用于基因疗法的编码天冬氨酸酰化酶(ASPA)的经修饰的核酸和载体制造技术

本公开涉及包含编码天冬氨酸酰化酶(ASPA)的经修饰的核酸的重组核酸和基因疗法载体及其变体，其用于治疗与ASPA的缺陷或功能障碍相关的疾病和病症，尤其是卡纳万病。尤其是卡纳万病。尤其是卡纳万病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于基因疗法的编码天冬氨酸酰化酶(ASPA)的经修饰的核酸和载体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月28日提交的美国临时申请第63/016,507号及2020年9月11日提交的美国临时申请第63/077,144号的优先权。这些申请的内容通过引用整体并入本文。


[0003]本专利技术涉及编码天冬氨酸酰化酶(ASPA)的经修饰的核酸，使用编码ASPA的经修饰的核酸的方法，包含编码ASPA的经修饰的核酸的载体，以及载体在治疗与功能性ASPA水平减少相关的疾病、病症和病况(包括与N
‑
乙酰基
‑
L
‑
天冬氨酸的细胞分解代谢减弱相关的疾病、病症和病况，例如卡纳万病(Canavan disease))中的用途。

技术介绍

[0004]卡纳万病(CD)与编码天冬氨酸酰化酶(ASPA)(也称为氨基酰化酶2)的ASPA基因的表达减少和/或突变相关。天冬氨酸酰化酶活性减少导致由于NAA至天冬氨酸盐和乙酸盐的转化减少所引起的N
‑
乙酰天冬氨酸(NAA)(也称为N
‑
乙酰
‑
L
‑
天冬氨酸)的积累。ASPA酶涉及维持髓鞘形成性细胞的代谢完整性。在脑中，ASPA基因的表达主要限于产生白质的少突胶质细胞(oligodendrocyte)。NAA在脑中的积累与少突胶质细胞功能障碍、以及髓鞘的发育的干扰、以及与神经元相关的现有髓鞘的破坏相关。
[0005]CD是常染色体隐性遗传性疾病并且主要以新生儿/婴儿形式呈现。受此形式影响的儿童在婴儿期呈现与脑和脊髓中的髓磷脂退化相关的症状。症状包括智力障碍、先前获得的运动技能丧失、进食困难、肌肉张力异常、畸形巨头、瘫痪和癫痫发作。对于患有新生儿/婴儿CD的儿童而言，预期寿命通常限于前十年。患有轻度/青少年形式的CD的个体可能展现出语言及运动技能发育迟缓，并且具有平均寿命。
[0006]迄今为止，尚不存在用于停止或减慢CD的神经退行性作用的治疗方法。当前在临床使用中或正在评估中的治疗方法旨在减轻症状并最大限度地提高生活质量。物理疗法、喂食管和抗癫痫药物可用于治疗一些症状并提高生活质量。因此，非常需要治疗CD的新型治疗方法。
[0007]专利技术概述
[0008]本文公开并举例说明了编码天冬氨酸酰化酶(ASPA)的经修饰的核酸、以及包含经修饰的核酸的载体(例如，rAAV载体)、以及通过向有此需要的患者施用经修饰的核酸或包含经修饰的核酸的载体来治疗由ASPA蛋白的水平减少所介导的疾病、病症或病况的方法。
[0009]本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文所述的本专利技术的特定实施方案的许多等效物。此类等效物旨在由以下实施方案(E)涵盖。
[0010]E1.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约
97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0011]E2.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含含有或组成为SEQ ID NO:2的序列的核酸序列。
[0012]E3.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含与SEQ ID NO:1的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0013]E4.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含含有或组成为SEQ ID NO:1的序列的核酸序列。
[0014]E5.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含与SEQ ID NO:3的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0015]E6.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含含有或组成为SEQ ID NO:3的序列的核酸序列。
[0016]E7.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0017]E8.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含含有或组成为SEQ ID NO:2的序列的核酸序列。
[0018]E9.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含与SEQ ID NO:1的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0019]E10.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含含有或组成为SEQ ID NO:1的序列的核酸序列。
[0020]E11.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含与SEQ ID NO:3的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0021]E12.一种编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含含有或组成为SEQ ID NO:3的序列的核酸序列。
[0022]E13.一种包含编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸的重组核酸，该经修饰的核酸包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0023]E14.一种包含编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸的重组核酸，该经修饰的核酸包含或组成为SEQ ID NO:2的核酸序列。
[0024]E15.一种包含编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸的重组核酸，该经修饰的核酸包含与SEQ ID NO:1的核酸序列至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％相同的核酸序列。
