【技术实现步骤摘要】
一种云实皮提取物PK
‑
PD模型建立方法及其应用
[0001]本专利技术涉及中草药
,更具体地说,涉及一种云实皮提取物PK
‑
PD模型建立方法及其应用。
技术介绍
[0002]类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病,其特征是滑膜组织增生、滑膜血管膜形成、软骨和骨质侵蚀。全球类风湿关节炎患病率高达0.18%
‑
1.07%,并呈逐年上升趋势。典型的临床特征是关节肿胀、疼痛和不可逆转的关节破坏,最终导致严重残疾并危及患者的身心健康。目前已经建立了各种动物模型来研究RA的病因、发病机制和影响因素,以及新的治疗靶点的研究和新疗法的评估,包括佐剂诱导的关节炎(AA)、胶原诱导的关节炎(CIA)、链球菌细胞壁诱导的关节炎模型等。AA模型在某些病理学、组织学和免疫学方面与人类类风湿关节炎有相似之处。因此,本实验采用AA模型作为疾病模型。
[0003]类风湿关节炎的病理机制很复杂,炎性细胞因子在类风湿关节炎中起主要作用。研究表明,IL
‑
6与IL
‑
1β和TNF
‑
α具有协同作用,产生血管内皮生长因子,作用于血管内皮细胞,增加其通透性,导致关节渗出和肿胀增加。这些炎症因子已被广泛用作评估药物炎症严重程度和疗效的生物标志物。
[0004]云实皮(C.decapetala)为豆科植物云实Caesalpinia decapetala(Roxb.)Alston的干燥根或根皮。临床上广泛用于治疗风湿关节痛、支气
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种云实皮提取物PK
‑
PD模型建立方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、标准曲线的制备1)分别称取适量3
‑
DSC、PTB、PTD,以甲醇溶解制成对照品储备液;2)取适量葛根素溶于甲醇,稀释成IS溶液,对储备液进行梯度稀释分别获得3
‑
DSC、PTB和PTD的标准曲线工作液;3)将100μL标准曲线工作液和50μLIS溶液加入到100μL空白血浆中,制备3
‑
DSC、PTB和PTD的标准曲线;S2、云实皮提取物的制备取云实皮干燥后用70%乙醇提取两次,将提取液混合过滤,减压蒸发乙醇,得到云实皮提取物;S3、云实皮提取物治疗AA模型大鼠1)取成年雄性SD大鼠,体重200
‑
220g,饲养1周;2)将上述大鼠随机平均分为CON组、MOD组、POS组和CDE组;除CON组外,其余组均于第1天右侧足底皮内注射CFA 0.1mL;POS组和CDE组分别口服给药雷公藤多苷片和步骤S2中的云实皮提取物;CON组和MOD组大鼠给予等体积的0.5%CMC
‑
Na;按上述四组剂量给药,每日2次,连续给药14天;3)末次给药后2h,经尾静脉收集各组大鼠血浆,采用ELISA法检测各组大鼠血浆TNF
‑
α、IL
‑
6、IL
‑
1β和RF水平;麻醉后处死大鼠,切取右侧后踝关节,分离周围软组织,浸泡于4%多聚甲醛溶液中,进行组织病理学检测;取大鼠关节组织用EDTA
‑
2Na脱钙,不同浓度乙醇逐级脱水,二甲苯透明包埋切片,厚度约4μm,脱蜡,以苏木精
‑
伊红染色,于显微镜下观察各组大鼠关节的组织病理学变化;S4、云实皮提取物在正常和疾病动物体内进行药动学实验1)取若干只雄性SD大鼠随机分为3组:单次给药正常组、单次给药模型组、多次给药模型组;2)多次给药模型组:灌胃给予步骤S2中的云实皮提取物,2次/d,连续给药14d;分别于给药前、末次给药后0.083、0.167、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24h经尾静脉采血0.25mL,将血浆样品在4℃环境保存;3)取上述血浆样品,6000
‑
8000rpm离心10
‑
15min后,取上清液分装成两份进行PK和PD分析,上清液样品储存在
‑
80
‑
90℃冰箱;S5、PK样品前处理取100μL步骤S4
‑
2中的血浆样品、20μL步骤S1
‑
2中的IS溶液和50μL 2%甲酸溶液加入1.5mL离心管中涡混1min,加入400μL的甲醇,涡混1
‑
3min,超声10
‑
13min,在4
‑
8℃下12000
‑
15000rpm离心10
‑
12分钟;取上清液在37
‑
40℃用氮气吹干,残留物溶解在150μL的50%甲醇中,在12000
‑
15000rpm下离心10
‑
12分钟,获得上清液,获得上清液注入UPLC
‑
MS/MS系统进行分析;S6、建立PK
‑
PD模型1)通过检测步骤S4
‑
2中的多次给药模型组血浆样品中PTB、3
...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄勇,迟明艳,周祖英,郑林,王朴,巩仔鹏,李月婷,金阳,
申请(专利权)人:贵州医科大学,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。