抗流感病毒多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抗流感病毒多肽及其应用。本发明专利技术提供一段抗病毒多肽p21截断体，蛋白质，为如下1)

【技术实现步骤摘要】
抗流感病毒多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及抗流感病毒多肽及其应用。

技术介绍

[0002]甲型流感病毒(IAV)是一种上呼吸道病原体，进化速度快，常导致季节性流行病和偶发流行病。根据世界卫生组织的统计，全球每年流感病毒导致约290,000
‑
650,000人死亡(http://www.who.int/news
‑
room/fact
‑
sheets/detail/influenza)。当前，2009年甲型H1N1流感病毒和H3N2流感病毒是季节性流行的主要毒株。目前主要采用接种疫苗和服用抗病毒药物的策略来预防和治疗流感病毒。由于变异株和耐药株的不断出现大大降低了目前疫苗和疗法的功效，因此仍然需要开发针对宿主因子新的抗流感药物。
[0003]当前用于治疗流感病毒的药物主要是金刚烷和神经氨酸酶抑制剂，它们分别靶向该病毒的M2离子通道和神经氨酸酶。金刚烷胺是1966年批准用于临床第一个抗IAV药物。起初，这种药物在抑制和预防IAV感染方面均非常成功，功效高达90％。但是，自2000年以来，季节性IAV亚型对这种药物的耐药性急剧增加，目前，在全球范围内传播的大多数IAV亚型，尤其是最常见的H1N1和H3N2均对金刚烷类耐药。
[0004]神经氨酸酶抑制剂(扎那米韦和奥司他韦)是目前唯一使用的抗流感药物。临床研究表明，IAV通过突变这些病毒成分已经获得了对药物的抗药性。根据CDC的数据，在2009年大流行的H1N1亚型出现之前，超过99％的H1N1分离株对奥司他韦具有抗药性。因此，制定新的抗击流感战略非常紧迫和必要。
[0005]抗流感病毒治疗作为救治流感感染的关键手段，但目前临床可及的有效抗病毒药物仅有神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitors，NAIs)。由于NAIs疗效的限制和耐药情况的出现，亟需研发疗效更优和耐药率更低的新型抗流感病毒药物。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的是提供一种蛋白质。
[0007]本专利技术提供的蛋白质，为如下1)
‑
3)中至少一种：
[0008]1)含有序列表中序列3第36
‑
43氨基酸残基的蛋白；
[0009]2)序列表中序列3第36
‑
43氨基酸残基所示的蛋白；
[0010]3)将1)或2)所示蛋白的氨基酸末端添加标签序列得到的蛋白。
[0011]编码上述蛋白质的核酸分子也是本专利技术保护的范围。
[0012]含有上述核酸分子的表达盒、重组载体、重组病毒或转基因细胞也是本专利技术保护的范围。
[0013]上述蛋白质或上述的核酸分子或上述的表达盒、重组载体、重组病毒或转基因细胞在制备如下产品中的应用也是本专利技术保护的范围：
[0014]1)治疗甲型流感病毒；
[0015]2)抑制甲型流感病毒的复制；
[0016]3)抑制甲型流感病毒中NP蛋白的表达；
[0017]3)降低甲型流感病毒的滴度；
[0018]4)预防或减轻甲型流感病毒引起的并发症。
[0019]上述应用中，所述甲型流感病毒引起的并发症为肺组织损伤或肺部炎症或体重下降。
[0020]本专利技术另一个目的是提供一种产品。
[0021]本专利技术提供的产品，包括上述蛋白质或上述的核酸分子或上述的表达盒、重组载体、重组病毒或转基因细胞。
[0022]上述产品具有如下至少一种功能：
[0023]1)治疗甲型流感病毒；
[0024]2)抑制甲型流感病毒的复制；
[0025]3)抑制甲型流感病毒中NP蛋白的表达；
[0026]3)降低甲型流感病毒的滴度；
[0027]4)预防或减轻甲型流感病毒引起的并发症。
[0028]上述产品中，所述甲型流感病毒引起的并发症为肺组织损伤或肺部炎症或体重下降。
[0029]本专利技术发现一段抗病毒多肽p21截断体，现有流感病毒对其没有耐药性，抗病毒效果好，由于多肽分子量小相对药物来讲副作用小，且比较稳定。与对照组相比较，p21截断体多肽处理组的小鼠体重明显减轻，小鼠的肺组织中的病毒滴度明显降低。进一步证明该p21截断体多肽模拟物具有显著抑制流感病毒复制的作用。
附图说明
[0030]图1为抗流感病毒多肽初的筛选。
[0031]图2为Western blot鉴定含有8个氨基酸的多肽模拟物抑制细胞内IAV的复制。
[0032]图3为免疫荧光实验检测含有8个氨基酸的多肽模拟物抑制细胞内IAV的复制。
[0033]图4为含有8个氨基酸的多肽模拟物抑制小鼠体内IAV的复制，比例尺为100μm。
具体实施方式
[0034]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0035]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0036]病毒经10日龄无特定病原体的鸡胚或者MDCK细胞进行扩繁并储存在
‑
80℃超低温冰箱中备用。所有关于活病毒的实验都是在3级生物安全实验室中进行的。
[0037]细胞：HEK293T细胞(人胚胎肾细胞系)，A549细胞(人肺腺癌上皮细胞系)和HeLa细胞是从国家细胞系储存中心获得并储存于液氮中备用。
[0038]所有细胞均在37℃的温度下，在含有10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基中维持和培养。
[0039]实验动物：5
‑
6周龄C57/BL6雌鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
[0040]商品化试剂：多肽模拟物由南京金斯瑞生物合成有限公司进行合成，siRNAs oligo模拟物购买自苏州吉玛基因股份有限公司；RaPure Total RNA Kit提取试剂盒从
Magen公司采购；RNA反转录试剂:5
×
MLV Buffer、MLV反转录酶、dNTPs、RNA酶抑制剂采购自Promega公司；SYBR Green PCR Mastermix购买自Roche公司；舒泰50购自Virbrac公司；磷酸盐缓冲液(PBS)、Lipofectamine 3000转染试剂购自Invitrogen公司；、100
×
青链霉素和EDTA
‑
胰酶购自迈晨科技有限公司；DMEM培养基、澳洲胎牛血清和OPTI
‑
MEM购买自Life Technologies公司；TPCK
‑
Trypsin购自SIGMA公司；7.5％BSA、30％丙烯酰胺溶液、TEMED由北京索莱宝公司提供；Tris、甘氨酸、过硫酸铵、SDS来自Amresco公司生产；6
×
Protein Loading Buffer购自全式金公司；蛋白Marker由Thermo公司生产；0.45μm P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蛋白质，为如下1)
‑
3)中至少一种：1)含有序列表中序列3第36
‑
43氨基酸残基的蛋白；2)序列表中序列3第36
‑
43氨基酸残基所示的蛋白；3)将1)或2)所示蛋白的氨基酸末端添加标签序列得到的蛋白。2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。3.含有权利要求2所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组病毒或转基因细胞。4.权利要求1所述蛋白质或权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的表达盒、重组载体、重组病毒或转基因细胞在制备如下产品中的应用：1)治疗甲型流感病毒；2)抑制甲型流感病毒的复制；3)抑制甲型流感病毒中NP蛋白的表达；3)降低甲型...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙怡朋，代重山，刘金华，马超，李玉涵，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：