用于检测α1-抗胰蛋白酶含量的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了用于检测α1

【技术实现步骤摘要】
用于检测
α1‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫分析检测结束领域，具体涉及一种用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒。

技术介绍

[0002]α1
‑
抗胰蛋白酶(α1
‑
antitrypsin，AAT或α1
‑
AT)，又称α1
‑
蛋白酶抑制剂(α1
‑
protease inhibitor，α1
‑
PI)。是人血浆中最重要的蛋白酶抑制剂，能抑制多种丝氨酸内切肽酶，如中性粒细胞弹性蛋白酶、胰蛋白酶、血浆素、凝血酶等，具有保护机体正常细胞和器官不受蛋白酶的损伤，抑制感染和炎症，维持机体内环境平衡的生物学效应。AAT主要由肝细胞滑面内质网联合高尔基复合体共同参与合成，其它如肠、肾、脾等也能产生少量α1
‑
AT，这些肝外合成的AAT在局部组织损伤的调节中起重要作用。
[0003]α1
‑
抗胰蛋白酶是一种具备穿越微血管，通过毛细血管内皮间隙进入组织，相对分子质量为54的单链糖蛋白。除了肝细胞合成分泌外，单核细胞、组织细胞、巨噬细胞等细胞，甚至某些肿瘤细胞也可以合成。机体在应激情况下合成增加，属于急性反应期蛋白。作为一种血浆蛋白，α1
‑
抗胰蛋白酶在正常尿液中不存在，但在患有肾脏疾病的病人尿液中可以检测到，研究表明，受损的肾小管上皮细胞可以合成AAT来应对肾小管间质损伤。
[0004]肾脏负责从体内排泄水和溶解物，它的功能包括维持酸碱平衡、调节电解质浓度、控制血容量和调节血压。因此肾功能损伤或相关疾病会导致高死亡率。脓毒症是重症监护病房最主要的危急重症之一，引发多器官功能障碍和衰竭而死亡。急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是脓毒症患者最常见的并发症，目前的监测手段和指标都具有一定的滞后性，对早期预测肾损伤的敏感性较低。蛋白芯片技术研究表明，AAT在AKI患者尿液中显著升高，推测可能在肾小管损伤后，肾小管上皮细胞可反应性上调AAT基因的表达，尿AAT含量升高是AKI发生的独立危险因素，并且具有较高的预测和诊断效能。IgA肾病是最为常见的原发性肾小球疾病，约占原发性肾小球疾病的40％～47％。大约1/3的IgA肾病患者在发病10～20年后进展到终末期肾病(ESRD)。发病初期无明显症状，伴有轻微的肾损伤。肾活检目前被认为是IgA肾病唯一可靠的诊断方法，创伤程度高，不推荐常规检测。受损的肾小管上皮细胞也可以合成AAT来应对肾小管间质损伤，表明IgA肾病在肾损害时，尿液AAT是反映肾功能损伤的重要指标，同时应用AAT和mAlb/Cr联合检测，可以较全面地反映IgA肾病的肾脏损伤程度，从而更好地判断预后，指导治疗，在临床中具有一定的实际应用价值。小儿原发性肾病综合征(primary nephrotic syn
‑
drome，PNS)为临床常见的儿童肾脏疾病，蛋白尿是其最主要的临床特征，同时也是导致病情进展至终末期肾病及多种心血管事件的重要危险因素。糖皮质激素是治疗该病的主要药物，约20％的患儿激素耐药，导致病情迁延不愈，最终发展为终末期肾病。尿液AAT是具有较高特异性和灵敏性的物质，在肾损伤后可发生浓度的明显变化。PNS患儿发病初期的AAT升高提示可能为激素耐药，可预测PNS激素治疗的临床效果。
[0005]肾脏疾病的诊断以尿液检查为最常规、最重要的方法，尿液可以无创伤的大量获
得，因此研究尿液中AAT水平可作为肾脏综合征发病及激素耐药机制研究早期预测的生物标志物，是疾病预防和早期干预的基础。
[0006]目前，人体α1
‑
抗胰蛋白酶检测应用样本的类型多为血清、血浆、全血，主要方法有血清胰蛋白酶抑制容量实验、单向免疫扩散法、ELISA法、免疫比浊法，血清胰蛋白酶抑制容量试验操作过程复杂，易受血清中非抗胰蛋白酶的干扰，结果不够稳定，不宜用于开发临床检测试剂盒；而单向免疫扩散法操作简单，灵敏度尚可，实验分析周期长，但特异性和灵敏度不高；ELISA法操作繁琐，灵敏度低，检测结果多为定性；免疫比浊法，操作简单、使用方便，但灵敏度和稳定性较差。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是：基于上述背景常规的检测方法无法兼顾检测性能和检测便捷性，本专利技术提供了解决上述问题的用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒，采用胶乳增强免疫比浊法，应用兔抗人AAT抗体包被胶乳颗粒，极大提高了检测的灵敏度、准确性和精密度，减少了非特异性反应，检测步骤简单，检测时间短，能够实现高通量检测，应用于常规实验室。
