一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒及其制备方法，链霉亲和素与生物素结合时两者之间的亲和力极为强烈，本发明专利技术中快速检测试剂盒基于荧光免疫层析技术，利用链霉亲和素与生物素的高度特异性制备检测试剂盒，能够快速、准确地得到检测结果，该检测试剂盒测试灵敏度高、稳定性好，节省了标记划膜的步骤，滴加待测试液后，几分钟即可得到清晰的检测结果，简单方便，大大节省了检测时间。大大节省了检测时间。

【技术实现步骤摘要】
一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及检测试剂盒制备
，具体为一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]免疫层析技术是20世纪末发展起来的结合免疫技术和色谱层析技术的一种分析方法，该方法具有特异性、操作简单、快速等特点，广泛应用于临床诊断、环境监测、食品安全等重要领域。传统免疫层析技术以胶体金为标记物，通过条带显色对目标物定性检测或半定量分析。该方法虽然简单快速，但灵敏度较差，难以准确定量。荧光免疫层析技术作为一项新型免疫检测技术，既保留了传统胶体金试纸条的现场快速检测优点，又加入了荧光检测技术的高灵敏度特点，成为提高免疫层析方法检测性能的主要途径之一。
[0003]该技术以固定有检测线和质控线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。通常采用双抗夹心免疫层析方法或竞争免疫层析法检测，荧光免疫层析分析方法具有灵敏度高、稳定性好、受自然荧光干扰低等优点，成为快速检测分析研究的热点。用于荧光免疫分析的标记物主要包括荧光素、量子点、荧光微球等。
[0004]链霉亲和素修饰的荧光微球，具有荧光强度高，链霉亲和素载量高，性能稳定，粒径分布窄等特性，可应用于定量检测试剂的开发，如侧向流层析试剂的开发和规模化生产、微流控技术平台、细胞学研究等；其中链霉亲和素荧光微球的标记效果对检测卡的灵敏度等有很大的影响，目前链霉亲和素荧光微球标记效果的评价需通过完整的标记划膜检测，耗时较久。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒，包括检测卡，检测卡包括胶板、样品垫、NC膜、吸水纸；
[0008]所述样品垫、NC膜、吸水纸从左向右依次搭接粘结在胶板上。
[0009]进一步地，NC膜上覆有检测线，检测线上包被有BSA
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生物素复合物。
[0010]一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒的制备方法，具体操作步骤如下：
[0011](1)制备BSA
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生物素复合物：称取BSA加入纯水配置BSA溶液，取BSA溶液与生物素混合均匀，37～39℃下恒温水浴30～35min，得到BSA
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生物素溶液，将BSA
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生物素溶液置于PBS透析液中透析6～8次，单次透析时间为4～5h，得到BSA
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生物素复合物；
[0012](2)包被BSA
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生物素复合物：取胶板，在胶板中间位置粘合NC膜，移入划线环境中静置平衡20～30min，使用划膜机在NC膜检测线上包被BSA
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生物素复合物，干燥；
[0013](3)组装检测试剂盒：裁剪吸水纸、样品垫，取吸水纸贴在NC膜上方，吸水纸下方压NC膜上方0.5～1mm，吸水纸上方与胶板上方对齐，取样品垫贴在吸水纸下方，样品垫上方压NC膜下方0.5～1mm，样品垫下方与胶板下方对齐；
[0014]粘合完成后将胶板裁切，分割为4～5mm的裸条，将裸条与卡壳，加入干燥剂装封口；
[0015](4)检测：配置稀释液，取待检链霉亲和素荧光微球加入稀释液混合均匀得到待测液，取待测液加入加样孔，5～8分钟后插入配套检测仪检测。
[0016]进一步地，步骤(1)中，BSA溶液与生物素配置摩尔比1：(10～30)。
[0017]进一步地，步骤(1)中，BSA溶液浓度为50～55mg/ml。
[0018]进一步地，步骤(2)中，划线环境中的工作参数为湿度45～65％，温度20～30℃；
[0019]进一步地，步骤(2)中，检测线上BSA
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生物素复合物的包被浓度为0.5～2.0mg/mL，包被量为0.5～4.0uL/cm。
[0020]进一步地，步骤(2)中，干燥条件为湿度20～30％，温度18～28℃。
