他克莫司粗品的提取方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种他克莫司粗品的提取方法和应用，涉及生物医药技术领域。包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后得到的第一固体进行重结晶处理；第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种。通过将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗后重结晶，水萃洗可以除去他克莫司中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去他克莫司中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度及含量较高的他克莫司粗品，萃洗工艺简便，生产周期短，适宜工业化使用。业化使用。业化使用。

【技术实现步骤摘要】
他克莫司粗品的提取方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及一种他克莫司粗品的提取方法和应用。

技术介绍

[0002]他克莫司(FK506)是一种新型的二十三元大环内酯类强效免疫抑制剂，具有毒副作用小、死亡率低、移植存活率高、依赖性小等优点，临床广泛应用于多种皮炎、银屑病、红斑狼疮、扁平苔癣、白癜风、Nethenton综合症和抑制宿主病等自身免疫疾病的治疗，以及预防肝脏、肾脏、心脏、肺、胰腺等器官移植术后的排斥反应。
[0003]他克莫司来源于发酵产品，从发酵液中制备他克莫司的工艺一般包含从发酵液中提取获得粗品、粗品分离纯化获得他克莫司。因发酵液中他克莫司结构类似物(子囊霉素、二氢他克莫司)占他克莫司的5～10％，子囊霉素及二氢他克莫司因其结构与他克莫司极为相似，无法用常规手段去除，通常只能采用柱层析分离。因此，粗品中杂质含量对柱层析分离效果有较大的影响。
[0004]发酵液中除他克莫司及结构类似物外，还含有油脂、蛋白质等副产物，以及无机盐、糖类等物质。由于他克莫司中的杂质含量较多，杂质种类复杂，为了收集到纯度及含量较高的他克莫司，目前从发酵液中提取他克莫司粗品的方法，普遍存在生产效率低下，生产周期长的问题。在一些方案中为了提高生产效率采用纳滤膜、超临界萃取设备等特殊设备，操作较繁琐，生产周期长，不利于工业化；或使用了离子液体等特殊试剂，废液难以处理，对环境不友好。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种他克莫司粗品的提取方法和应用。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种他克莫司粗品的提取方法，包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体进行重结晶处理；第一极性溶剂的极性小于乙酸丁酯。
[0009]在可选的实施方式中，第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种；优选为正己烷。
[0010]优选地，第一极性溶剂的添加量为菌丝体的1～3倍重量。
[0011]优选地，水的每次添加量为菌丝体的0.5～1倍重量。
[0012]在可选的实施方式中，重结晶包括将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体溶解于非水溶性有机溶剂中，再加入第二极性溶剂重结晶。
[0013]优选地，第二极性溶剂的加入方式为滴加，滴加时间为50～70min。
[0014]优选地，第二极性溶剂滴加完成后搅拌4～8h，再过滤、干燥，干燥温度为55～65
℃。
[0015]优选地，非水溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、甲苯和二甲苯中的任一种，更优选为乙酸乙酯。
[0016]优选地，第二极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种，更优选为正己烷。
[0017]优选地，非水溶性有机溶剂的加入量为萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体总重的0.5～5倍重量，更优选为1～2倍重量。
[0018]优选地，第二极性溶剂的加入量为非水溶性有机溶剂加入量的0.5～5倍重量，更优选为1～3倍重量。
[0019]在可选的实施方式中，加入第二极性溶剂前还包括分水处理，分水处理包括将含有他克莫司的非水溶性有机相和水相分离。
[0020]在可选的实施方式中，重结晶为常温重结晶，重结晶温度为20～30℃。
[0021]在可选的实施方式中，制备浓缩后的菌丝体浸提物的方法包括：将他克莫司发酵液固液分离，得到浸提液，并对浸提液浓缩。
[0022]在可选的实施方式中，浸提包括使用含水的水溶性有机溶剂浸提。
[0023]优选地，含水的水溶性有机溶剂中有机溶剂的浓度为40～85％，更优选为50～75％。
[0024]优选地，含水的水溶性有机溶剂的添加量为菌丝体重量的0.5～10倍，更优选为1～3倍。
[0025]优选地，水溶性有机溶剂包括乙醇、丙酮、异丙醇和四氢呋喃中的任一种。
[0026]在可选的实施方式中，浓缩包括将浸提液浓缩至水溶性有机溶剂的含量为＜1％。
[0027]在可选的实施方式中，浓缩温度为30～90℃，更优选为60～80℃。
[0028]第二方面，本专利技术提供一种如前述实施方式任一项的提取方法在制备他克莫司中的应用。
[0029]本专利技术具有以下有益效果：
[0030]本专利技术提供了一种他克莫司粗品的提取方法和应用，通过将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗后重结晶，水萃洗可以除去他克莫司中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去他克莫司中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度及含量较高的他克莫司粗品，同时萃洗的工艺简便、生产周期短，适宜工业化使用。
附图说明
[0031]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0032]图1为本专利技术实施例1制得的他克莫司粗品的高效液相色谱图；
[0033]图2为本专利技术对比例1制得的他克莫司粗品的高效液相色谱图。
具体实施方式
[0034]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0035]第一方面，本专利技术提供了一种他克莫司粗品的提取方法，其步骤如下：
[0036]S01、获得菌丝体
[0037]取他克莫司发酵液，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到菌丝体。
[0038]本专利技术不限定原料他克莫司发酵液的来源，例如可以为链霉菌菌株发酵得到的，或其他任何现有技术制备得到的他克莫司发酵液均可用于本专利技术。
[0039]S02、制备浸提液
[0040]向菌丝体中加入含水的水溶性有机溶剂搅拌浸提2～5小时，浸提结束后过滤并收集浸提液。
[0041]优选地，含水的水溶性有机溶剂中有机溶剂的浓度为40～85％，更优选为50～75％。
[0042]优选地，含水的水溶性有机溶剂的添加量为菌丝体重量的0.5～10倍，更优选为1～3倍。
[0043]优选地，水溶性有机溶剂包括乙醇、丙酮、异丙醇和四氢呋喃中的任一种。
[0044]S03、浓缩
[0045]将浸提液浓缩至水溶性有机溶剂的含量＜1％，得到浓缩后的菌丝体浸提物。
[0046]在可选的实施方式中，浓缩温度为30～90℃，更优选为60～80℃。
[0047]浓缩可以除去浸提液中的有机溶剂，由于他克莫司极本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种他克莫司粗品的提取方法，其特征在于，包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后得到的浸提浓缩物过滤后的固体进行重结晶处理；所述第一极性溶剂的极性小于乙酸丁酯。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种；优选为正己烷；优选地，所述第一极性溶剂的添加量为菌丝体的1～3倍重量；优选地，所述水萃洗中每次添加的水量为菌丝体的0.5～1倍重量。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述重结晶包括将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体溶解于非水溶性有机溶剂中，再加入第二极性溶剂重结晶；优选地，所述第二极性溶剂的加入方式为滴加，滴加时间为50～70min；优选地，所述第二极性溶剂滴加完成后搅拌4～8h，再过滤、干燥，干燥温度为55～65℃；优选地，所述非水溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、甲苯和二甲苯中的任一种，更优选为乙酸乙酯；优选地，所述第二极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种，更优选为正己烷；优选地，所述非水溶性有机溶剂的加入量为萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体的0.5～5倍重量，更优选为1～2倍重量；优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宏名，郑维江，张祥阳，吴海龙，许波文，刘霞，邓丽，邹艳，胡砾丹，陈茂棠，李显林，
申请(专利权)人：国药集团川抗制药有限公司，
类型：发明
国别省市：