一种红托竹荪液体母种的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种红托竹荪液体母种的制备方法，包括以下步骤：将红托竹荪木屑菌种活化后接入活性培养基，培养出红托竹荪平板母种；将平板母种接入试管斜面培养基，培养成斜面菌种；按配方配置液体培养基，将斜面菌种捣碎成0.1~0.2 cm2小菌块接入液体培养基；接种完成后在28℃、黑暗条件下静止培养2天，转至25℃的恒温摇床中，150r/min的转速培养15天，制得红托竹荪液体菌种的母种。本发明专利技术缩短生产周期，降低成本，配方简单生长速率快，萌发点多，成分更简单，更易配置和制备，菌丝平均生长速度可达1.13mm/d，平均满袋时间为100天左右，适宜进一步推广使用。宜进一步推广使用。宜进一步推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种红托竹荪液体母种的制备方法


[0001]本专利技术属于食用菌栽培
，具体涉及一种红托竹荪液体母种的制备方法。
[0002]
技术介绍

[0003]红托竹荪（Phallus rubrovolvatus Zang.Ji et Lio），属于担子菌门、腹菌纲、鬼笔目、鬼笔科、鬼笔属，是一种名贵食用菌，其体态优美，有着“雪裙仙子”、“真菌皇后”、“真菌之花”的美誉之称。子实体主要由菌盖、菌裙、菌柄和菌托组成，富含大量的氨基酸、蛋白质、膳食纤维、多糖等营养成分。可鲜食，亦可干制后食用，菌柄肥厚，菌裙脉粗眼大，久煮不糊，口感清鲜脆嫩、味道鲜美，是一种食药兼用的大型真菌。其中的多糖还具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、抗疲劳等作用，现有技术中的液体菌种培养基配方复杂，导致制备难，生产周期长生长速率慢，萌发点少，成本高。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述缺点而提供一种缩短生产周期，降低成本，配方简单生长速率快，萌发点多，成分更简单，更易配置和制备的红托竹荪液体母种的制备方法。
[0005]本专利技术的目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的:本专利技术的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)培养基的前期准备：包括菌种活化与纯化，试管斜面培养基制备，试管平板培养基制备，液体培养基制作，接种摇床培养；2)菌种活化：将红托竹荪母种从冰箱取出，室温内避光放置2天，利用镊子，夹取母种木屑菌块，直径0.5~0.8cm，置于平板培养基中央，25℃下避光培养15天；3)斜面菌种制备：利用接种针，挑取活化后的平板菌种块接种于斜面培养基，放置在恒温气候箱，避光条件下25℃培养25~30天，培养至菌丝长满斜面，制成斜面菌种备用；4)液体培养基制备，根据培养基配方精确称量并配置分装至锥形瓶，在121 ℃和0.15Mpa的条件下持续灭菌30min，待培养基冷却至室温；5)：取一只长满的斜面菌种，在无菌条件下接种，使气生菌丝一面向上悬浮，在28℃条件下，黑暗静置48 h，然后放入往复式恒温振荡器中，在25℃、150r/min条件下进行摇床培养15天，即可得到红托竹荪液体菌种的母种。
[0006]所述步骤1)中试管斜面培养基制备：称取新鲜马铃薯200g切成薄片，加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤，得滤液A，称取新鲜无霉变的麦麸200g，米糠50g，玉米粉50g，黄豆粉50g，混合均匀，使用纱布包扎好，然后加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤得滤液B，将滤液A和B混合均匀，加入葡萄糖20g、KH2PO42g、MgSO41g、琼脂20g，补足水至1000mL，pH自然；配备完成后加热搅拌使琼脂溶解，并趁热将培养基分装至试管中，约占试管的1/4，每支约20mL，塞好棉花塞或橡胶塞，成单数捆扎一起，棉花塞端包扎油皮纸或塑料薄膜，在121℃和0.15Mpa的条件下灭菌30min，待试管冷却至50℃左右，将成捆斜放在斜面
板上，斜面长度不超过试管长度的3/4，冷却后即为斜面培养基。
[0007]所述步骤1)中试管平板培养基制备；称取新鲜马铃薯200g切成薄片，加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤，得滤液A，称取新鲜无霉变的麦麸200g，米糠50g，玉米粉50g，黄豆粉50g，混合均匀，使用纱布包扎好，然后加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤得滤液B，将滤液A和B混合均匀，加入葡萄糖20g、KH2PO42g、MgSO41g、琼脂20g，补足水至1000mL，pH自然；配备完成后分装至1000mL三角瓶中，每瓶500mL，121℃和0.15Mpa灭菌30min，待培养基冷却至50~60℃时，在无菌环境下倒平板，每个平板30~35mL。
[0008]所述步骤1)中液体培养基制作：精确称取葡萄糖50g，蛋白胨2g，KH2PO43g，MgSO41.5g，(NH4)2SO
4 1g，维生素B
