一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，属于中药技术领域。所述中药制剂包括绿原酸、檞皮苷、香豆素、芒果酸、哈巴依苷、表告依春、黄芩苷、厚朴酚、桔梗皂苷、金丝桃素、白藜芦醇、大黄、木犀草素、苦鬼中的至少一种。本发明专利技术的中药制剂可以明显抑制大口黑鲈蛙病毒复制，显著降低大口黑鲈蛙病毒的发病率，促进鱼体自愈。体自愈。体自愈。

【技术实现步骤摘要】
一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂


[0001]本专利技术涉及中药
，具体涉及一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂。

技术介绍

[0002]蛙病毒属(Ranavirus)被称为“冷血动物杀手”，宿主范围广泛，可感染鱼类、两栖类、爬行类等近百种水生生物。大口黑鲈(Micropterus salmoides)是我国一种优质的淡水养殖鱼类，由大口黑鲈蛙病毒(Largemouth bass Ranavirus,LMBV)引起的大口黑鲈溃疡性疾病，流行范围广、发病率与致死率较高，严重威胁了我国大口黑鲈养殖业的发展。因此，寻找安全、高效和低毒的抗大口黑鲈蛙病毒药物成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，该中药制剂可以在体内抑制大口黑鲈蛙病毒增殖，降低大口黑鲈蛙病毒的发病率，促进鱼体自愈。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，所述中药制剂包括绿原酸、檞皮苷、香豆素、芒果酸、哈巴依苷、表告依春、黄芩苷、厚朴酚、桔梗皂苷、金丝桃素、白藜芦醇、大黄、木犀草素、苦鬼中的至少一种。
[0005]优选地，所述中药制剂为槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素。
[0006]专利技术人选取大口黑鲈蛙病毒作为模式病毒，以鲤鱼上皮细胞系为依托，发现绿原酸、檞皮苷、香豆素、芒果酸、哈巴依苷、表告依春、黄芩苷、厚朴酚、桔梗皂苷、金丝桃素、白藜芦醇、大黄、木犀草素、苦鬼中的至少一种组成的中药制剂，在体内和体外可以抑制LMBV增殖，降低了LMBV的发病率，促进鱼体自愈。其中，槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素组合的中药制剂能显著抑制LMBV增殖。
[0007]优选地，所述槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比为槲皮苷：香豆素：哈巴依苷：厚朴酚：金丝桃素＝8
‑
32:8
‑
32:4
‑
8:2
‑
4:1。
[0008]槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比会影响中药制剂的效果，专利技术人经过研究发现，当槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比为槲皮苷：香豆素：哈巴依苷：厚朴酚：金丝桃素＝8
‑
32:8
‑
32:4
‑
8:2
‑
4:1时，能够更好的抑制LMBV增殖，降低LMBV的发病率。
[0009]优选地，所述槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比为槲皮苷：香豆素：哈巴依苷：厚朴酚：金丝桃素＝16
‑
32:16
‑
32:8:2
‑
4:1。在上述比例下，中药制剂的效果更好。
[0010]优选地，所述槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比为槲皮苷：香豆素：哈巴依苷：厚朴酚：金丝桃素＝16:16:8:2:1。在上述比例下，中药制剂的效果最佳，LMBV的发病率降低了40％。
[0011]优选地，所述中药制剂的应用方式为：将中药制剂添加到饲料中。
[0012]优选地，所述复方中药制剂的添加量为10g制剂每kg饲料。
[0013]优选地，所述中药制剂的体外细胞抗病毒安全浓度为：绿原酸100μg/mL、檞皮苷50μg/mL、香豆素50μg/mL、芒果酸50μg/mL、黄芩苷25μg/mL、哈巴俄苷25μg/mL、表告依春25μg/mL、厚朴酚6.25μg/mL、桔梗皂苷1.5625μg/mL、金丝桃素3.125μg/mL、白藜芦醇0.78125μg/mL、大黄0.78125μg/mL、木犀草素0.78125μg/mL、苦鬼0.78125μg/mL。
