介导细胞内有效滞留CD3的空间构象表位及其应用制造技术

本发明专利技术涉及介导细胞内有效滞留CD3的空间构象表位及其应用。具体地，本发明专利技术提供CD3ε的表位肽、与其特异性结合的抗体或其抗原结合片段及其应用。本发明专利技术可以将含有CD3ε的分子有效滞留在细胞内，降低移植物抗宿主反应。降低移植物抗宿主反应。

【技术实现步骤摘要】
介导细胞内有效滞留CD3的空间构象表位及其应用


[0001]本专利技术涉及介导细胞内有效滞留CD3ε的空间构象表位、与其特异性结合的多肽或抗体及其应用。

技术介绍

[0002]随着肿瘤治疗的发展，嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor
‑
T，CAR
‑
T)免疫疗法逐渐成为备受关注的治疗手段。CAR
‑
T细胞所表达的嵌合抗原受体(CAR)一般包含胞外抗原结合域、跨膜域和胞内信号传导域。通常CAR
‑
T细胞是由患者自体T细胞经CAR基因转导并扩增而来，最后再回输到该患者体内。CAR
‑
T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，而不受主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)的限制。目前，美国FDA已经批准了两款自体CAR
‑
T细胞产品上市，分别是诺华的Kymriah和凯特的YesCAR
‑
Ta，用于难治性复发性非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病的治疗。相关临床试验证明，CAR
‑
T作为完全个性化的活细胞药物极具抗肿瘤潜力(Maude et al.2018；Park et al.2018；Schuster et al.2017)。
[0003]上述两款CAR
‑
T药物的制备及回输策略均是采集患者自体的外周血，分离得到T细胞，通过病毒载体将CAR的编码基因整合到T细胞的基因组上，然后进行扩大培养，最后回输到患者体内。这种完全个体化的CAR
‑
T细胞生产不仅生产周期长，成本高，而且也给回输治疗带来许多不确定因素。例如，分离得到的T细胞数量不足或功能失常导致的CAR
‑
T细胞制备失败、细胞制备中患者疾病快速进展而失去治疗窗口等。因此，CAR
‑
T领域的一个共同期待是健康供者来源的即用型(off
‑
the
‑
shelf)同种异体(即通用型)CAR
‑
T细胞，以有效避免或解决上述生产和治疗相关问题，并极大地降低生产成本。
[0004]制备同种异体CAR
‑
T细胞，首先需要解决一个重大安全难题，即移植物抗宿主反应(graft
‑
versus
‑
host disease，GVHD)。GVHD是移植物中同种异型反应性T细胞识别宿主同种异型组织抗原而诱发的针对受者正常组织和器官的免疫排斥反应，严重时会致命。GVHD是通过异体T细胞表面的TCR(T cell receptor，TCR)介导的。TCR为所有成熟T细胞表面的特征性标志。TCR以非共价键在胞内与多个CD3亚基在内质网(endoplasmic reticulum,ER)中结合并组装，最终在细胞表面以TCR
‑
CD3抗原识别复合物的形式存在。
[0005]基于非基因编辑的同种异体CAR
‑
T技术同样也得到行业的密切关注。此技术来源于1995年的报道，作者发现在胞内表达携带内质网滞留信号的特异性抗体，可以将IL
‑
2受体蛋白有效滞留在内质网内，几乎完全不出现在细胞表面，达到与基因编辑类似的功能缺失(Richardson et al.1995)。这个技术最近被借鉴，用于寻找能够有效下调表面TCR/CD3复合物的多肽以及是否存在通用的规律，例如多肽中包含的抗体识别TCR/CD3复合物中的哪个蛋白或其表位最有效。针对同一靶点不同表位的抗体存在下调表面TCR/CD3复合物的活性差异(Kamiya et al.2018；WO2019032916A1；US20180086831A1)。
[0006]本领域亟需研究出介导细胞内有效滞留CD3ε的空间构象表位。

技术实现思路

[0007]本专利技术第一方面提供一种CD3ε的表位，所述表位是表位肽。
[0008]在一个或多个实施方案中，所述表位介导细胞内滞留CD3ε。
[0009]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的56位谷氨酸、61位组氨酸、62位天冬酰胺、101位精氨酸、104位赖氨酸和107位天冬氨酸。在一个或多个实施方案中，所述表位还包含SEQ ID NO:1的54位甘氨酸、55位丝氨酸、60位谷氨酰胺、64位赖氨酸和69位天冬氨酸。
[0010]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸56、60
‑
65、69
‑
71、101、104、107。
[0011]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸56、60
‑
65、69
‑
71、101
‑
107。
[0012]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸56、60
‑
71、101
‑
107。
[0013]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸56
‑
65、69
‑
71、101
‑
107。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸56
‑
71、101
‑
107。
[0015]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸56
‑
107。
[0016]在一个或多个实施方案中，所述表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸54
‑
107。
[0017]在一个或多个实施方案中，所述表位是空间表位，表位的氨基酸形成与抗体或其抗原结合片段结合的空间构象。
[0018]在一个或多个实施方案中，所述表位如下式(I)所示：
[0019]X1X2…
X
55
EX
57
…
X
60
HNX
63
…
X
100
RX
102
X
103
KX
105
X
106
DX
108
…
X
207
[0020](I)
[0021]其中，X1‑
X
55
和X
108
‑
X
207
中各X独立地是任何氨基酸或无，其余X各自独立地是任何氨基酸。
[0022]在一个或多个实施方案中，所述表位如下式(II)所示：
[0023]X1X2…
X
53
GSEX
57
X
58
X
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CD3ε的表位肽，包含SEQ ID NO:1的第56、61、62、101、104和107位氨基酸，优选地，所述表位肽是空间表位肽，优选地，所述表位肽还包含SEQ ID NO:1的第54、55、60、64和69位氨基酸，更优选地，所述表位肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸56
‑
107，或包含SEQ ID NO:1的氨基酸54
‑
107。2.一种CD3ε的表位肽，所述表位肽如下式(I)所示：X1X2…
X
55
EX
57
…
X
60
HNX
63
…
X
100
RX
102
X
103
KX
105
X
106
DX
108
…
X
207
(I)其中，X1‑
X
55
和X
108
‑
X
207
中各X独立地是任何氨基酸或无，其余X各自独立地是任何氨基酸，优选地，所述表位肽如下式(III)所示：X
54
X
55
EX
57
…
X
60
HNX
63
…
X
100
RX
102
X
103
KX
105
X
106
D(III)其中，X
54
和X
55
各自独立地是任何氨基酸或无，其余X各自独立地是任何氨基酸，或者优选地，所述表位肽如下式(IV)所示：GSEX
57
X
58
X
59
QHNX
63
KX
65
…
X
68
DX
70
…
X
100
RX
102
X
103
KX
105
X
106
D(IV)其中，X各自独立地是任何氨基酸，更优选地，所述表位肽是SEQ ID NO:1的包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，张鹏潮，张银航，
申请(专利权)人：苏州方德门达新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：