心肌肌钙蛋白I检测试纸条、试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种心肌肌钙蛋白I检测试纸条、试剂盒及其制备方法，该心肌肌钙蛋白I检测试纸条的制备方法中，通过改进处理液实现改进两层样品垫的组成，再组装形成的检测试纸条整体上可以快速、方便、灵敏地检测人血清、血浆、全血中出现的心肌肌钙蛋白I，可以满足临床检测需求。测需求。测需求。

【技术实现步骤摘要】
心肌肌钙蛋白I检测试纸条、试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及检测
，具体涉及一种心肌肌钙蛋白I检测试纸条、试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]心血管疾病发病率高、致残率高、死亡率高、并发症多，对健康危害极为严重。心血管检验是整个心血管领域中的“瓶颈”学科，只有在尽可能短的时间内正确诊断疾病，才有可能及时有效的将先进治疗手段用于临床，使患者受益。随着对心血管诊断标志物研究的日益深入，更加明确了相关标志物对于临床意义，心脏标志物的检测可直接影响心血管疾病患者的临床诊断、危险分层、治疗方案选择和预后判断。因此缩短心脏标志物检测的周转时间(turn
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aroundtime，TAT)对于临床早期诊断和早期治疗心血管疾病具有重要的意义。
[0003]心肌肌钙蛋白(cardiac troponin，cTn)是心肌肌肉收缩的调节蛋白，由三种不同基因的亚基组成：心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTn I)和肌钙蛋白C(TnC)。目前，用于ACS实验室诊断的是cTnT和cTnI。心肌肌钙蛋白(cardiac troponin，cTn)是心肌组织损伤时可在血液中检测到的特异性高和敏感性好的标志物，是诊断急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)以及对心脏疾病进行危险分层的良好标志物。心肌以外的肌肉组织出现损伤或疾病时，cTnT和cTnI在正常血清中含量极微，不会超过其临界值，在AMI时明显增高。由于cTnT和cTnI分子量小，发病后游离的cTnI从心肌细胞浆内迅速释放入血，血中浓度迅速升高，其时间和CK
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MB相当或稍早。cTnI具有高灵敏和较好组织特异性，是目前心血管疾病临床敏感性和特异性最好的心肌损伤标志物，已成为心肌组织损伤(如心肌梗死)最重要的诊断依据，已被临床广泛接受，cTnI不仅成为诊断急性心肌梗死的“金标准”，而且已成为心肌疾病病情监测、疗效观察及预后评估的最合适标志物。
[0004]目前，针对cTnI的检测方法主要有酶联免疫法(ELISA)、化学发光法、胶体金免疫层析法、荧光免疫分析法等。其中，ELISA法操作时间长、自动化程度低；化学发光法方法特异性强，敏感性高，准确度高，但需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员，一般多在特定医疗机构使用，而且化学发光法检测容易出现异常跳值，出现假阳结果。胶体金免疫层析方法虽然具有样本用量少，简便快速，成本低的优势，但是灵敏度较低，只能检测到较高浓度的cTnI，对超敏肌钙蛋白I出现漏检，限制了其在临床上早期诊断的应用，尤其不适用于需通过准确定量来帮助对疾病进行诊断的体液标志蛋白的定量检测。
[0005]因此，临床需要敏感性高、特异性强、重复性好、高准确度、操作简便快捷、低成本的超敏心肌肌钙蛋白I的检测方法，是临床诊断产品研究领域亟需解决的重要问题。