[0025]E16.一种包含编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸的重组核酸，该经修饰的核酸包含或组成为SEQ ID NO:1的核酸序列。
[0026]E17.一种包含编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸的重组核酸，该经
修饰的核酸包含与SEQ ID NO:3的核酸序列至少约80％、约85％、约本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的分离的核酸，其包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同的核酸序列。2.编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸，其包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同的核酸序列。3.包含编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸的载体基因组，所述经修饰的核酸包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同的核酸序列。4.如权利要求3所述的载体基因组，其中所述载体基因组是重组腺相关病毒(rAAV)载体基因组。5.如权利要求3或4所述的载体基因组，其中所述载体基因组是自身互补的。6.重组腺相关病毒(rAAV)载体，其包含：包含经修饰的核酸的载体基因组，所述经修饰的核酸包含与SEQ ID NO:2的核酸序列至少约80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同的核酸序列；以及选自以下的衣壳：Olig001、Olig002、Olig003、AAV1、AAV2、AAV3、AAV3A、AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh10、AAVrh74、RHM4
‑
1、RHM15
‑
1、RHM15
‑
2、RHM15
‑
3/RHM15
‑
5、RHM15
‑
4、RHM15
‑
6、AAVhu.26、AAV1.1、AAV2.5、AAV6.1、AAV6.3.1、AAV9.45、AAV2i8、AAV2G9、AAV2i8G9、AAV2
‑
TT、AAV2
‑
TT
‑
S312N、AAV3B
‑
S312N、AAV
‑
DJ、AAV
‑
DJ/8、AAV
‑
DJ/9和AAV
‑
LK03的衣壳。7.如权利要求6所述的rAAV载体，其中所述衣壳是Olig001、Olig002或Olig003衣壳。8.如权利要求6或7所述的rAAV载体，其中所述衣壳是包含病毒蛋白1(VP1)的Olig001衣壳并且其中所述VP1包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。9.如权利要求6
‑
8中任一项所述的rAAV载体，其中所述衣壳是包含VP1的Oligo001衣壳并且其中所述VP1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。10.如权利要求6
‑
9中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体基因组是自身互补的。11.如权利要求6
‑
10中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体基因组进一步包含至少一个选自以下的元件：至少一个AAV反向末端重复(ITR)序列、增强子、启动子、外显子、内含子和多腺苷酸化(polyA)信号序列。12.如权利要求6
‑
11中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体基因组进一步包含至少一个选自以下的元件：至少一个AAV2 ITR、巨细胞病毒(CMV)增强子、杂合形式的CBA启动子(CBh启动子)、鸡β
‑
肌动蛋白(CBA)外显子、CBA内含子、小鼠微小病毒(MVM)内含子和牛生长激素(BGH)polyA。13.如权利要求6
‑
12中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体基因组进一步包含至少一个选自以下的元件：至少一个包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:19的核酸序列的ITR；包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:17的核酸序列的增强子；包含SEQ ID NO:7的核酸序列的启动子；包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:18的核酸序列的外显子；包含SEQ ID NO:9的核酸序列的内含子；包含SEQ ID NO:10的核酸序列的内含子；和包含SEQ ID NO:11的核酸序列的polyA。14.包含载体基因组的rAAV载体，所述载体基因组从5
’
至3
’
包含：a)包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:19的核酸序列的AAV反向末端重复
(ITR)；b)包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:17的核酸序列的增强子；c)包含SEQ ID NO:7的核酸序列的启动子；d)包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:18的核酸序列的外显子；e)包含SEQ ID NO:9的核酸序列的内含子；f)包含SEQ ID NO:10的核酸序列的内含子；g)包含SEQ ID NO:2的核酸序列的编码天冬氨酸酰基转移酶(ASPA)的经修饰的核酸；h)包含SEQ ID NO:11的核酸序列的polyA；和i)包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:19的核酸序列的AAV ITR。15.如权利要求14所述的rAAV载体，其中所述核酸是自身互补的。16.如权利要求14或15所述的rAAV载体，其中所述载体包含含有病毒蛋白1(VP1)的Olig001衣壳并且其中所述VP1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。17.rAAV载体，其包含：包含病毒蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：P利昂，J弗朗西斯，BT阿萨夫，S阿萨诺，K黑尔斯，AP伯格，
申请(专利权)人：美国辉瑞有限公司，
类型：发明
国别省市：