943,803和2020年6月18日提交的美国临时申请号63/041,097的优先权，它们的内容特此通过引用整体并入。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，其已经以ASCII格式电子地提交，且特此通过引用整体并入。所述ASCII副本创建于2020年8月27日，命名为104545
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0046
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WO1_SL.txt，大小是37,566字节。


[0005]本公开内容属于使用经修饰的TFF2多肽治疗患有癌症和/或炎性病症的受试者的领域。

技术介绍

[0006]三叶家族因子
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2(TFF2)(也被称作胰腺解痉多肽、PSP，或解痉肽、SP)是三叶因子肽家族的一个成员。人TFF2是一种106个氨基酸的分泌蛋白。成熟的人TFF2是一种12kDa蛋白，其含有被七个残基隔开的两个三叶结构域，其在包括猪在内的其它物种中是高度保守的。已经解析了猪TFF2的晶体结构(De A等人,(1994)Proc Natl Acad Sci USA 91(3):1084
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8)。猪TFF2的溶液结构已通过NMR进行了研究(Carr,MD等人,(1994)Proc Natl Acad Sci USA 91(6):2206
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10)。在三叶结构域中有六个保守的半胱氨酸残基，它们形成三个分子内二硫键，从而产生以三环结构堆叠的三个环(May FEB,等人(2000),Gut,46:454
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459)。在胃液中的一部分人TFF2通过N
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键被糖基化，可能是在Asn(15)上(May FEB等人,Gut 2000 46(4):454
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9)。
[0007]TFF2主要在十二指肠的Brunner氏腺中和人胃窦中表达，并已被证明在胃和肠腔中具有功能性作用(Jorgenson,K.H.,和Jacobsen H.E.,(1982)Regul Pept.,3:207
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219)。胃泌素已被证明通过胃泌素响应性顺式作用元件和通过信号传导途径调节TFF2启动子(Tu,S.等人,(2007),Am J Physiol.Gastrointest Liver Physiol.,292(6):G1726
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37)。在邻近粘膜溃疡的细胞中也发现高浓度的TFF2(Wright N.A.,Poulsom R.,Stamp G.W.(1990)J Pathol.；162:279
‑
284)。
[0008]敲除(KO)小鼠中的TFF2缺乏会加重葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎(Judd LM等人,Am J.Physiol Gatrointest Liver Physiol.(2015)308(1):G12
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24)。有人认为，TFF2通过稳定和增强粘蛋白凝胶、减少炎症和刺激上皮重建来保护胃肠道粘膜免受损伤。Cook等人证实了TFF2由淋巴细胞表达并在淋巴细胞上有活性(Cook等人,(1999),FEBS Lett.,456(1):155
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9)。Dubeykovskaya等人证实，TFF2是一种淋巴细胞激活多肽，并充当CXCR4受体(也被称作C
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X
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C趋化因子受体4型、融合素或CD184)的激活配体(Dubeykovskaya,Z.Dubeykovskaya,A.,Wang,J.,(2009),J Biol Chem.,284(6):3650
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62)。TFF2也在脾脏中
表达，并且认为循环中的TFF2具有免疫调节作用(Dubeykovskaya Z,等人.Nat Commun.(2016),7:1
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11)。
[0009]外源性TFF2具有差的药代动力学，并被迅速从血浆中消除。通过将TFF2的C
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端与人绒毛膜促性腺激素β亚基的羧基端肽(CTP)进行基因融合，并进一步融合Flag尾，产生了经修饰的TFF2(TFF2
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CTP
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Flag)。重组TFF2
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CTP
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Flag蛋白已被证明抑制结肠肿瘤生长(Dubeykovskaya,Z.A.等人,(2019),Cancer Gene Therapy,26:48
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57)。还已经报道，重组TFF2对胰腺癌具有免疫抑制作用(Sung,Gi
‑
Ho,等人,(2018),Animal Cells and Systems,22:6,368
‑
381)。
[0010]TFF2是一种有吸引力的癌症生物治疗，原因在于它在胃等恶劣的pH环境中是稳定的。已知肿瘤微环境(TME)是低pH，这可以减少其它癌症药剂(诸如单克隆抗体)的结合。

