一种人源α-乳清蛋白转基因表达载体、其制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种人源α

【技术实现步骤摘要】
一种人源
α
‑
乳清蛋白转基因表达载体、其制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种能在胚乳中特异性表达积累人源α
‑
乳清蛋白的转基因玉米材料的及应用。
技术背景
[0002]玉米(Zea mays)是世界上产量最高的禾本科作物之一。除了作为粮食外，玉米还是禽畜重要的饲料来源，也是重要的工业原料。提升并改良玉米的蛋白质品质对提高其营养价值，扩宽其使用范围有着重要意义。
[0003]醇溶蛋白是玉米籽粒中的主要储藏蛋白，占总蛋白的60％以上，然而其赖氨酸和色氨酸等必需氨基酸含量极低，导致传统的玉米籽粒中氨基酸组成不均衡。目前改良玉米籽粒氨基酸比例的方法主要分为三种：
[0004]一是利用通过玉米的o2突变体；
[0005]二是改变玉米籽粒中涉及赖氨酸的代谢途径，增加其合成量或阻断其下游通路；
[0006]三是导入外源基因让玉米在胚乳中表达一个氨基酸比例均衡的蛋白，能够显著地提高籽粒的蛋白质品质。
[0007]相较于前两种方法，方法三避开了o2突变体农艺性状不佳的缺陷和改变代谢通路可能造成的不良影响，更加简单易行。
[0008]人源α
‑
乳清蛋白是一种氨基酸比例均衡的蛋白质，与世界卫生组织(WHO)提出的理想蛋白质的氨基酸比例相接近。来源于人体，无生物毒性、安全性好。
[0009]为使人源α
‑
乳清蛋白能够成功表达并在成熟中积累，利用玉米27
‑
kDγ醇溶蛋白启动子的胚乳特异性构建在胚乳中表达人源α
‑
乳清蛋白的转化载体，通过农杆菌介导的玉米幼胚转化技术来获得转基因后代，进而分析一系列生理生化表现及细胞学变化，以期获得高赖氨酸的转基因玉米果穗。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的之一在于构建一种人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体及其制备方法。
[0011]本专利技术的目的之二在于使用人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体进行转化获得转基因玉米植株。
[0012]本专利技术的目的之三在于获得的人源α
‑
乳清蛋白转基因玉米植株的籽粒相较野生型赖氨酸含量提高。
[0013]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0014]一种人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体，采用PTF102作为转基因载体，将经过改造的人源α
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乳清蛋白CDS作为目的基因连入PTF102转基因载体中，获得所述人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体；其中PTF102转基因载体是的经过改造得到，并以玉米27kD
‑
γ
‑
醇溶蛋白启动子和终止子表达目的基因。
[0015]优选地，所述人源α
‑
乳清蛋白CDS为SEQ ID NO:1所示序列，SEQ ID NO:1的基因序
列为:
[0016]ATGAGGGTGTTGCTCGTTGCCCTCGCTCTCCTGGCTCTCGCTGCGAGCGCCACCTCCAAGCAATTCACAAAATGTGAGCTGTCCCAGCTGCTGAAAGACATAGATGGTTATGGAGGCATCGCTTTGCCTGAATTGATCTGTACCATGTTTCACACCAGTGGTTATGACACACAAGCCATAGTTGAAAACAATGAAAGCACGGAATATGGACTCTTCCAGATCAGTAATAAGCTTTGGTGCAAGAGCAGCCAGGTCCCTCAGTCAAGGAACATCTGTGACATCTCCTGTGACAAGTTCCTGGATGATGACATTACTGATGACATAATGTGTGCCAAGAAGATCCTGGATATTAAAGGAATTGACTACTGGTTGGCCCATAAAGCCCTCTGCACTGAGAAGCTGGAACAGTGGCTTTGTGAGAAGTTGCATGACGAGCTGTGA。
[0017]优选地，所述玉米的人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体，以玉米27kD
‑
γ
‑
醇溶蛋白启动子和终止子表达目的基因，采用SEQ ID NO:2基因序列，SEQ ID NO:2基因序列为：
[0018]27kD
‑
γ
‑
醇溶蛋白启动子：
[0019]CGTCCCGCGTCAATATTATTAAAAAACTCCTACATTTCTTTATAATCAACCCGCACTCTTATAATCTCTTCTCTACTACTATAATAAGAGAGTTTATGTACAAAATAAGGTGAAATTATGTATAAGTGTTCTGGATATTGGTTGTTGGCTCCATATTCACACAACCTAATCAATAGAAAACATATGTTTTATTAAAACAAAATTTATCATATATCATATATATATATATATATATATAAACCGTAGCAATGCACGGGCATATAACTAGTGCAACTTAATACATGTGTGTATTAAGATGAATAAGAGGGTATCCAAATAAAAAACTTGTTCGCTTACGTCTGGATCGAAAGGGGTTGGAAACGATTAAATCTCTTCCTAGTCAAAATTGAATAGAAGGAGATTTAATCTCTCCCAATCCCTTTCGATCATCCAGGTGCAACCGTATAAGTCCTAAAGTGGTGAGGAACACGAAACAACCATGCATTGGCATGTAAAGCTCCAAGAATTTGTTGTATCCTTAACAACTCACAGAACATCAACCAAAATTGCACGTCAAGGGTATTGGGTAAGAAACAATCAAACAAATCCTCTCTGTGTGCAAAGAAACACGGTGAGTCATGCCGAGATCATACTCATCTGATATACATGCTTACAGCTCACAAGACATTACAAACAACTCATATTGCATTACAAAGATCGTTTCATGAAAAATAAAATAGGCCGGACAGGACAAAAATCCTTGACGTGTAAAGTAAATTTACAACAAAAAAAAGCCATATGTCAAGCTAAATCTAATTCGTTTTACGTAGATCAACAACCTGTAGAAGGCAACAAAACTGAGCCACGCAGAAGTACAGAATGATTCCAGATGAACCATCGACGTGCTACGTAAAGAGAGTGACGAGTCATATACATTTGGCAAGAAACCATGAAGCTGCCTACAGCCGTCTCGGTGGCATAAGAACACAAGAAATTGTGTTAATTAATCAAAGCTATAAATAACGCTCGCATGCCTGTGCACTTCTCCATCACCACCACTGGGTCTTCAGACCATTAGCTTTATCTA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体，其特征在于，采用PTF102作为转基因载体，将经过改造的人源α
‑
乳清蛋白CDS作为目的基因连入PTF102转基因载体中，获得所述人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体；其中PTF102转基因载体是的经过改造得到，并以玉米27kD
‑
γ
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醇溶蛋白启动子和终止子表达目的基因。2.根据权利要求1所述玉米的人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体，其特征在于：所述人源α
‑
乳清蛋白CDS为SEQ ID NO:1所示序列，SEQ ID NO:1的基因序列为：ATGAGGGTGTTGCTCGTTGCCCTCGCTCTCCTGGCTCTCGCTGCGAGCGCCACCTCCAAGCAATTCACAAAATGTGAGCTGTCCCAGCTGCTGAAAGACATAGATGGTTATGGAGGCATCGCTTTGCCTGAATTGATCTGTACCATGTTTCACACCAGTGGTTATGACACACAAGCCATAGTTGAAAACAATGAAAGCACGGAATATGGACTCTTCCAGATCAGTAATAAGCTTTGGTGCAAGAGCAGCCAGGTCCCTCAGTCAAGGAACATCTGTGACATCTCCTGTGACAAGTTCCTGGATGATGACATTACTGATGACATAATGTGTGCCAAGAAGATCCTGGATATTAAAGGAATTGACTACTGGTTGGCCCATAAAGCCCTCTGCACTGAGAAGCTGGAACAGTGGCTTTGTGAGAAGTTGCATGACGAGCTGTGA。3.根据权利要求1所述玉米的人源α
‑
乳清蛋白转基因表达载体，其特征在于：以玉米27kD
‑
γ
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醇溶蛋白启动子和终止子表达目的基因，采用SEQ ID NO:2基因序列，SEQ ID NO:2基因序列为：27kD
‑
γ
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醇溶蛋白启动子：CGTCCCGCGTCAATATTATTAAAAAACTCCTACATTTCTTTATAATCAACCCGCACTCTTATAATCTCTTCTCTACTACTATAATAAGAGAGTTTATGTACAAAATAAGGTGAAATTATGTATAAGTGTTCTGGATATTGGTTGTTGGCTCCATATTCACACAACCTAATCAATAGAAAACATATGTTTTATTAAAACAAAATTTATCATATATCATATATATATATATATATATATAAACCGTAGCAATGCACGGGCATATAACTAGTGCAACTTAATACATGTGTGTATTAAGATGAATAAGAGGGTATCCAAATAAAAAACTTGTTCGCTTACGTCTGGATCGAAAGGGGTTGGAAACGATTAAATCTCTTCCTAGTCAAAATTGAATAGAAGGAGATTTAATCTCTCCCAATCCCTTTCGATCATCCAGGTGCAACCGTATAAGTCCTAAAGTGGTGAGGAACACGAAACAACCATGCATTGGCATGTAAAGCTCCAAGAATTTGTTGTATCCTTAACAACTCACAGAACATCAACCAAAATTGCACGTCAAGGGTATTGGGTAAGAAACAATCAAACAAATCCTCTCTGTGTGCAAAGAAACACGGTGAGTCATGCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋任涛，祁巍巍，李陈万里，刘景超，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：