抗胸腺细胞球蛋白制造技术

提供了人类抗胸腺细胞球蛋白(ATG)产品以及制作和使用人类抗胸腺细胞球蛋白(ATG)的方法。特别地，本公开提供有蹄类动物源性多克隆免疫球蛋白，有蹄类动物源性多克隆免疫球蛋白包括完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体。完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体特异性结合人类胸腺细胞、T细胞、B细胞和/或单核细胞。可以通过用人类胸腺细胞免疫具有人类Ig基因座的转基因动物来制作这样的组合物。该方法生成的多克隆免疫球蛋白具有使之能够在医学应用中使用的产量、纯度和抗原特异性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗胸腺细胞球蛋白
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年02月12日提交的美国申请号62/975,649(其通过引用被整体并入本文)的优先权。
[0003]通过引用序列表并入
[0004]本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以名称为A2BI_001_01WO_SeqList.txt、创建于2021年09月08日并且大小为70KB的文件被提供。序列表的电子格式中的信息通过引用被整体并入本文。


[0005]本专利技术大体上涉及制作用于生物医学应用的抗胸腺细胞球蛋白的方法。
[0006]背景
[0007]ATG(抗胸腺细胞球蛋白)是FDA批准用于在器官移植中使用的多克隆免疫球蛋白。ATG也被用来或在临床试验中被用来治疗移植物抗宿主病和I型糖尿病(T1D)。在T1D中，ATG被用作单一疗法以保持β细胞功能和被用作用于非清髓性造血干细胞移植的免疫抑制剂。
[0008]通过兔或马的免疫生成多克隆异型生物质免疫球蛋白来产生当前的ATG产品。ATG疗法将患者置于患血清病的风险，因为接受者的免疫系统对ATG中的异型生物质免疫球蛋白做出反应。对ATG的免疫应答也使得二次给药成为问题。此外，T1D中的血清病无法用糖皮质激素控制，因为糖皮质激素损害患者的β细胞的功能。
[0009]因此，本领域中仍存在对于产生ATG的改进的方法以及相关联的组合物和使用方法的需要。
[0010]概述
[0011]本公开大体上涉及在具有完全人类的(或者至少部分人类的)免疫球蛋白基因座的转基因动物中产生的抗胸腺细胞球蛋白(ATG)。所获得的组合物包括完全人类的(或者基本上人类的)免疫球蛋白。出人意料地，具有人类胸腺细胞的转基因动物的免疫生成具有与参考ATG产品一样的效力或比参考ATG产品更大的效力的ATG。因此，本文中公开的方法产生充足产量和效力的ATG，以允许制造解决由于异型生物质免疫球蛋白造成的血清病问题的人类ATG产品。
[0012]在一方面，本公开提供有蹄类动物多克隆免疫球蛋白组合物，该有蹄类动物多克隆免疫球蛋白组合物包括完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体。完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体特异性结合人类胸腺细胞、T细胞、B细胞和/或单核细胞。
[0013]在另一方面，本公开提供通过用人类胸腺细胞免疫转基因有蹄类动物产生的组合物。组合物包括完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体。完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体特异性结合人类胸腺细胞、T细胞、B细胞和/或单核细胞。
[0014]在又一方面，本公开提供产生抗胸腺细胞球蛋白(ATG)的方法，方法包括向转基因有蹄类动物施用人类胸腺细胞。转基因有蹄类动物的基因组包括人类免疫球蛋白基因座。转基因有蹄类动物产生包括抗胸腺细胞球蛋白(ATG)的多克隆免疫球蛋白。
[0015]在另外的方面，本公开提供向有需要的受试者提供抗胸腺细胞球蛋白(ATG)的方法，方法包括向受试者施用：i)根据本公开的多克隆免疫球蛋白组合物；ii)根据本公开的组合物；或者iii)根据本公开产生的多克隆免疫球蛋白组合物。方法向受试者提供有效量的抗胸腺细胞球蛋白(ATG)。
[0016]在又一另外的方面，本公开提供药物组合物，药物组合物包括完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体以及一种或更多种药学上可接受的赋形剂。完全人类的或基本上人类的免疫球蛋白的群体特异性结合人类胸腺细胞、T细胞、B细胞和/或单核细胞。
[0017]本专利技术的其他的实施方案、特征和优点将因以下详细说明和通过本专利技术的实践而变得明显。
[0018]附图的简要说明
[0019]图1A
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1H示出isHAC载体和isKcHACΔ载体的构建。
[0020]图1A示出isHAC载体和isKcHACΔ载体构建的流程。牛化载体pCC1BAC
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isHAC是一种基于BAC的载体(骨架为pCC1BAC载体)，由以下组成：10.5kb和2kb的基因组DNA分别作为长臂和短臂、9.7kb的牛基因组DNA覆盖牛Iγ1
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Sγ1及其周边区以替换人类相应的6.8kb的Iγ1
‑
Sγ1区、两侧为FRT序列的鸡β
‑
肌动蛋白启动子驱动的neo基因、和DT
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A基因。在靶标牛化后，通过FLP引入去除neo基因盒(cassette)。
[0021]图1B示出关于靶向载体pCC1BAC
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isHAC的详细信息。通过使用人类Iγ1
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Sγ1区周围的探针筛选，分别从克隆h10和克隆h18/h20(来源于从含有κHAC的CHO细胞构建的λ噬菌体基因组文库)中获得用于短臂和长臂的2kb的Afe I
