一种混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法技术

本发明专利技术属于抗生素检测技术领域，具体涉及一种混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，包括以下步骤：(1)待测样品的提取；(2)待检测液的制备；(3)将所述待检测液进行HPLC测定，梯度洗脱。本发明专利技术提供的检测方法简单、快捷、绿色环保，首次将HPLC检测范围扩大为混合型饲料添加剂产品，填补了混合型饲料添加剂产品中金霉素和土霉素同步检测方法的空白；样品前处理首次采用HLB、MCX两步净化法，可最大程度降低样品基质效应，具有色谱分离较好、快速准确、灵敏度高、重现性好的优点；待检测样品的前处理简单、分析时间短、大大提高了检测效率，且检测方法的回收率和重复性均满足分析检测要求。要求。要求。

【技术实现步骤摘要】
一种混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法


[0001]本专利技术属于抗生素检测
，具体涉及一种混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法。

技术介绍

[0002]土霉素和金霉素属于四环素类抗生素，具有共同的氢化并四苯环结构，仅取代基不同。此类物质对葡萄球菌、溶血性链球菌、炭疽杆菌、破伤风梭菌和梭状芽胞杆菌等革兰氏阳性菌作用较强。在养殖业中被广泛用作饲料添加剂，具有预防动物疾病和促生长的作用。根据农业部194号公告和246号公告有关规定，自2020年1月1日起，废止仅有促生长类药物饲料添加剂使用；自2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料；按照上述规定，土霉素和金霉素均不得在商品饲料中使用。为了确保饲料及动物性食品安全，维护公共卫生和生态安全，建立混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法来监控其非法添加势在必行。
[0003]目前已报道的土霉素和金霉素的检测方法主要有微生物法、薄层色谱法、酶联免疫法、高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法等。农业农村部公告第282号
‑2‑
2020公布了饲料中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的测定，但该标准方法只适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料，而并不适用于混合型饲料添加剂产品中土霉素和金霉素的检测，因此混合型饲料添加剂产品中此类药物的检测尚属盲区。
[0004]本专利技术建立了采用高效液相色谱法同时测定混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的方法，使其灵敏度、准确度、精密度均满足残留分析方法的要求，填补了检测混合型饲料添加剂产品中土霉素和金霉素检测方法的空白。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种前处理简单，分析时间短，快速准确，灵敏度高，重现性好的玻璃表面处理材料，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为达到上述技术目的，本专利技术的技术方案：
[0007]一种混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，包括以下步骤：
[0008](1)称取待测样品，加入提取液进行提取，涡动混匀，离心，重复提取两次，合并上清液，备用；
[0009](2)所述上清液全部过HLB小柱，甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，加水稀释，形成稀释液，所述稀释液全部过MCX小柱，甲酸铵溶液洗脱，收集洗脱液，形成待检测液；
[0010](3)将所述待检测液进行高效液相色谱测定，梯度洗脱。
[0011]作为一种改进，步骤(1)中，所述提取液为0.05M盐酸溶液、盐酸丙酮溶液或0.1M Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲溶液
[0012]作为进一步地改进，步骤(1)中，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液的pH＝3～5。
[0013]优选的，步骤(1)中，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液的pH＝4。
[0014]作为一种改进，步骤(1)中，每次提取的时间为5～20min。
[0015]优选的，步骤(1)中，每次提取的时间为10min。
[0016]作为一种改进，步骤(2)中，所述HLB小柱或所述MCX小柱的规格为3cc/60mg。
[0017]作为一种改进，步骤(2)中，所述甲醇水溶液的体积浓度为30～70％，优选的，所述甲醇水溶液的体积浓度为50％。
