高硫酸化度的硫酸软骨素CS-E及其提取方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种高硫酸化度的硫酸软骨素CS

【技术实现步骤摘要】
高硫酸化度的硫酸软骨素CS
‑
E及其提取方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种高硫酸化度的硫酸软骨素CS
‑
E及其提取方法。

技术介绍

[0002]硫酸软骨素(CS)根据其硫酸化度和硫酸化位点的不同，可以将其二糖分为O
‑
unit，A
‑
unit，C
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unit，U
‑
unit，B
‑
unit，D
‑
unit，E
‑
unit(序列：[GlcAβ1
‑
3GalNAc(4S,6S)])和T
‑
unit。常见的CS亚型包括CS
‑
A、CS
‑
C、CS
‑
D和CS
‑
E。
[0003]其中，现有文献已经证实富含E
‑
unit的CS在肿瘤发生过程中(Hamada K et al..Anti
‑
tumor effect of chondroitin sulfate
‑
coated ternary granulocyte macrophage
‑
colony
‑
stimulating factor plasmid complex for ovarian cancer.The Journal of Gene Medicine 2012；14:120r/>‑
127)和肿瘤转移过程中(Mizumoto S et al..Receptor for advanced glycation end products(RAGE)functions as receptor for specific sulfated glycosaminoglycans,and anti
‑
RAGE antibody or sulfated glycosaminoglycans deliverd in vivo inhibit pulmonary metastasis of tumor cells.JBIOL CHEM 2012；287:18985
‑
18994)具有重要作用，且被证实CS
‑
E具有优秀的抑制肿瘤细胞转移的能力(Wegrowski Y，Maquart FX.Chondroitin sulfate proteoglycans in tumor progression.Adv Pharmacol 2006；53:297
‑
321)，其与CS
‑
E与肿瘤细胞表面用于介导肿瘤转移的信号转导的选择素
‑
P的特异性结合有关。
[0004]现有技术对于CS
‑
E的提取通常采用鱿鱼软骨等富CS
‑
E原料经碱提取、酶提取、碱
‑
酶复合提取或中性盐提取，获得较高含量的CS
‑
E，如专利CN105924544B所公开的高硫酸化硫酸软骨素及其制备方法和应用，虽然其所提取的硫酸软骨素平均分子量可达到623.2kDa，硫酸化度为1.43，E
‑
unit含量为46.6wt％，但是其难以适用于工业生产，且其酶解过程中长时间保持碱性条件，导致大量的CS
‑
E上的硫酸基丢失，降低产品的硫酸化度。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种可有获得低平均分子量、高硫酸化度的硫酸软骨素CS
‑
E及其制备方法。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：高硫酸化度的硫酸软骨素CS
‑
E的提取方法，包括如下步骤：
[0007]S1、配制分散有鱿鱼软骨粉末的水溶液；
[0008]S2、向所述水溶液中通入三氧化硫气体至所述水溶液pH至4.0～5.0，搅拌2～4h后，调节pH至6.0～6.5，获得处理液a；
[0009]S3、向所述处理液a中分批加入酶缓冲液和复合酶，反应24～96h，获得处理液b；
[0010]S4、调节所述处理液b的pH至10～12并向所述处理液b中加入氯化钠，反应10～12h后，获得处理液c；
[0011]S5、将所述处理液c依次进行纯化、喷雾干燥，获得硫酸软骨素干粉。
[0012]进一步提供由前述提取方法所制备得到的高硫酸化度的硫酸软骨素CS
‑
E。
[0013]本专利技术的有益效果在于：通过本专利技术所提供的提取方法所提取得到的硫酸软骨素硫化程度高，平均分子量在50～100kDa，且含有52.2～58.3mol％的E
‑
unit。
具体实施方式
[0014]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
[0015]高硫酸化度的硫酸软骨素CS
‑
E的提取方法，包括如下步骤：
[0016]S1、配制分散有鱿鱼(Dosidicus Gigas)软骨粉末的水溶液；
[0017]S2、向所述水溶液中通入三氧化硫气体至所述水溶液pH至4.0～5.0，搅拌2～4h后，调节pH至6.0～6.5，获得处理液a；
[0018]S3、向所述处理液a中分批加入酶缓冲液和复合酶，反应24～96h，获得处理液b；
[0019]S4、调节所述处理液b的pH至10～12并向所述处理液b中加入氯化钠，反应10～12h后，获得处理液c；
[0020]S5、将所述处理液c依次进行纯化、喷雾干燥，获得硫酸软骨素干粉。
[0021]其中，所述鱿鱼软骨粉末经鱿鱼软骨脱水脱脂并干燥获得。所述脱水脱脂为现有技术，如在干净的鱿鱼软骨中加入其湿重3～4倍的丙酮进行脱脂脱水，待脱水脱脂完成后取出并进行完全干燥，获得鱿鱼软骨粉末；或石油醚和/或正己烷溶液处理；为了复合食品安全考虑，也可以直接干燥后粉碎。其中，通过通入三氧化硫气体至水溶液pH为4.0～5.0，以使鱿鱼软骨粉末中蛋白质变性形成无序且较为松散的伸展结构，从而使硫酸软骨素的反应位点暴露以利于后续硫酸化的进行。在S2中，通过向所述水溶液中通入三氧化硫气体以促进硫酸软骨素侧链反应位点的硫酸化，即促进CS向CS
‑
E转化。三氧化硫气体的通入是一个酸化的过程，因此可实现硫酸软骨素分子量的下降。同时，过量的三氧化硫能够被水溶液所吸收并形成大量的硫酸根离子而存在于溶液中，因此在后续的工序过程中，如碱处理的过程中可有效避免硫酸软骨素侧链硫酸基的丢失。并且，由于在硫酸化的过程中水溶液处于高温和酸性，因此可有效避免水溶液内物质之间氢键的形成，从而可有效避免在硫酸化的过程中由于溶液粘度过高所导致的搅拌过程中的生产安全风险。
[0022]其中，所述酶缓冲液为氯化钙硼酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.高硫酸化度的硫酸软骨素CS
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E的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、配制分散有鱿鱼软骨粉末的水溶液；S2、向所述水溶液中通入三氧化硫气体至所述水溶液pH至4.0～5.0，搅拌2～4h后，调节pH至6.0～6.5，获得处理液a；S3、向所述处理液a中分批加入酶缓冲液和复合酶，反应24～96h，获得处理液b；S4、调节所述处理液b的pH至10～12并向所述处理液b中加入氯化钠，反应10～12h后，获得处理液c；S5、将所述处理液c依次进行纯化、喷雾干燥，获得硫酸软骨素干粉。2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述鱿鱼软骨粉末经鱿鱼软骨脱水脱脂并干燥获得。3.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述酶缓冲液为氯化钙硼酸缓冲液，其中氯化钙浓度为10mM，硼酸浓度为100mM，pH为8.0，溶液终浓度为0.05mM。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈燕，罗联钰，胡旺，姚立峰，杨智识，
申请(专利权)人：福建省深蓝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：