一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基，属于动物细胞培养技术领域，包括DMEM基础培养、L

【技术实现步骤摘要】
一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基及其制备方法


[0001]本专利技术属于动物细胞培养
，具体涉及一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基及其制备方法。

技术介绍

[0002]细胞培养肉，相比植物肉和微生物制成的发酵肉，是最接近传统肉类的新型肉类。细胞培养肉具有无微生物污染、优质蛋白含量高和食用体验好等优势，且生产过程的碳足迹、水资源需求比传统牲畜饲养低的多，是今后养殖肉类替代品中最具前途的发展方向之一。同时，细胞培养肉行业的技术壁垒也更高，更具挑战性。其中，开发适用于细胞培养肉的低成本、无动物来源成分的培养基，是细胞培养肉满足食品安全标准并最终能够进入大规模生产的重要基础。
[0003]间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)来源于胚胎发育早期中胚层的一种具备自我更新、多向分化潜能且经体外规模化扩增仍能保持其生物学特性的成体干细胞，可以向多种组织如骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质细胞增殖分化。因此，间充质干细胞是培养肉的重要细胞来源之一。
[0004]目前，用于培养MSCs的培养基主要有以下几类：一类是基础培养基(如α
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MEM培养基、DMEM培养基等)中添加5
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20％的动物血清。但动物血清的价格昂贵且产量有限，并不适合用于细胞培养肉类的大规模生产。此外，动物血清可能存在支原体、朊病毒等污染，也存在人体异种蛋白污染或过敏等风险，难以满足食用的标准；第二类是在基础培养基中添加血清代替物(如人血小板裂解物等)。但这类培养基同样有动物来源成分、且存在不明蛋白，具有批次差异较大，来源不稳定等缺点，也不适合用于大规模生产细胞培养肉类；第三类是在基础培养基中补充无动物来源的、化学组分明确的血清替代成分，这样既可以满足细胞的营养要求，又能够避免前两类培养基的天然缺陷。因此，适合MSCs细胞生长的化学配方明确、低成本的细胞培养基是细胞培养肉走向规模化生产的重要前提。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对现有的问题，专利技术人通过反复的实验验证，获得了一种新的牛脂肪来源间充质干细胞(Adipose
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derived stem cell，ADSC)无血清培养基，可以有效地对牛脂肪间充质干细胞进行培养。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分及其浓度：L
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丙胺酰
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L
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谷氨酰胺75mg/L、重组转铁蛋白0
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5.5mg/L、重组牛胰岛素0
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10mg/L、亚硒酸钠0.001
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0.01mg/L、七水合硫酸锌0.1
‑
2mg/L、皮质醇10
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50ng/mL、重组人血白蛋白0.1
‑
1.5mg/mL、重组碱性成纤维细胞生长因子1
‑
10ng/mL、重组转化生长因子β1 0
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2ng/mL、重组胰岛素样生长因子5
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20ng/mL、乙醇胺2
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100mg/mL、巯基乙醇
0.1
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3mg/L和2
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磷酸
‑
L
‑
抗坏血酸钠盐10
‑
50mg/L，其中所述的DMEM基础培养基包含：4500mg/L D
‑
葡萄糖、3700mg/L碳酸氢钠、584mg/L L
‑
谷氨酰胺和110mg/L丙酮酸钠。
[0008]优选的，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分及其浓度：L
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丙胺酰
‑
L