[0018]作为一种改进，步骤(2)中，所述甲酸铵溶液中乙腈与水的体积比为10:40。
[0019]作为一种改进，步骤(3)中，所述高效液相色谱测定的条件为：
[0020]色谱柱：C
18
色谱柱；
[0021]流动相：A相为甲醇，B相为咪唑缓冲溶液；
[0022]所述梯度洗脱为：按体积比，0～1min：A相5％，B相95％；1～13min：A相5％～95％，B相95％～5％；13～16min：A相95％～5％，B相5％～95％；
[0023]流速：0.8mL/min；
[0024]进样量：10μL；
[0025]柱温：40℃；
[0026]紫外检测器检测波长：373nm。
[0027]由于采用上述技术方案，本专利技术的有益效果：
[0028]本专利技术提供的检测方法首次将检测范围扩大为混合型饲料添加剂产品，填补了混合型饲料添加剂产品中金霉素和土霉素同步检测方法的空白；样品前处理首次采用HLB、MCX两步净化法，可最大程度降低样品基质效应，具有快速准确、灵敏度高、重现性好的优点，灵敏度明显高于现有的方法；待检测样品的前处理简单、分析时间短、大大提高了检测效率，且检测方法的回收率和重复性均满足分析检测要求。
附图说明
[0029]图1为0.04μg/mL土霉素和金霉素混合标准工作溶液液相色谱图；
[0030]图2为空白混合型饲料添加剂样品液相色谱图；
[0031]图3为空白混合型饲料添加剂添加0.2mg/kg土霉素和金霉素液相色谱图。
具体实施方式
[0032]下面结合具体实施方式及附图对本专利技术作进一步的说明。
[0033]一、试剂与材料
[0034](1)标准品
[0035]盐酸土霉素(纯度不低于95％)、盐酸金霉素(纯度不低于95％)。
[0036](2)试剂
[0037]乙腈、甲醇均为色谱纯；水为一级水。
[0038]盐酸溶液(0.05mol/L)：准确移取4.5mL浓盐酸，注入1000mL水中，混匀。
[0039]Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲溶液(0.1mol/L)：分别称取柠檬酸12.9g，磷酸氢二钠10.9g，乙二胺四乙酸二钠37.2g，各自加水溶解，混合后用水稀释并定容至1000mL，用0.1mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至4.0
±
0.05。
[0040]50％甲醇水溶液：取甲醇50mL，水50mL，混匀。
[0041]甲酸铵溶液：称取60g甲酸铵溶解于400mL水中，再加100mL乙腈(4.2.2)，混匀。
[0042]咪唑缓冲溶液：称取68.08g咪唑、0.37g EDTA和10.72g乙酸镁溶于800mL水中，用乙酸调节pH值至7.2，加水定容至1000mL。
[0043](3)标准溶液配制
[0044]分别称取适量标准品，用0.05mol/L盐酸溶液溶解，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，
‑
18℃以下避光贮存。
[0045]标准中间溶液：准确移取标准储备溶液1mL于100mL容量瓶中，用0.05mol/L盐酸溶液定容，配制成浓度为10.0μg/mL标准中间溶液，避光保存，现用现配。
[0046](4)固相萃取柱
[0047]固相萃取柱HLB、MCX，规格为3cc，60mg。
[0048]二、样品处理...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取待测样品，加入提取液进行提取，涡动混匀，离心，重复提取两次，合并上清液，备用；(2)所述上清液全部过HLB小柱，甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，加水稀释，形成稀释液，所述稀释液全部过MCX小柱，甲酸铵溶液洗脱，收集洗脱液，形成待检测液；(3)将所述待检测液进行高效液相色谱测定，梯度洗脱。2.根据权利要求1所述的混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取液为盐酸溶液、盐酸丙酮溶液或Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲溶液。3.根据权利要求2所述的混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液的pH＝3～5。4.根据权利要求3所述的混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述Na2EDTA
‑
Mcllvaine缓冲液的pH＝4。5.根据权利要求1所述的混合型饲料添加剂中土霉素和金霉素的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，每次提取的时间为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玮，张芸，姚建华，孙延军，李会荣，宫玲玲，杜宁，朱娜，
申请(专利权)人：山东省畜产品质量安全中心山东省畜禽屠宰技术中心，
类型：发明
国别省市：