一种胆汁酸的检测方法及胆汁酸衍生物技术

本发明专利技术涉及一种胆汁酸的检测方法及胆汁酸衍生物，该检测方法包括将待测样品与衍生试剂反应后通过液相色谱和质谱进行分离及检测；其中，所述待测样品包括一种或多种胆汁酸，且所述一种或多种胆汁酸中的至少部分胆汁酸包含羧基，所述衍生试剂包括2

【技术实现步骤摘要】
一种胆汁酸的检测方法及胆汁酸衍生物


[0001]本专利技术涉及胆汁酸的检测，尤其涉及一种基于液质联用技术的胆汁酸的检测方法。

技术介绍

[0002]胆汁酸与肝胆系统疾病以及能引起胆汁酸代谢异常的其它疾病都有着密切的关系，一旦肝脏或胆囊等发生病变，如肝炎、肝硬化、胆石症、妊娠期胆汁淤积症(ICP)等，胆汁酸的“肠肝循环”就会受阻，体液中的胆汁酸水平升高。这些疾病的总胆汁酸(TBA)升高水平可能接近，但由于胆汁酸谱的成分不同，测定TBA水平对肝胆疾病的鉴别有局限性。
[0003]具体而言，根据结构的不同可将胆汁酸分为两大类，一类是游离型胆汁酸，包括羟基胆酸和酮基胆酸；另一类是结合型胆汁酸，其是游离型胆汁酸与甘氨酸、牛磺酸、硫酸、葡萄糖醛酸等的结合物。最新研究发现，生物体液中的胆汁酸结合物类型多样，既有单结合物，也有双结合物；并且不同体液样本中胆汁酸的亚型分布也存在显著差异，如人体血液样本中，甘氨结合型胆汁酸、二羟基胆汁酸最为丰富，人体尿液样本中胆汁酸的硫酸化程度最高，而人体粪便样本中酮基胆汁酸含量最高。因此，建立一种能同时覆盖不同生物基质类本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胆汁酸的检测方法，包括将待测样品与衍生试剂反应后通过液相色谱和质谱进行分离及检测；其中，所述待测样品包括一种或多种胆汁酸，且所述一种或多种胆汁酸中的至少部分胆汁酸包含羧基，所述衍生试剂包括2
‑
二甲氨基乙胺、3
‑
二甲氨基
‑1‑
丙胺及4
‑
二甲氨基
‑1‑
丁胺中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述待测样品中的包含羧基的所述胆汁酸与所述衍生试剂发生反应，所述反应的反应温度为15～35℃；和/或，所述反应的反应体系还包括催化剂和偶联剂。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述待测样品包括血清、尿液、粪便中的一种或多种；和/或，所述催化剂包括O
‑
(7
‑
氮杂苯并三唑
‑1‑
基)
‑
N,N,N
’
,N
’‑
四甲基脲六氟磷酸酯，所述偶联剂包括1
‑
羟基苯并三唑；和/或，在所述反应体系中，所述衍生试剂、所述催化剂和所述偶联剂的摩尔比为(60～600):(10～100):(10～100)。4.根据权利要求1所述的方法，包括如下步骤：提供包含一种或多种同位素胆汁酸的内标溶液；提供包含一种或多种胆汁酸的具有浓度梯度的多种标准品溶液；将所述内标溶液和所述多种标准品溶液混合后通过液相色谱和质谱进行分离及检测，根据检测结果及所述内标溶液、所述标准品溶液中胆汁酸的浓度得到各胆汁酸的定量校正方程；提供包含衍生试剂的溶液；将所述包含衍生试剂的溶液与所述待测样品混合并进行反应，制得检测样本；以及将所述检测样本通过液相色谱和质谱进行分离及检测，结合检测结果及各胆汁酸的定量校正方程，得到各胆汁酸的检测结果；其中，所述标准品溶液中的胆汁酸的种类与所述待测样品中的胆汁酸的种类相同，所述内标溶液中的胆汁酸为所述待测样品中的至少部分胆汁酸的同位素标记物。5.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述液相色谱中，采用反相C18色谱柱，柱温为30～45℃，流速为0.2～0.4mL/min，流动相A为甲酸铵和醋酸的混合水溶液，流动相B为乙腈溶液。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述多种胆汁酸包括能够与所述衍生试剂发生反应的含羧基的胆汁酸和不能与所述衍生试剂发生反应的其他胆汁酸；在所述质谱检测中，采用电喷雾电离正离子检测模式对所述含羧基的胆汁酸进行扫描，采用电喷雾电离负离子检测模式对所述其他胆汁酸进行扫描。7.根据权利要求6所述的方法，其中，在所述质谱检测中，离子源温度为500～600℃，雾化气压为30～50psi，辅助气压为40～60psi，气帘气的压力为25～45psi，喷雾电压为4000～5000V或
‑
4000～
‑
5000V。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种胆汁酸包括游离羟基化胆汁酸、游离酮基化胆汁酸、硫酸/葡萄糖醛酸结合型胆汁酸、甘氨结合型胆汁酸、甘氨硫酸双结合型胆汁酸、牛磺结合型胆汁酸中的一种或多种。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述游离羟基化胆汁酸包括：3β,5α,6β
‑
羟基
‑
胆
烷酸、3α,7α,12β
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、3α,7β,12α
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、ω
‑
鼠胆酸、α
‑
鼠胆酸、β
‑
鼠胆酸、3β
‑
胆酸、3β,7β
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、3α,6β
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、3β,6α
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、猪胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、3β,7α
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、胆酸、3β,12β
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、3α,12β
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、3β,12α
‑
羟基
‑
5β
‑
胆烷酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、3β
‑
羟基
‑
5α
‑
胆烷酸、3β
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊歆，赵荣生，张现化，张元元，
申请(专利权)人：北京大学第三医院北京大学第三临床医学院，
类型：发明
国别省市：