【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，具体涉及一种区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂及应用。
技术介绍
1、在恶性肿瘤中，血管和淋巴管转移是肿瘤转移的重要途径，并且肿瘤的转移和患者的预后密切相关。淋巴管在维持体内微环境平衡、肿瘤淋巴转移等方面起着重要作用，淋巴管新生与胚胎发育和肿瘤转移密切相关。近年来发现淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生。血管和淋巴管是肿瘤发生、发展和转移过程中重要的两个影响因子。血管在肿瘤的生长过程中起到了重要作用。血管和淋巴管在目前常规he染色切片中很难区分。在出现淋巴管特异性标志物之前，关于肿瘤组织淋巴管的浸润和新生淋巴管的分布研究较困难。新发现的淋巴管标志物d2-40可以特异性的标记新生淋巴管。联合使用cd34和d2-40单克隆抗体可以区别血管和淋巴管，有助于分别研究血管和淋巴管在肿瘤中的作用。因此，临床上常常需要对两者进行区分，以便制定最佳的治疗方案。ck-pan是广谱型细胞角蛋白，可标记几乎所有的上皮，包括角化上皮、腺上皮、鳞状上皮等，由上皮来源的恶性肿瘤称为癌，因此ck-pan是癌细胞理想的标志物。
2、目前,鉴别血管和淋巴管,采用的一般是he染色来检测。he染色结果还需要仔细观察来加以区分，由于淋巴管和血管静脉组织形态较为相似，区分难度大，且存在错误判读的风险。因此现采用免疫组织学方法检测来进行精准的确定，通过不同指标的表达情况来加以区分血管和淋巴管。临床上通常采用广谱细胞角蛋白(ck-pan)、血小板内皮细胞黏附分子(cd31)、造血祖细胞抗原(cd34)、唾液酸糖蛋白2ma(d2-40)、肾小
3、由于各指标之间可能存在一定的相互影响,在现有技术中一张组织切片只标记一个抗原靶标。病理诊断的最终结果会根据多张免疫组化的染色结果进行综合分析得出。该方法的弊端是：①诊断不够精准；②需要做较多的免疫组化切片，切片数量多；③病理医师阅片工作量大；④效率低。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂及应用。该试剂可以精准、高效的区分癌组织中新生的血管与淋巴管，实现在一张组织切片上同时呈现多个抗原靶标的表达情况，而且保持了混合抗体中各个抗体与单染时同样的敏感度和特异性。
2、具体来说，本专利技术的区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂，其特征在于，包括混合一抗和混合二抗，所述混合一抗包含兔抗人cd34单克隆抗体、鼠抗人ck-pan单克隆抗体、鼠抗人d2-40单克隆抗体；所述二抗包含有用不同荧光素标记的羊抗兔igg和羊抗小鼠igg；
3、所述兔抗人cd34单克隆抗体的氨基酸序列如seq id no.1所示；
4、所述鼠抗人ck-pan单克隆抗体的氨基酸序列如seq id no.2所示；
5、所述鼠抗人d2-40单克隆抗体的氨基酸序列如seq id no.3所示。
6、优选地，所述羊抗兔igg为cy3标记，所述羊抗小鼠igg为fitc标记。
7、本专利技术还提供了一种包含上述区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂的试剂盒。
8、上述方案的试剂盒中，所述兔抗人cd34单克隆抗体的效价为1:100—1:200，所述鼠抗人ck-pan单克隆抗体的效价为1:100—1:200，所述鼠抗人d2-40单克隆抗体的效价为1:100—1:200。
9、本专利技术的有益效果为：
10、通过将兔抗人cd34单克隆抗体、鼠抗人ck-pan单克隆抗体和鼠抗人d2-40单克隆抗体进行混合，作为一抗工作液。将羊抗兔igg标记的cy3荧光二抗和羊抗小鼠igg标记的fitc荧光二抗进行混合，作为荧光二抗工作液。用本试剂盒进行样本检测，每种一抗试剂不存在相互干扰的情况，实现了在一张组织切片样本中呈现多种抗原靶标的情况，能更好的区分多种靶标蛋白的定位及分布情况。可以显著提高癌组织中新生血管与淋巴管的准确度。
11、同时，本试剂盒保持了混合抗体中每种抗体与单染时同样的特异性和灵敏度，还具有检测结果准确度高、对比性强、实验结果直观，稳定性好，实验步骤少，耗时短等特点，在一张组织切片上所呈现的蛋白染色信息远多于传统单染所呈现的染色信息。且本专利技术所提供的试剂盒做出的组织切片，能确保观察到同一视野、同一位置上三种蛋白的表达情况，可大大减轻病理医师的阅片工作量。
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1.一种区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂，其特征在于，包括混合一抗和混合二抗，所述混合一抗包含兔抗人CD34单克隆抗体、鼠抗人CK-Pan单克隆抗体、鼠抗人D2-40单克隆抗体；所述二抗包含有用不同荧光素标记的羊抗兔IgG和羊抗小鼠IgG；
2.根据权利要求1所述区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂，其特征在于，所述羊抗兔IgG为Cy3标记，所述羊抗小鼠IgG为FITC标记。
3.一种包含权利要求1所述区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂的试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述兔抗人CD34单克隆抗体的效价为1:100—1:200，所述鼠抗人CK-Pan单克隆抗体的效价为1:100—1:200，所述鼠抗人D2-40单克隆抗体的效价为1:100—1:200。
【技术特征摘要】
1.一种区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂，其特征在于，包括混合一抗和混合二抗，所述混合一抗包含兔抗人cd34单克隆抗体、鼠抗人ck-pan单克隆抗体、鼠抗人d2-40单克隆抗体；所述二抗包含有用不同荧光素标记的羊抗兔igg和羊抗小鼠igg；
2.根据权利要求1所述区分癌组织中新生血管与淋巴管的免疫荧光试剂，其特征在于，所述羊抗兔igg为cy3标记，...
【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，胡勤芹，夏红星，冯亮，吴杰，
申请(专利权)人：武汉优恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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