1 20mg，加水配置成1000mL，pH自然，将配置好的液体培养基按每瓶300mL装入500mL的锥形瓶中，盖上棉花塞，绑上牛皮纸，在123℃的条件下灭菌30min，待冷却至室温后，即可接种。
[0009]所述步骤1)中接种摇床培养：在无菌环境下，取一只斜面菌种，将液体培养基倒入试管中，总体不超过试管的3/4，使用接种钩和接种铲将斜面菌种捣碎成0.1~0.2 cm2菌块，制成菌块悬液，然后全部接入锥形瓶中，塞好棉花塞，包上牛皮纸或报纸，接种完成。
[0010]所述平板为玻璃平板，直径90mm，试管为玻璃试管，玻璃试管大小为25mm
×
200mm，棉花塞为非脱脂棉。
[0011]本专利技术与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本专利技术通过将红托竹荪母种从冰箱取出，室温内避光放置2天，利用镊子，夹取母种木屑菌块，置于平板培养基中央，25℃下避光培养15天；利用接种针，挑取活化后的平板菌种块接种于斜面培养基，放置在恒温气候箱，避光条件下25℃培养25~30天，培养至菌丝长满斜面，制成斜面菌种备用；根据培养基配方精确称量并配置分装至锥形瓶，在121 ℃和0.15Mpa的条件下持续灭菌30min，待培养基冷却至室温；取一只长满的斜面菌种，在无菌条件下接种，使气生菌丝一面向上悬浮，在28℃条件下，黑暗静置48 h，然后放入往复式恒温振荡器中，在25℃、150r/min条件下进行摇床培养15天，即可得到红托竹荪液体菌种的母种。本方法摇瓶仅需14~15天，菌丝体生物量可达到10.38 g
·
L
‑1，得到的一级菌种可直接作为扩大发酵生产菌种，该方法能有效地缩短红托竹荪液体母种的制备时间，菌丝生长速度可达1.13mm/d，满袋时间为95
‑
105天，培养出的红托竹荪液体菌种母种，生长速率快、萌发点多等优点，与现有技术相比，本专利液体菌种培养基成分更简单，更易配置，通过将菌种捣碎成小菌块，增加萌发点，有利于提高菌丝球增值速度，实现了缩短生产周期，降低成本，配方简单生长速率快，萌发点多，成分更简单，更易配置和制备，适宜进一步的推广应用。
[0012]附图说明
[0013]图1所示为制备的液体菌种，呈球状。
[0014]图2所示为接种后菌棒的长势，菌丝洁白。
具体实施方式
[0015]下面通过具体的实施方式，对本专利技术的技术方案进行进一步的详细说明。
[0016]实施例1
本专利技术的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)培养基的前期准备：包括菌种活化与纯化，试管斜面培养基制备，试管平板培养基制备，液体培养基制作，接种摇床培养；2)菌种活化：将红托竹荪母种从冰箱取出，室温内避光放置2天，利用镊子，夹取母种木屑菌块，直径0.5cm，置于平板培养基中央，25℃下避光培养15天；3)斜面菌种制备：利用接种针，挑取活化后的平板菌种块接种于斜面培养基，放置在恒温气候箱，避光条件下25℃培养25天，培养至菌丝长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)培养基的前期准备：包括菌种活化与纯化，试管斜面培养基制备，试管平板培养基制备，液体培养基制作，接种摇床培养；2)菌种活化：将红托竹荪母种从冰箱取出，室温内避光放置2天，利用镊子，夹取母种木屑菌块，直径0.5~0.8cm，置于平板培养基中央，25℃下避光培养15天；3)斜面菌种制备：利用接种针，挑取活化后的平板菌种块接种于斜面培养基，放置在恒温气候箱，避光条件下25℃培养25~30天，培养至菌丝长满斜面，制成斜面菌种备用；4)液体培养基制备，根据培养基配方精确称量并配置分装至锥形瓶，在121 ℃和0.15Mpa的条件下持续灭菌30min，待培养基冷却至室温；5)：取一只长满的斜面菌种，在无菌条件下接种，使气生菌丝一面向上悬浮，在28℃条件下，黑暗静置48 h，然后放入往复式恒温振荡器中，在25℃、150r/min条件下进行摇床培养15天，即可得到红托竹荪液体菌种的母种。2.根据权利要求1所述的一种红托竹荪液体母种的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中试管斜面培养基制备：称取新鲜马铃薯200g切成薄片，加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤，得滤液A，称取新鲜无霉变的麦麸200g，米糠50g，玉米粉50g，黄豆粉50g，混合均匀，使用纱布包扎好，然后加水1000mL，煮沸25 min，冷却后取纱布过滤得滤液B，将滤液A和B混合均匀，加入葡萄糖20g、KH2PO42g、MgSO41g、琼脂20g，补足水至1000mL，pH自然；配备完成后加热搅拌使琼脂溶解，并趁热将培养基分装至试管中，约占试管的1/4，每支约20mL，塞好棉花塞或橡胶塞，成单数捆扎一起，棉花塞端包扎油皮纸或塑料薄膜，在121℃和0.15Mpa的条件下灭菌30min，待试管冷却至50℃左右，将成捆斜放在斜面板上，斜面长度不超过试管长度的3/4，冷却后即...

【专利技术属性】
技术研发人员：李启华，卢征华，李娇，李晓江，阳旭，
申请(专利权)人：贵州金荪生物科技开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：