一种糖化血红蛋白解离试剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种糖化血红蛋白解离试剂及其应用，属于生物检测技术领域。该解离试剂包括10～50mM Tris缓冲液、0.2～0.5M氯化铵、0.5％～1.0％(v/v)曲拉通X

【技术实现步骤摘要】
一种糖化血红蛋白解离试剂及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，尤其涉及糖化血红蛋白的处理，具体涉及一种糖化血红蛋白解离试剂及其应用。

技术介绍

[0002]糖化血红蛋白(Glycated hemoglobin,GHb)是指血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，可分为葡萄糖糖化血红蛋白、果糖糖化血红蛋白及乳糖糖化血红蛋白等。人体内游离的葡萄糖含量远高于其他糖类物质，而血红蛋白β链N末端缬氨酸残基的糖化概率最高，因此人体内大部分糖化血红蛋白为β链N末端缬氨酸残基与葡萄糖的结合物(hemoglobin A1c,HbA1c)，占糖化血红蛋白的60％。糖化血红蛋白的生成是不可逆反应，与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以检测到120天之前的血糖浓度，不受抽血时间、是否空腹、是否使用胰岛素以及其他能使血糖水平短暂波动的因素的影响。2010年美国糖尿病学会指南已将HbA1c≥6.5％作为糖尿病诊断标准之一，2011年世界卫生组织也建议在条件具备的国家和地区采用这一标准诊断糖尿病。糖化血红蛋白检测特异性强、重复性好、灵敏度高，已被国际公认为糖尿病监控的“金标准”。
[0003]目前，临床和实验室使用的HbA1c检测方法有很多种，大体可以基于原理分为两种类型：(1)基于HbA1c和非糖化血红蛋白的电荷不同，主要方法有离子交换法和电泳法；(2)基于HbA1c和非糖化血红蛋白的结构不同，这种结构不同主要来自于糖基化位点，主要方法有免疫法和亲和层析法。而免疫层析技术是建立在层析膜上以抗原
‑/>抗体特异性反应为基础的免疫检测技术，其以快捷简便、价格低廉、灵敏度高等优势而广泛运用于病原体检测、食品安全测量、环境监测等方面。利用免疫层析法检测糖化血红蛋白时，由于红细胞本身颜色的原因，全血不能用层析试剂检测，因此，在使用免疫层析技术检测糖化血红蛋白前需要先将红细胞溶血破碎，而血红蛋白、糖化血红蛋白本身就是待测物，不能通过过滤的方式消除血红蛋白和糖化血红蛋白自身颜色对检测造成的干扰。
[0004]中国专利申请CN114778242A中公开了一种糖化血红蛋白前处理方法和前处理剂，该前处理剂包括溶血剂和脱色剂，使用时先用溶血剂对全血样本进行溶血处理，再使用脱色剂进行脱色。该操作的溶血时间需要10min，脱色处理的时间为5～30min；整个操作过程需要溶血、脱色两个步骤，操作繁琐、耗时太长。CN114878839A中公开了一种糖化血红蛋白解离液，包括磷酸盐缓冲液、乙基苯基聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和酪蛋白钠。该解离液与CN114778242A中前处理剂以及巴迪泰生物科技股份有限公司销售的试剂盒中的解离液相比，解离时间明显缩短，但是仍然需要5min。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种糖化血红蛋白解离试剂，使用该解离试剂能够快速高效地解离出糖化血红蛋白，得到的溶液澄清透明，且操作简单、使用安全，可以直接用于免疫层析反应，能够降低非特异性吸附，提高灵敏度且重复性较好。
[0006]具体地，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种糖化血红蛋白解离试剂，包括10～50mmol/L Tris缓冲液、0.2～0.5mol/L氯化铵、0.5％～1.0％(v/v)曲拉通X
‑
100、0.2wt％～1.0wt％牛血清白蛋白和0.02～0.2mol/L氯化钠。
[0008]Tris缓冲溶液控制解离试剂pH在7.2
±
0.5，使解离后得到的糖化血红蛋白可以直接与糖化血红蛋白抗体进行免疫结合反应。氯化铵在溶液中水解成铵离子使细胞内渗透压升高，从而使红细胞吸水膨胀。曲拉通X
‑