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谷氨酰胺75mg/L、重组转铁蛋白4mg/L、重组牛胰岛素8mg/L、亚硒酸钠0.005mg/L、七水合硫酸锌1mg/L、皮质醇25ng/mL、重组人血白蛋白1.25mg/mL、重组碱性成纤维细胞生长因子5ng/mL、重组转化生长因子β1 0.5ng/mL、重组胰岛素样生长因子10ng/mL、乙醇胺50mg/mL、巯基乙醇2.2mg/L和2
‑
磷酸
‑
L
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抗坏血酸钠盐30mg/L，其中所述的DMEM基础培养基包含：4500mg/L D
‑
葡萄糖、3700mg/L碳酸氢钠、584mg/L L
‑
谷氨酰胺和110mg/L丙酮酸钠。
[0009]一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0010](1)准备相应浓度的备用：L
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丙胺酰
‑
L
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谷氨酰胺43.5mg/L、重组转铁蛋白1mg/L、重组牛胰岛素5mg/L、亚硒酸钠0.4mg/L、七水合硫酸锌0.01g/L、皮质醇0.5mg/mL、重组人血白蛋白0.1g/mL、重组碱性成纤维细胞生长因子10μg/mL、重组胰岛素样生长因子100μg/mL、乙醇胺50mg/mL、巯基乙醇10mg/L和2
‑
磷酸
‑
L
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抗坏血酸钠盐0.1g/L；
[0011](2)用0.2μm低蛋白吸附滤膜进行过滤；
[0012](3)再向DMEM基础培养基中加入过滤后的L
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丙胺酰
‑
L
‑
谷氨酰胺、重组转铁蛋白、重组牛胰岛素、亚硒酸钠、七水合硫酸锌、皮质醇、重组人血白蛋白、重组碱性成纤维细胞生长因子、重组转化生长因子
‑
β1、重组胰岛素样生长因子、乙醇胺、巯基乙醇和2
‑
磷酸
‑
L
‑
抗坏血酸钠盐溶液，混匀，即得到牛脂肪间充质干细胞的无血清培养基。
[0013]本专利技术相比现有技术具有以下优点：
[0014]1、本专利技术培养基无动物来源组分，感染风险可控，符合食品生产标准；
[0015]2、本专利技术培养基所含组分均来自重组蛋白或化学合成，成分明确；
[0016]3、本专利技术方法制备的培养基在应用时，不需要提前对培养皿或培养瓶进行包被；
[0017]4、本专利技术方法制备的培养基在应用时，细胞贴壁性好，细胞形态同血清培育细胞无明显差异；
[0018]5、本专利技术方法制备的培养基在应用时，细胞增殖速率高，价格相对便宜，适用于大规模细胞培养。
附图说明
[0019]图1为第一批培养基成分筛选Plackett
‑
Burman实验结果；
[0020]图2为第二批培养基成分筛选Plackett
‑
Burman实验结果；
[0021]图3为本专利技术同其他品牌无血清培养基和10％血清培养基的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分及其浓度：L
‑
丙胺酰
‑
L
‑
谷氨酰胺75mg/L、重组转铁蛋白0
‑
5.5mg/L、重组牛胰岛素0
‑
10mg/L、亚硒酸钠0.001
‑
0.01mg/L、七水合硫酸锌0.1
‑
2mg/L、皮质醇10
‑
50ng/mL、重组人血白蛋白0.1
‑
1.5mg/mL、重组碱性成纤维细胞生长因子1
‑
10ng/mL、重组转化生长因子β1 0
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2ng/mL、重组胰岛素样生长因子5
‑
20ng/mL、乙醇胺2
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100mg/mL、巯基乙醇0.1
‑
3mg/L和2
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磷酸
‑
L
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抗坏血酸钠盐10
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50mg/L，其中所述的DMEM基础培养基包含：4500mg/L D
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葡萄糖、3700mg/L碳酸氢钠、584mg/L L
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谷氨酰胺和110mg/L丙酮酸钠。2.根据权利要求1所述一种适用于细胞培养肉的牛脂肪间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分及其浓度：L
‑
丙胺酰
‑
L
‑
谷氨酰胺75mg/L、重组转铁蛋白4mg/L、重组牛胰岛素8mg/L、亚硒酸钠0.005mg/L、七水合硫酸锌1mg/L、皮质醇25ng/mL、重组人血白蛋白1.25mg/mL、重组碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：杭州极麋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：