[0021]进一步地，步骤(4)中，稀释液的组成成分为：20mM的PB溶液、2.5％蔗糖、0.176％氯化钠1％、P300、1％吐温20，控制稀释液pH为7～7.4。
[0022]与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：
[0023]本专利技术中制备了方便且可快速得到检测结果的检测试剂盒，试剂盒中检测卡由上至下为吸水纸、NC膜、样品垫，在NC膜上检测线中包被BSA
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生物素复合物，将待测链霉亲和素荧光微球滴加在检测卡上即可快速检测得到检测结果，节省了原有技术中标记划膜检测时间，提高了检测效率；
[0024]采用链霉亲和素荧光微球检测生物素，链霉亲和素修饰的荧光微球，荧光强度高，链霉亲和素载量高，性能稳定，便于定量检测试剂的开发，且链霉亲和素荧光微球的标记效果可提高检测试剂盒中检测卡的灵敏度，使实验结果更加准确，测试进度更加高效。
具体实施方式
[0025]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]本实施例中BSA购买自生工生物工程(上海)股份有限公司；生物素购买自Thermo；PBS透析液自制(50L纯化水+1431.25g十二水合磷酸氢二钠+156g二水合磷酸二氢钠+438g氯化钠)；PB溶液自制(100mL纯化水+0.5804g十二水合磷酸氢二钠+0.0608g二水合磷酸二氢钠)；CB溶液自制(1.59g/L碳酸钠+2.93g/L碳酸氢钠，PH9.6
±
0.2)；NC膜购买自南京东纳生物科技有限公司；链霉亲和素荧光微球购买自南京东纳生物科技有限公司；蔗糖购买自南京化学试剂股份有限公司；氯化钠购买自南京化学试剂股份有限公司；P300购买自sigma；吐温20购买自南京化学试剂股份有限公司；二水合磷酸二氢钠购买自南京化学试剂股份有限公司；十二水合磷酸氢二钠购买自南京化学试剂股份有限公司；碳酸钠购自南京化学试剂股份有限公司；碳酸氢钠购自南京化学试剂股份有限公司。
[0027]实施例1
[0028](1)BSA标记生物素：
[0029]称取0.5gBSA溶于10mL纯水中，混合均匀；向离心管中加入4ul BSA溶液，取1.46ul生物素点加在离心管壁上，取94.54ul浓度为20mM的CB溶液将生物素冲至离心管中，混合均匀后水浴30min；水浴30min后将离心管中溶液转移至透析袋中，在浓度为20mM的PBS透析液中透析7次，每次4个小时，得到BSA
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生物素复合物；
[0030](2)包被、组装：
[0031]取5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒，其特征在于：包括检测卡，检测卡包括胶板、样品垫、NC膜、吸水纸；所述样品垫、NC膜、吸水纸从左向右依次搭接粘结在胶板上。2.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒，其特征在于：NC膜上覆有检测线，检测线上包被有BSA
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生物素复合物。3.一种链霉亲和素荧光微球的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：具体操作步骤如下：(1)制备BSA
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生物素复合物：称取BSA加入纯水配置BSA溶液，取BSA溶液与生物素混合均匀，37～39℃下恒温水浴30～35min，得到BSA
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生物素溶液，将BSA
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生物素溶液置于PBS透析液中透析6～8次，单次透析时间为4～5h，得到BSA
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生物素复合物；(2)包被BSA
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生物素复合物：取胶板，在胶板中间位置粘合NC膜，移入划线环境中静置平衡20～30min，使用划膜机在NC膜检测线上包被BSA
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生物素复合物，干燥；(3)组装检测试剂盒：裁剪吸水纸、样品垫，取吸水纸贴在NC膜上方，吸水纸下方压NC膜上方0.5～1mm，吸水纸上方与胶板上方对齐，取样品垫贴在吸水纸下方，样品垫上方压NC膜下方0.5～1mm，样品垫下方与胶板下方对齐；粘合完成后将胶板裁...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊鹏，杜晓辉，王建国，喻振，
申请(专利权)人：徐州海纳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：