一种自身可发光的磁性微球的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种自身可发光的磁性微球的制备方法及其应用；发明专利技术制备的可自身发光的磁性微球，首先对磁性微球表面进行活化处理，在其表面生成具有强电负性的羧基，之后又将化学发光物质通过直接或间接的方式与磁性微球混合，与其表面的羧基形成氢键，最终形成牢固氢键将发光物质与磁性微球连接，制备出可自身发光的磁性微球。本发明专利技术制备的磁性微球本身自带发光值，可以减少发光仪检测过程中的误差，达到增强其检测效果稳定的目的。达到增强其检测效果稳定的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种自身可发光的磁性微球的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物化学
，具体为一种自身可发光的磁性微球的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]在目前的实际应用中，针对化学发光分析仪的质控主要有两种方法。第一种方法：由于市面上现有的磁性微球本身不具有发光值，所以对发光分析仪进行质控时需结合发光免疫分析检测试剂盒使用。不同厂家试剂盒主要组分的生产包括包被反应板、标记物制备、各种溶液的配置、冻干、分包装等步骤，使用的原料不同，生产过程也有一定的差异，因而使用不同厂家的发光免疫分析试剂盒进行仪器质控时产生的不可控因素也会较多，对发光仪的质控效果不同无法得出确切的结论，可信度不足。另外，这一方法由于发光免疫分析试剂盒的使用，无疑增加了额外的成本，也成为这一方法的缺点之一。第二种方法：用一种标准光源对发光分析仪的测量室进行检测进而达到对测量室质控的目的。然而上文提到，化学发光免疫分析仪不仅包括试测量室检测区，还有试剂区、样品区、反应测试管加样区、反应废液区等很多不同的区域，显然这种方法是很局限的：它无法实现仪器其他部分的质控即不能满足化学发光分析仪整体的质控，功能单一，效果片面，结果不具有足够的说服力。市面上现有的普通磁性微球和化学发光分析仪的质控方法无法应对更为复杂的应用要求，不可避免地受到一定限制。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种自身可发光的磁性微球的制备方法及其应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种自身可发光的磁性微球，具有以下特征：所述自身可发光的磁性微球为磁性微球表面活化后，在其表面直接或间接偶联包被发光物质后制得；
[0005]其中，所述发光物质为吖啶酰肼或吖啶酯中的任意一种。
[0006]一种自身可发光的磁性微球的制备方法，具有以下特征：所述自身可发光的磁性微球的制备方法包括直接法与间接偶联法；
[0007]其中直接法包括以下步骤：
[0008]S1.制备羧基化磁性微球；
[0009]S2.清洗羧基化磁性微球表面，并使用碳二亚胺活化；
[0010]S3.将活化后的羧基化磁性微球与吖啶酰肼溶液混合，加入氨水与硅酸四乙酯振荡反应，收集反应后磁性微球并清洗表面，得到自身可发光的磁性微球；
[0011]其中，间接偶联法包括以下步骤：
[0012]a.制备磁性微球；
[0013]b.将牛血清蛋白与CB缓冲液混合，配置为牛血清蛋白溶液；
[0014]c.向牛血清蛋白溶液中加入生物素、吖啶酯与CB缓冲液，震荡反应，加入Tris终止液终止反应，对其进行透析并收集透析液备用；
[0015]d.将步骤a制备的磁性微球与步骤c制备的透析液混合反应，反应结束后收集磁性微球，并洗涤，得到自身可发光微球。
[0016]进一步的，直接法制备自身可发光的磁性微球，具体包括以下步骤：
[0017]S1.将FeCl3.6H2O、FeCl2.4H2O与纯水混合，搅拌均匀，调节溶液pH值为10
‑
11,水浴升温至55
‑
65℃，搅拌反应1
‑
2h，反应结束后滴加油酸，升温至80
‑
90℃，继续反应0.5
‑
1h，对反应产物磁分离，得到羧基化磁性微球；
[0018]S2.将羧基化磁性微球与MES溶液混合，振荡10
‑
20min，磁分离混合溶液，收集羧基化磁性微球，重复3
‑
4次后，将羧基化磁性微球与碳二亚胺混合均匀，室温震荡处理30
‑
45min后，得到活化羧基磁性微球；
[0019]S3.将活化羧基磁性微球与C
‑
B08缓冲溶液混合配置为磁珠溶液，将吖啶酰肼加入至环己烷中，避光条件下超声分散10
‑
15min，配置为吖啶酰肼溶液，并将其滴加至磁珠溶液内，并立即加入氨水，充分搅拌反应2
‑
3h，滴加硅酸四乙酯，滴加时间为4
‑
6h，滴加结束后，收集磁性微球，并使用无水乙醇与去离子水交替洗涤3
‑
5次，真空干燥2
‑
4h后，得到自身可发光的磁性微球。
[0020]进一步的，按重量份数计，步骤S1中，FeCl3.6H2O、FeCl2.4H2O、纯水与油酸的比例为(1
‑
2g)：(4
‑
5g)：(70
‑
75ml)：(2
‑
3ml)；
[0021]步骤S1中，油酸的滴加时间为2
‑
3min。
[0022]进一步的，步骤S3中，所述磁珠溶液、吖啶酰肼溶液、氨水与硅酸四乙酯的体积比为(30
‑
40)：(8
‑
10)：(16
‑
20)：(0.15
‑
0.2)。
[0023]进一步的，步骤S3中，所述磁珠溶液的浓度为2.5
‑
3.0mg/ml；所述吖啶酰肼溶液的浓度为1
‑
1.5ul/ml；所述氨水的浓度为2％
‑
2.5％。
[0024]进一步的，步骤S3中，所述C
‑
B08缓冲液，pH值为7.3
‑
7.5，含有45
‑
55mMTris、0.8
‑
1％Nacl、0.08
‑
0.12％P300、0.8
‑
1.2％BSA、0.14
‑
0.16％TW
‑
20与4
‑
6％甘油，余量为水。
[0025]本专利技术首先采用了直接在磁性微球表面包覆发光物质的方法制备了自身可发光的磁性微球，首先使用铁质原料合成微小的磁性微球，之后将其与油酸混合反应，在其表面生成具有较强电负性的羧基基团，羧基基团会与吖啶酰肼之间生成氢键，从而使得吖啶酰肼可以包覆在磁性微球的表面，达到自身可发光的目的。
