塔宾曲霉菌株Yw-4及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一株塔宾曲霉(Aspergillustubingensis)菌株Yw

【技术实现步骤摘要】
塔宾曲霉菌株Yw
‑
4及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及塔宾曲霉菌株Yw
‑
4及其应用。

技术介绍

[0002]半纤维素是木质纤维素中目前利用最少的部分，其从不同的植物来源和植物部位提取将具有不同的分子和结构。油茶果壳中半纤维素含量丰富，约含36％～50％，且含量最多的单糖是木糖，其次是葡萄糖。半纤维素中存在着大量的木聚糖，主要以β
‑
1,4
‑
糖苷键的木糖单元形式聚合，工业相关的微生物不能直接使用聚合物作为碳源，木聚糖的天然结构形式阻碍了微生物代谢灵活性和半纤维素的有效利用。而内切木聚糖酶和β
‑
木糖苷酶作为关键酶能有效地将其降解为低聚糖和单糖。因此，木聚糖酶作为半纤维素酶系中最普遍也最重要的一种，被作为半纤维素降解的研究重点。木聚糖酶可制浆漂白，将半纤维素转化为生产原料、生物燃料和生产木糖，其市场需求已高达2亿美元。
[0003]木聚糖酶可由曲霉菌、木霉菌、芽孢杆菌、链霉菌等微生物产生，相关微生物在堆肥、泥土、温泉、海水和高等动物消化道均有发现。Irdawati等从温泉中筛选出产木聚糖酶的高效半纤维素降解菌Bacillus sp.1，其透明圈与菌落直径比值达0.74；姜立春等以腐烂的木材为菌源，筛选到1株半纤维素高效降解菌株Cellulomonas sp J
‑
25，木聚糖酶的活性达62.8U/mL；Jiang等分离并鉴定了一种能将半纤维素等多糖转化为丁醇和异丙醇的野生型C.beijerinckii NJP7菌株，它能分泌胞外木聚糖酶，有效水解半纤维素。然而，作为油茶果壳中最丰富的成分，油茶果壳半纤维素的应用还没有得到足够的重视。
[0004]每吨油茶果实通常产生约0.54吨的废壳，大量的油茶果壳作为生物废弃物被丢弃以达到快速处理的目的。因此，充分利用这种生物固体废弃物，对提高其经济价值和环境保护具有重要意义。本实验将筛选具有降解油茶果壳性能的真菌，为绿色、安全、无污染处理生物废弃物提供理论依据和技术支撑。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供了一种株塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4及其应用。
[0006]为达到上述目的，本专利技术筛选得到一株塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4，其保藏编号为GDMCCNo.62598，保藏日期：2022年7月4日，保藏地址为：中国广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)。
[0007]本专利技术还提供一种如上所述的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4在制备木聚糖酶或木聚糖酶制剂中的应用。
[0008]本专利技术还提供一种如上所述的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4在降解茶油果壳中的应用。
[0009]本专利技术还提供一种产木聚糖酶的方法，是发酵所述的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4，收集发酵产物，即得到木聚糖酶。
1.0g，CaCl
2 0.3g，微量元素溶液1mL。
[0026]分离培养基(g/L)：果壳粉10g，酵母浸粉4.5g，K2HPO
4 2.0g，(NH4)2SO
4 3.0g，MgSO4·
7H2O 0.4g，NaCl 5.0g，琼脂20g。
[0027]PDA培养基(g/L)：马铃薯浸出粉12g，葡萄糖20g，琼脂14g。
[0028]木聚糖初筛培养基(g/L)：木聚糖10g，MgSO4·
7H2O 0.2g，KH2PO
4 2.0g，NaCl 0.2g，CaCl
2 0.1g，(NH4)2SO
4 2.5g，琼脂粉15g。
[0029]无机盐培养液(g/L)：KH2PO
4 1.0g，NaCl 0.1g，MgSO4·
7H2O 0.3g，(NH4)2SO
4 2.5g，CaCl
2 0.1g，微量元素溶液1mL。
[0030]保藏/种子培养基(g/L)：牛肉浸粉3g，蛋白胨10g，NaCl 5g(平板则加琼脂15g)。微量元素溶液(g/100ml)：FeSO4·
7H2O 0.005g，ZnSO4·
7H2O 0.014g，MnSO4·
H2O 0.016g，CoCl2·
6H2O 0.02g(溶解后备用，在使用时微量元素溶液的加入量为1L培养基加1mL微量元素溶液)。
[0031]木糖：合肥巴斯夫生物科技有限公司；
[0032]木聚糖：合肥巴斯夫生物科技有限公司；
[0033]3,5
‑
二硝基水杨酸显色剂(DNS溶液)：PHYGENE；
[0034]乳酸酚蓝染色剂盒青岛海博生物；
[0035]Bradford蛋白浓度测定试剂盒PHYGENE；
[0036]Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒生工股份有限公司；
[0037]SanPrep柱式DNAJ胶回收试剂盒生工股份有限公司。
[0038]实施例：1
[0039]塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4菌株的筛选
[0040]具体步骤如下：
[0041]样品采集于广西科技大学板栗林中的腐烂的土壤(0
‑
20cm)、腐木质、腐烂板栗，装于自封袋中；油茶果壳用热水浸泡清洗后，粉碎，用60目筛子过滤，用三角瓶盛装，经121℃、15min高压蒸汽灭菌，在烘箱105℃烘干，密封保存
[0042]先称取样品5g，倒入至事先准备好的有玻璃珠50mL无菌水且规格为250mL三角瓶中，放置于已设置150r/min的全温摇床中震荡30min，为使样品沉降，再室温静置5
‑
10min，最后吸取上部悬浊液5mL至富集培养基的三角瓶内，30℃恒温摇床培养3d。
[0043]待液体富集培养基出现肉眼可见的浑浊时，加入1mL富集菌液贮入盛有9mL无菌水的试管中，按照梯度稀释法用无菌水连续梯度稀释出10
‑1‑
10
‑3，再把已稀释好的溶液中各吸取200μL，在果壳粉分离培养基上表面轻轻地涂布均匀，10
‑2‑
10
‑3梯度做2个平行，置于30℃恒温培养箱内培养。待长出菌群后，把细菌和真菌分别纯化，挑取真菌选用点种法至PDA培养基，若有其它杂菌混杂，就需要再一次进行分离、纯化直到获得纯的菌株。
[0044]将筛选得到的真菌点种于PDA培养基平板上，30℃培养2d后记录其菌落大小、颜色、质地等特征；制片真菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4，其保藏编号为GDMCC No.62598，保藏日期：2022年7月4日，保藏地址为：中国广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)。2.一种如权利要求1所述的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4在制备木聚糖酶或木聚糖酶制剂中的应用。3.一种如权利要求1所述的塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)菌株Yw
‑
4在降解茶油果壳中的应用。4.一种产木...

【专利技术属性】
技术研发人员：林海涛，龚杨轩，
申请(专利权)人：柳州苗氏油茶科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：