技术实现思路

[0006]基于此，有必要提供一种心肌肌钙蛋白I检测试纸条、试剂盒及其制备方法，能够显著提升针对心肌肌钙蛋白I检测的灵敏度。
[0007]本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术提供一种心肌肌钙蛋白I检测试纸条，其主要由样品垫I、样品垫II、包被有荧光标记心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I的结合垫、包被有羊抗鼠IgG的包被膜、衬板和吸水垫组装而成；其中，所述样品垫I的制备方法为：将玻璃纤维膜浸泡于A处理液中，所述A处理液为含0.05～5％PEG2000、0.1～5％PVP、0.1～5％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～10％Triton X
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100、0.1～10％Tween
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20、0.05～5％PC300、0.05
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0.3mg/ml Mak33
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IgG poly的8.0～9.0的磷酸盐缓冲液，于15℃～25℃浸泡10～60min，烘干，即得；所述样品垫II的制备方法为：将玻璃纤维膜浸泡于B处理液中，所述B处理液为含0.05～5％PEG2000、0.1～5％PVP、0.1～5％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～10％Triton X
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100、0.1～10％Tween
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20、0.05～5％PC300、0.1～1％RBC、0.05～0.5％EDTANa2、0.1～1％S6、0.05～5％Tween 65的8.0～9.0的磷酸盐缓冲液，于15℃～25℃浸泡10～60min，烘干，即得。
[0009]在其中一些实施例中，优选地，所述A处理液的组成为：0.05～2％PEG2000、0.1～1％PVP、0.1～1％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～1％Triton X
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100、0.1～1％Tween
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20、0.05～1％PC300、0.05～0.3mg/ml Mak33
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IgG poly的pH8.0
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9.0的磷酸盐缓冲液。
[0010]所述B处理液的组成为：0.05～2％PEG20000、0.1～1％PVP、0.1～1％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～1％Triton X
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100、0.1～1％Tween
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20、0.05～1％PC300、0.1～1％RBC、0.05～0.5％EDTANa2、0.1％表面活性剂S6、0.5％Tween 65的pH8.0～9.0的磷酸盐缓冲液。
[0011]在其中一些实施例中，优选地，所述A处理液的组成为：1％PEG2000，0.5％PVP，0.5％酪蛋白，0.2％脱脂奶粉，0.5％Triton X
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100，0.8％吐温
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20，0.05％PC300，0.1mg/ml Mak33
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IgG poly的pH8.0的0.01M磷酸盐缓冲液。
[0012]所述B处理液的组成为：1％PEG2000，0.5％PVP，0.5％酪蛋白，0.2％脱脂奶粉，0.5％Triton X
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100，0.8％吐温
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20，0.05％PC300，0.5％RBC，0.5％EDTANa2，0.1％表面活性剂S6，0.5％Tween 65的pH8.0的0.01M磷酸盐缓冲液。
[0013]在其中一些实施例中，所述包被有荧光标记心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I的结合垫的制备方法包括如下步骤：向荧光标记物中同时加入EDC和Sulfo
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NHS，置于15～30℃条件下活化反应30min，然后用0.01M PB(pH8.0)重悬，加入心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I，在15～30℃条件下偶联反应2h；再依次分别加入BSA和乙醇胺依次封闭，复溶，得荧光标记抗体；再采用荧光标记物标记心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I；将玻璃纤维膜浸泡于含Triton X
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100、BSA、海藻糖、Tween20且pH7.5的处理液中浸泡处理，烘干，转置于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种心肌肌钙蛋白I检测试纸条，其特征在于，其主要由样品垫I、样品垫II、包被有荧光标记心肌肌钙蛋白I单克隆抗体I的结合垫、包被有羊抗鼠IgG的包被膜、衬板和吸水垫组装而成；其中，所述样品垫I的制备方法为：将玻璃纤维膜浸泡于A处理液中，所述A处理液为含0.05～5％PEG2000、0.1～5％PVP、0.1～5％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～10％Triton X
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100、0.1～10％Tween
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20、0.05～5％PC300、0.05
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0.5mg/mLMak33
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IgGpoly的8.0～9.0的磷酸盐缓冲液，于15℃～25℃浸泡10～60min，烘干，即得；所述样品垫II的制备方法为：将玻璃纤维膜浸泡于B处理液中，所述B处理液为含0.05～5％PEG20000、0.1～5％PVP、0.1～5％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～10％Triton X
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100、0.1～10％Tween
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20、0.05～5％PC300、0.1～1％RBC、0.05～0.5％EDTANa2、0.1～1％表面活性剂S6、0.05～5％Tween 65的8.0～9.0的磷酸盐缓冲液，于15℃～25℃浸泡10～60min，烘干，即得。2.根据权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I检测试纸条，其特征在于，所述A处理液的组成为：0.05～2％PEG2000、0.1～1％PVP、0.1～1％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～1％Triton X
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100、0.1～1％Tween
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20、0.05～1％PC300、0.05～0.3mg/ml Mak33
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IgG poly的pH8.0
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9.0的磷酸盐缓冲液；所述B处理液的组成为：0.05～2％PEG20000、0.1～1％PVP、0.1～1％酪蛋白、0.1～1％脱脂奶粉、0.1～1％Triton X
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100、0.1～1％Tween
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20、0.05～1％PC300、0.1～1％RBC、0.05～0.5％EDTANa2、0.1％表面活性剂S6、0.5％Tween 65的pH8.0～9.0的磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求2所述的心肌肌钙蛋白I检测试纸条，其特征在于，所述A处理液的组成为：1％PEG2000，0.5％PVP，0.5％酪蛋白，0.2％脱脂奶粉，0.5％Triton X
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100，0.8％吐温
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20，0.05％PC300，0.1mg/ml Mak33
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IgG poly的pH8.0的0.01M磷酸盐缓冲液；所述B处理液的组成为：1％PEG2000，0.5％PVP，0.5％酪蛋白，0.2％脱脂奶粉，0.5％Triton X
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100，0.8％吐温
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20，0.05％PC300，0.5％RBC，0.5％EDTANa2，0.1％表面活性剂S6，0.5％Tween 65的pH8.0的0.01M磷酸盐缓冲液。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，夏红星，冯亮，邹婷婷，
申请(专利权)人：武汉优恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：