100有利于增加细胞膜对小分子的渗透性，从而使红细胞膨胀破碎、释放糖化血红蛋白，有利于提高层析速度，减少非特异性吸附。牛血清白蛋白作为稳定剂，可以起到保护血红蛋白的作用，另外可以减少非特异性吸附，使解离后的糖化血红蛋白与糖化血红蛋白抗体之间的免疫反应更具有特异性、检测成本更低。氯化钠可以调节溶液中的酸碱平衡，维持一定的离子强度和渗透压，有利于糖化血红蛋白与糖化血红蛋白抗体之间的免疫反应，而且也可以减少非特异性吸附，提高重复性；牛血清白蛋白和氯化钠的引入使荧光免疫分析法灵敏度更高、重复性更好。
[0009]优选地，所述Tris缓冲液的浓度为10～40mmol/L。
[0010]进一步优选地，所述Tris缓冲液的浓度为20～40mmol/L。
[0011]优选地，所述氯化铵的浓度为0.3～0.5mol/L。
[0012]进一步优选地，所述氯化铵的浓度为0.4～0.5mol/L。
[0013]优选地，所述曲拉通X
‑
100的浓度为0.5％～0.6％(v/v)。
[0014]优选地，所述牛血清白蛋白的浓度为0.5wt％～1.0wt％。
[0015]进一步优选地，所述牛血清白蛋白的浓度为0.5wt％～0.7wt％。
[0016]优选地，所述氯化钠的浓度为0.03～0.1mol/L。
[0017]进一步优选地，所述氯化钠的浓度为0.05～0.1mol/L。
[0018]本专利技术还提供了所述糖化血红蛋白解离试剂用于解离糖化血红蛋白的方法，包括以下步骤：取全血样本，加入所述全血样本(50～150)倍体积的所述糖化血红蛋白解离试剂，混匀20～60s，得到澄清透明的溶液。
[0019]本专利技术的糖化血红蛋白解离试剂还可用于制备试剂盒，所述试剂盒可用于分离或/和检测糖化血红蛋白。
[0020]本专利技术的有益效果是：
[0021]本专利技术提供的糖化血红蛋白解离试剂可高效、彻底地解离全血样本中的糖化血红蛋白，解离后的溶液澄清透明，避免了血红蛋白自身颜色对免疫层析检测的干扰，得到的糖化血红蛋白能直接与糖化血红蛋白抗体进行免疫结合反应；并且解离时间最长为60s，与现有技术中最短的时间5min相比，缩短了80％的反应时间。解离后得到的溶液可直接用于荧光免疫分析法，能够提高荧光免疫分析方法的灵敏度，且重复性较好。
附图说明
[0022]图1为采用实施例1中制备的糖化血红蛋白解离试剂解离全血样本后测定的糖化血红蛋白结果与上海惠中生物的MQ6000糖化血红蛋白分析仪测定结果的线性相关图；
[0023]图2为采用实施例2中制备的糖化血红蛋白解离试剂解离全血样本后测定的糖化血红蛋白结果与上海惠中生物的MQ6000糖化血红蛋白分析仪测定结果的线性相关图；
[0024]图3为采用实施例3中制备的糖化血红蛋白解离试剂解离全血样本后测定的糖化血红蛋白结果与上海惠中生物的MQ6000糖化血红蛋白分析仪测定结果的线性相关图；
[0025]图4为采用实施例4中制备的糖化血红蛋白解离试剂解离全血样本后测定的糖化血红蛋白结果与上海惠中生物的MQ6000糖化血红蛋白分析仪测定结果的线性相关图；
[0026]图5为采用实施例5中制备的糖化血红蛋白解离试剂解离全血样本后测定的糖化血红蛋白结果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白解离试剂，其特征在于，包括10～50mmol/L Tris缓冲液、0.2～0.5mol/L氯化铵、0.5％～1.0％(v/v)曲拉通X
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100、0.2wt％～1.0wt％牛血清白蛋白和0.02～0.2mol/L氯化钠。2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白解离试剂，其特征在于，所述Tris缓冲液的浓度为10～40mmol/L。3.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白解离试剂，其特征在于，所述氯化铵的浓度为0.3～0.5mol/L。4.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白解离试剂，其特征在于，所述曲拉通X
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，夏红星，冯亮，王彤颖，邹婷婷，
申请(专利权)人：武汉优恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：