[0008]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0009]用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒，包括：试剂R1，其pH为7.0
‑
9.0；试剂R2，其包括乳胶微球和兔抗人AAT抗体，胶乳微球的粒径为60
‑
200nm；兔抗人AAT抗体与胶乳微球的质量比为：1:5
‑
1:20；试剂R2的pH为8.0
‑
9.5；试剂R1和试剂R2用于通过胶乳增强免疫比浊法检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量。
[0010]通过样本中的AAT与包被兔抗人AAT抗体的胶乳溶液形成乳胶微粒凝集复合物。该复合物导致散射光强度变化与AAT的浓度成比例，可进行速率散射比浊检测。
[0011]进一步可选地，试剂R1，其pH为8.0；试剂R2，其包括乳胶微球和兔抗人AAT抗体，胶乳微球的粒径为80nm；兔抗人AAT抗体与胶乳微球的质量比为：1:10；试剂R2的pH为9.0；试剂R1和试剂R2用于通过胶乳增强免疫比浊法检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量。
[0012]进一步可选地，所述试剂R1包括缓冲液、生物防腐剂和氯化钠。
[0013]进一步可选地，所述缓冲液采用Tris
‑
HCl缓冲液，浓度为0.05
‑
0.15mol/L；优选地，浓度为0.1mol/L。
[0014]进一步可选地，所述氯化钠的浓度为10
‑
40g/L；优选地，浓度为20g/L，。
[0015]进一步可选地，所述试剂R2中，乳胶微球的质量百分含量为0.1
‑
0.4％，和/或兔抗人AAT抗体的浓度为0.1
‑
0.5mg/mL；优选地，乳胶微球的质量百分含量为0.2％，和/或兔抗人AAT抗体的浓度为0.2mg/mL。
[0016]进一步可选地，所述试剂R2中还包括蔗糖和proclin 300。
[0017]进一步可选地，还包括α1
‑
抗胰蛋白酶标准品。
[0018]进一步可选地，试剂R2的制备方法包括步骤：稀释、偶联、封闭，最后经离心和分散处理获得。
[0019]进一步可选地，试剂盒用于检测尿液中的α1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒，其特征在于，包括：试剂R1，其pH为7.0
‑
9.0；试剂R2，其包括乳胶微球和兔抗人AAT抗体，胶乳微球的粒径为60
‑
200nm；兔抗人AAT抗体与胶乳微球的质量比为：1:5
‑
1:20；试剂R2的pH为8.0
‑
9.5；试剂R1和试剂R2用于通过胶乳增强免疫比浊法检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量。2.根据权利要求1所述的用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒，其特征在于，试剂R1，其pH为8.0；试剂R2，其包括乳胶微球和兔抗人AAT抗体，胶乳微球的粒径为80nm；兔抗人AAT抗体与胶乳微球的质量比为：1:10；试剂R2的pH为9.0；试剂R1和试剂R2用于通过胶乳增强免疫比浊法检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量。3.根据权利要求1所述的用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括缓冲液、生物防腐剂和氯化钠。4.根据权利要求3所述的用于检测α1
‑
抗胰蛋白酶含量的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液采用Tris
‑
HCl缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗雄飞，王燕平，李丽，
申请(专利权)人：重庆博士泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：