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Bam HI片段和10.5kb的Apa I
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Hpa I片段。从来源于λ噬菌体牛基因组文库的克隆b42获得9.7kb片段(通过Bsu36 I的5'端)。
[0022]图1C示出牛化Iγ1
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Sγ1区的基因分型。如图所示，实施了五组基因组PCR。iscont1
‑
F1/R1是对同源重组特异性的阳性PCR。iscont1
‑
F1
×
hIgG1
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R10是由于neo基因盒的存在而被禁止的阴性PCR。isHAC
‑
Sw
‑
dig
‑
F5/R3和isHAC
‑
TM
‑
dig
‑
F3/R2用于对其对应区的结构完整性检查，分别由Bam HI+Pvu II和Age I、Sma I或Pvu II酶切。bNeo5'
‑
R
×
bIgG1
‑
5'
‑
seq
‑
R6是为了确认FRT序列的存在。
[0023]图1D示出neo基因盒的FLP
‑
FRT缺失后的基因分型。
[0024]图1E示出用于isHAC载体基因分型的广泛基因组PCR。每个基因组PCR引物对的位置被描述为与isHAC载体结构有关。
[0025]图1F示出对于含有isHAC载体的三种不同的CHO克隆之间的CGH分析。来自isC1
‑
133的DNA用作参考。三种细胞系之间的isHAC没有明显的结构差异。
[0026]图1G示出用于isKcHACΔ载体基因分型的广泛基因组PCR。每个基因组PCR引物对的位置被描述为与isKcHACΔ载体结构有关。
[0027]图1H示出对于含有isKcHACΔ载体的三种不同的CHO克隆之间的CGH分析。来自isKCDC15
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8的DNA用作参考。三种细胞系之间的isKcHACΔ没有明显的结构差异。
[0028]图2示出TcB源性ATG产品与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种有蹄类动物源性多克隆免疫球蛋白组合物，所述组合物包括完全人类的免疫球蛋白的群体或基本上人类的免疫球蛋白的群体，其中所述完全人类的免疫球蛋白的群体或基本上人类的免疫球蛋白的群体特异性结合人类胸腺细胞、T细胞、B细胞和/或单核细胞。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物在CDC测定中的效力至少约与参考产品相同。3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述组合物在CDC测定中的效力比参考产品高至少约10％。4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述组合物在CD8+细胞杀伤测定中的效力比参考产品高至少约10％。5.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述组合物在CD4+细胞凋亡测定中比参考产品更少至少约10％。6.如权利要求2至5中任一项所述的组合物，其中所述参考产品是兔源性ATG，可选地即复宁。7.如权利要求2至5中任一项所述的组合物，其中所述参考产品是马源性ATG，可选地ATGAM。8.如权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述组合物包括按所述组合物中的总免疫球蛋白的质量计至少2％的完全人类的免疫球蛋白或基本上人类的免疫球蛋白。9.如权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述有蹄类动物是牛。10.一种组合物，所述组合物通过用人类胸腺细胞免疫转基因有蹄类动物产生，其中所述组合物包括完全人类的免疫球蛋白的群体或基本上人类的免疫球蛋白的群体，并且其中所述完全人类的免疫球蛋白的群体或基本上人类的免疫球蛋白的群体特异性结合人类胸腺细胞、T细胞、B细胞和/或单核细胞。11.如权利要求10所述的组合物，其中所述组合物在CDC测定中的效力至少约与参考产品相同。12.如权利要求10所述的组合物，其中所述组合物在CDC测定中的效力比参考产品高至少约10％。13.如权利要求10至12中任一项所述的组合物，其中所述组合物在CD8+细胞杀伤测定中的效力比参考产品高至少约10％。14.如权利要求10至12中任一项所述的组合物，其中所述组合物在CD4+细胞凋亡测定中比参考产品更少至少约10％。15.如权利要求11至14中任一项所述的组合物，其中所述参考产品是兔源性ATG，可选地即复宁。16.如权利要求11至14中任一项所述的组合物，其中所述参考产品是马源性ATG，可选地ATGAM。17.如权利要求10至16中任一项所述的组合物，其中所述组合物包括按所述组合物中的总免疫球蛋白的质量计至少2％的完全人类的免疫球蛋白或基本上人类的免疫球蛋白。18.如权利要求10至17中任一项所述的组合物，其中所述有蹄类动物是牛。19.如权利要求10至18中任一项所述的组合物，其中所述转基因有蹄类动物的基因组
包括人类免疫球蛋白基因座。20.如权利要求10至19中任一项所述的组合物，其中所述转基因有蹄类动物被免疫3次、4次、5次或更多次。21.如权利要求10至20中任一项所述的组合物，其中在免疫后，从所述转基因有蹄类动物的血清纯化所述完全人类的免疫球蛋白的群体或基本上人类的免疫球蛋白的群体。22.一种产生抗胸腺细胞球蛋白(ATG)的方法，所述方法包括向转基因有蹄类动物施用人类胸腺细胞，其中所述转基因有蹄类动物包括基因组或人工染色体，所述基因组包括人类免疫球蛋白基因座，所述人工染色体包括人类免疫球蛋白基因座，其中所述转基因有蹄类动物产生人类抗胸腺细胞球蛋白(ATG)。23.如权利要求22所述的方法，所述方法包括施用所述胸腺细胞3次、4次、5次或更多次。24.如权利要求22或权利要求23所述的方法，所述方法包括从所述转基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：SAB有限责任公司，
类型：发明
国别省市：