技术实现思路

[0011]本公开内容提供了经修饰的TFF2多肽的组合物，所述经修饰的TFF2多肽具有增强的生物活性和药代动力学性质，诸如增加的稳定性和/或体内效能。
[0012]在某些实施方案中，使用化学修饰实现所公开的经修饰的TFF2多肽的改进性质，所述化学修饰包括聚乙二醇化或聚(D,L
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乳酸
‑
共
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羟乙酸)(PLGA)和/或聚唾液酸化(PSA)和/或融合蛋白(包括具有人绒毛膜促性腺激素β亚基的C端肽(CTP)、PAS化、同型氨基酸聚合物(HAP)、弹性蛋白样肽(ELP化)、XTEN化的融合蛋白)和这些修饰的组合。
[0013]如本文中使用的，通过聚乙二醇化、PAS化、PLGA缀合和/或PSA
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缀合或具有HAP、ELP化、XTEN化或人绒毛膜促性腺激素β亚基的CTP的融合蛋白和这些修饰的组合修饰的TFF2多肽被称作经修饰的TFF2多肽。
[0014]本公开内容提供了经修饰的TFF2多肽的组合物，所述经修饰的TFF2多肽包括聚乙二醇化的TFF2、PAS化的TFF2、PLGA修饰的TFF2和/或PSA修饰的TFF2或TFF2融合蛋白(例如，与CTP
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肽的融合蛋白、与HAP的融合蛋白或ELP化的TFF2)和这些修饰的组合，以及这些经修饰的TFF2多肽用于治疗癌症、增生、发育异常、炎性病症、消化系统炎症和/或在COVID
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19中发生的任何症状的用途。
[0015]如本文中定义的，术语“有效量”是指经修饰的TFF2多肽的量，该量是至少部分地获得期望的应答、或延迟发作或抑制进展、或完全停止正在治疗的特定病症的发作或进展所必需的量。
[0016]在某些实施方案中，所述经修饰的TFF2多肽是同质的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含经修饰的TFF2多肽的组合物，其中所述TFF2多肽通过以下一种或多种进行修饰：聚乙二醇化、聚唾液酸化、聚(D,L
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乳酸
‑
共
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羟乙酸)(PLGA)
‑
缀合和/或包含人绒毛膜促性腺激素β亚基的C端肽(CTP)、PAS化、XTEN化、ELP化或HAP化的融合蛋白。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽具有与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的多肽序列。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少95％氨基酸序列同一性。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:6的多肽序列。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽用低分子量直链PEG聚乙二醇化。6.根据权利要求1
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4中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽用高分子量支链PEG聚乙二醇化。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽是选自以下的同质群体：聚乙二醇化，聚唾液酸化，PLGA缀合和具有人绒毛膜促性腺激素β亚基的CTP、PAS化、XTEN化、ELP化和HAP化的融合蛋白或它们的组合。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽与未修饰的人TFF2多肽相比在血液中具有增加的半衰期。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽在一个或多个特定位点处聚乙二醇化。11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2肽在其N
‑
端处聚乙二醇化。12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽通过醛
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PEG化学使用N
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端的聚乙二醇化进行聚乙二醇化。13.根据权利要求10所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2多肽在其C
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端处聚乙二醇化。14.根据权利要求10所述的组合物，其中聚乙二醇化涉及通过NHS
‑
PEG化学对游离溶剂暴露的胺。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的组合物，其中所述经修饰的TFF2聚乙二醇化的多肽是同质组合物。16.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括给所述受试者施用有效量的权利要求1
‑
15中任一项所述的组合物。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是消化系统的癌症。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述消化系统的癌症选自口腔癌、咽癌、口咽癌、食管癌、胃癌、胃部癌症、小肠癌、大肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、胰腺癌和胆囊癌中的一种或多种。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是结肠癌。20.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是口咽癌。21.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是食管癌。
22.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是胃癌。23.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。24.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是直肠癌。25.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是肝癌。26.根据权利要求16
‑
25中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。27.根据权利要求16
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26中任一项所述的方法，所述方法进一步包括用针对PD
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1、PD
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L1或CTLA
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4的阻断抗体治疗所述癌症。28.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症对使用针对PD
‑
1、PD
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L1或CTLA
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4的阻断抗体的治疗没有应答；其中用权利要求1
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15中任一项所述的组合物治疗所述受试者，其中在用所述经修饰的TFF2多肽组合物治疗以后，所述受试者的癌症变得对使用针对PD
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1、PD
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L1或CTLA
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4的阻断抗体的治疗敏感；且其中随后在用所述经修饰的TFF2多肽治疗后约1至约60天内用针对PD
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1、PD
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L1或CTLA
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4的阻断抗体治疗所述受试者。29.一种经修饰的TFF2多肽，其中所述经修饰的TFF2多肽包含融合蛋白。30.根据权利要求29所述的经修饰的TFF2多肽，其中所述融合蛋白选自TFF2
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白蛋白蛋白、TFF2
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IgG1融合蛋白和TFF2
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多组氨酸
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标签中的一种或多种。31.根据权利要求30所述的经修饰的TFF2多肽，其中所述融合蛋白是多组氨酸标签。32.根据权利要求31所述的经修饰的TFF2多肽，其中所述组氨酸标签含有氨基酸切割位点。33.根据权利要求32所述的经修饰的TFF2多肽，其中所述氨基酸切割位点选自SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23。34.根据权利要求32
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33中任一项所述的经修饰的TFF2多肽，其中在切割后形成天然的TFF2多肽。35.根据权利要求31
‑
34中任一项所述的经修饰的TFF2多肽，其中所述组氨酸标签是在TFF2的N
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端或C
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端。36.根据权利要求29
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35中任一项所述的经修饰的TFF2多肽，所述多肽进一步包含：1)纯化所述TFF2肽；和2)制备纯化的经修饰的TFF2的聚乙二醇化形式、纯化的经修饰的TFF2的聚唾液酸化形式和/或纯化的经修饰的TFF2与聚(D,L
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乳酸
‑
共
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羟乙酸)(PLGA)的缀合物。37.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的一种或多种权利要求29
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36中任一项所述的经修饰的TFF2多肽。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述癌症是消化系统的癌症。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述消化系统的癌症选自口腔癌、咽癌、口咽癌、食管癌、胃癌、小肠癌、大肠癌、结肠癌、胃部癌症、直肠癌、肛门癌、肝癌、胰腺癌和胆囊癌中的一种或多种。40.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症是结肠癌。41.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症是口咽癌。42.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症是食管癌。43.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症是胃癌。44.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
45.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌症是直肠癌。46.根据权利要求39所述的方法，其中治疗的癌症是肝癌。47.根据权利要求37
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46中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。48.根据权利要求37
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47中任一项所述的方法，所述方法进一步包括用针对PD
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1、PD
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L1或CTLA
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4的阻断抗体治疗所述癌症。49.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中所述癌症对使用针对PD
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1、PD
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L1或CTLA
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4的阻断抗体的治疗没有应答；其中用权利要求29
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36中任一项所述的经修饰的TFF2多肽治疗所述受试者，其中在用经修饰的TFF2多肽治疗以后，所述受试者的癌症变得对使用针对PD
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1、PD
‑
L1或CTLA
...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：通尼克斯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：