[0026]进一步的，间接偶联法制备自身可发光的磁性微球，具体包括以下步骤：
[0027]a.将FeCl3.6H2O溶于乙二醇中，搅拌至澄清后，水浴升温至40
‑
50℃，加入PEG4000，继续搅拌30
‑
45min，加入三水合乙酸钠，搅拌至完全溶解后，升温至200
‑
220℃密闭反应8
‑
12h，冷却至室温后收集反应产物，使用无水乙醇与去离子水交替洗涤反应产物3
‑
5次，并真空干燥后得到磁性微球；
[0028]b.将牛血清蛋白与CB缓冲液混合，配制为牛血清蛋白溶液；
[0029]c.向牛血清蛋白溶液中加入生物素、吖啶酯与CB缓冲液，震荡均匀后，水浴升温至36.5
‑
37.5℃反应60
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种自身可发光的磁性微球，其特征在于：所述自身可发光的磁性微球为磁性微球表面活化后，在其表面直接或间接偶联包被发光物质后制得；其中，所述发光物质为吖啶酰肼或吖啶酯中的任意一种。2.一种自身可发光的磁性微球的制备方法，其特征在于：所述自身可发光的磁性微球的制备方法包括直接法与间接偶联法；其中直接法包括以下步骤：S1.制备羧基化磁性微球；S2.清洗羧基化磁性微球表面，并使用碳二亚胺活化；S3.将活化后的羧基化磁性微球与吖啶酰肼溶液混合，加入氨水与硅酸四乙酯振荡反应，收集反应后磁性微球并清洗表面，得到自身可发光的磁性微球；其中，间接偶联法包括以下步骤：a.制备磁性微球；b.将牛血清蛋白与CB缓冲液混合，配制为牛血清蛋白溶液；c.向牛血清蛋白溶液中加入生物素、吖啶酯与CB缓冲液，震荡反应，加入Tris终止液终止反应，对其进行透析并收集透析液备用；d.将步骤a制备的磁性微球与步骤c制备的透析液混合反应，反应结束后收集磁性微球，并洗涤，得到自身可发光微球。3.根据权利要求2所述的一种自身可发光的磁性微球的制备方法，其特征在于：直接法制备自身可发光的磁性微球，具体包括以下步骤：S1.将FeCl3.6H2O、FeCl2.4H2O与纯水混合，搅拌均匀，调节溶液pH值为10
‑
11，水浴升温至55
‑
65℃，搅拌反应1
‑
2h，反应结束后滴加油酸，升温至80
‑
90℃，继续反应0.5
‑
1h，对反应产物磁分离，得到羧基化磁性微球；S2.将羧基化磁性微球与MES溶液混合，振荡10
‑
20min，磁分离混合溶液，收集羧基化磁性微球，重复3
‑
4次后，将羧基化磁性微球与碳二亚胺混合均匀，室温震荡处理30
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45min后，得到活化羧基磁性微球；S3.将活化羧基磁性微球与C
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B08缓冲液混合配制为磁珠溶液，将吖啶酰肼加入至环己烷中，避光条件下超声分散10
‑
15min，配置为吖啶酰肼溶液，并将其滴加至磁珠溶液内，并立即加入氨水，充分搅拌反应2
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3h，滴加硅酸四乙酯，滴加时间为4
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6h，滴加结束后，收集磁性微球，并使用无水乙醇与去离子水交替洗涤3
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5次，真空干燥2
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4h后，得到自身可发光的磁性微球。4.根据权利要求3所述的一种自身可发光的磁性微球的制备方法，其特征在于：步骤S1中，FeCl3.6H2O、FeCl2.4H2O、纯水与油酸的比例为(1
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2g)：(4
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5g)：(70
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75ml)：(2
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3ml)；步骤S1中，油酸的滴加时间为2
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3min。5.根据权利要求3所述的一种自身可发光的磁性微球的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述磁珠溶液、吖啶酰肼溶液、氨水与硅酸四乙酯的体积比为(30
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40)：(8
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10)：(16
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20)：(0.15
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0.2)；所述磁珠溶液的浓度为2.5
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3.0mg/ml；所述吖啶酰肼溶液的浓度为1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李俊鹏，袁稳，王建国，
申请(专利权)人：徐州海纳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：