[0014]优选地，所述细胞为鲤鱼上皮细胞系。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0016]1、专利技术人选取大口黑鲈蛙病毒作为模式病毒，以鲤鱼上皮细胞系为依托，发现绿原酸、檞皮苷、香豆素、芒果酸、哈巴依苷、表告依春、黄芩苷、厚朴酚、桔梗皂苷、金丝桃素、白藜芦醇、大黄、木犀草素、苦鬼中的至少一种组成的中药制剂，在体外可以抑制LMBV增殖。
[0017]2、专利技术人发现槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素组合的中药制剂能显著抑制LMBV增殖，LMBV的发病率降低了40％，促进鱼体自愈。
[0018]3、本专利技术的中草药制剂为大口黑鲈蛙病毒防控提供了新的方法，为渔药的开发提供了新的思路。
附图说明
[0019]图1为中药提取物对EPC细胞最大安全浓度的测定结果图；其中1为甘草酸，2为绿原酸，3为檞皮苷，4为连翘苷，5为香豆素，6为栀子苷，7为芒果酸，8为哈巴依苷，9为表告依春；
[0020]图2为中药提取物对EPC细胞最大安全浓度的测定结果图；其中10为黄芩苷，11为虎杖苷，12为柠檬苦素，13为牛蒡子甙，14为厚朴酚，15为桔梗皂苷，16为金丝桃素，17为白藜芦醇，18为大黄；
[0021]图3为中药提取物对EPC细胞最大安全浓度的测定结果图；其中19为木犀草素，20为苦鬼；
[0022]图4为20种中药提取物体外对LMBV复制的影响检测结果图；其中*表示抑制LMBV复制药效相对较好的药物；1为甘草酸，2为绿原酸，3为檞皮苷，4为连翘苷，5为香豆素，6为栀子苷，7为芒果酸，8为哈巴依苷，9为表告依春，10为黄芩苷，11为虎杖苷，12为柠檬苦素，13为牛蒡子甙，14为厚朴酚，15为桔梗皂苷，16为金丝桃素，17为白藜芦醇，18为大黄，19为木犀草素，20为苦鬼；
[0023]图5为5种中药提取物配制的中药制剂体外对LMBV复制的影响检测结果图；
[0024]图6为5种中药提取物配制的中药制剂体内对LMBV的作用检测结果图；其中A为LMBV在肝脾中的增殖情况，B为LMBV的发病率；
[0025]图7为攻毒后不同时间点鱼体的临床症状图。
具体实施方式
[0026]下面将结合附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]实施例1
[0028]1、材料和方法
[0029]1.1细胞和病毒
[0030]鲤鱼上皮细胞系(EPC)采购自中国典型培养物保藏中心；大口黑鲈蛙病毒(LMBV)由本实验分离及保存，LMBV的分离：取病鱼组织样品100mg加入1mL PBS进行研磨，向匀浆液中加入浓度为1
[0031]μg/mL的双抗(青霉素和链霉素)，在4℃冰箱孵育2
‑
4h后，4℃离心机8000rpm离心20min，用0.22μm滤器过滤收取上清液。取出铺满单层的细胞，倒掉培养基，用PBS润洗两遍，加入100倍稀释的组织过滤液，28本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂包括绿原酸、檞皮苷、香豆素、芒果酸、哈巴依苷、表告依春、黄芩苷、厚朴酚、桔梗皂苷、金丝桃素、白藜芦醇、大黄、木犀草素、苦鬼中的至少一种。2.如权利要求1所述抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂为槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的混合物。3.如权利要求2所述抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，其特征在于，所述槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比为槲皮苷：香豆素：哈巴依苷：厚朴酚：金丝桃素＝8
‑
32:8
‑
32:4
‑
8:2
‑
4:1。4.如权利要求3所述抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，其特征在于，所述槲皮苷、香豆素、哈巴依苷、厚朴酚和金丝桃素的质量比为槲皮苷：香豆素：哈巴依苷：厚朴酚：金丝桃素＝16
‑
32:16
‑
32:8:2
‑
4:1。5.如权利要求4所述抗大口黑鲈蛙病毒的中药制剂，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛银杰，李宁求，付小哲，林强，罗霞，刘礼辉，梁红茹，左绍志，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：