磁微粒标记的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及磁微粒标记的抗体及其应用。本发明专利技术提供了一种针对血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体，所述抗体与SAA的结合能力强，特异性好，以所述抗体制备磁微粒的SAA免疫层析试纸条具有较好的检测下限以及检测的特异性，可以用于特异性的SAA的检测，具有很好的市场应用前景。具有很好的市场应用前景。

【技术实现步骤摘要】
磁微粒标记的抗体及其应用
[0001]本专利技术涉及生物领域，具体的涉及了一种磁微粒标记的单克隆抗体以及在检测方面的应用。

技术介绍

[0002]血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein，SAA)是一种正向急性时相反应蛋白，是载脂蛋白家族中的一种异质类蛋白质，相对分子量约为12000。SAA是一种急性相蛋白并与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。
[0003]SAA是个灵敏的参数，它在炎性反应大约8h后开始升高，且超过参考范围上限时间早于CRP，然而CRP在正常人中的中位数值与参考范围上限的差距，大约有10倍。在SAA中仅有5倍。轻微感染，例如，许多病毒感染，SAA升高要比CRP更为常见。在感染性疾病中，SAA的绝对上升要高于CRP，因此SAA测定，尤其对“正常”与微小急性相反应可提供更好的鉴别。通常约2/3感冒患者SAA升高，但少于1/2的患者相同表现CRP升高。在病毒感染病例中，SAA和CRP浓度升高见于腺病毒感染者。SAA和CRP的反应形式在急性感染的恢复阶段是平行的，这同时适用于细菌和病毒感染。红斑狼疮和溃疡性结肠炎SAA并不升高。恶性肿瘤转移阶段SAA升高通常比肿瘤局限于器官阶段显示较高的数值。对于移植排异，SAA检测是一个相当灵敏的指标。在对一项肾移植受者的研究中，97％的发生排异的检查是依据SAA的升高。在不可逆转的移植排异检测中，其平均浓度达690
±
29mg/L，而可逆排异发作病例的相关水平为271
±
31mg/L。类风湿性关节炎、结核病或麻风病患者SAA浓度的慢性升高，是合成AA
‑
淀粉纤维的先决条件，这也被用来诊断继发性淀粉样变性病变。SAA对于移植排斥反应、2型糖尿病、慢性呼吸系统疾病等疾病也有一定的辅助诊断作用。
[0004]SAA的常见检测方法包括胶体金法、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、胶乳增强免疫比浊法。其中胶乳增强免疫比浊法最先进，灵敏度更高，线性范围更广，操作也相对简便，在临床中被广泛采用。研究表明，胶乳增强免疫比浊法的分析灵敏度为3.52mg/L；批内变异系数<8％、日间<10％；抗干扰性较强，血红蛋白≤4.0g/L、胆红素≤400μmol/L、类风湿因子≤1621U/L、甘油三酯≤10mmol/L对测定无影响。胶乳增强免疫比浊法利用吸附在直径几十到几百纳米的胶乳微粒上的SAA抗体捕捉测试样品中的SAA，从而形成微粒之间的交联，改变了溶液的散射度或者透射吸光度(即浊度)。
[0005]随着科学技术特别是分子生物学的发展，抗体制备技术获得了革命性的进展，促进了免疫磁性微粒的出现。包被有单克隆抗体的磁性微粒，可与含有相应抗原的靶物质特异性地结合形成新的复合物。通过磁场时，这种复合物可被滞留，与其它组分相分离，该过程称为免疫磁性分离法。它以免疫学为基础，渗透到生理、病理、药理、微生物、生化及分子遗传学等各个领域，是近年来国内外研究比较热的一种新的免疫学技术。免疫磁性分离简便易行，分离纯度高，保留靶物质活性，且高效、快速、低毒，广泛应用于细胞分离和提纯、免疫检测、核酸分析和基因工程、作靶向释药的载体等领域。
[0006]以磁性粒子标记的磁性免疫分析技术(Magnetic Immuno Chromatofraphic Tes,
tMICT)是现代物理学与生物技术结合研发生产的磁性分析检测技术，最早应用于基础医学领域。与其它标记技术不同，该技术一个显著的优点就是用磁性粒子标记不受有色杂质干扰，可用于直接测量血液、食品、污水等有色样品。其原理是利用超顺磁性纳米微粒作为标记物，由高灵敏度磁性检测仪器测定结合在免疫复合物上的磁性微粒所产生的局部磁场效应，从而得出所测分析物的定量结果。。正是基于磁微粒包括磁微球的诸多好处，开发磁微粒标记的SAA单克隆抗体用于SAA的检测变得迫在眉睫，特别是高亲和力的SAA单抗的开发更是重中之重。

技术实现思路

[0007]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供了一种改进的针对SAA的单克隆抗体及其应用。
[0008]一方面，本专利技术提供一种针对SAA的单克隆抗体3C5，其重链可变区序列如SEQ ID NO：1所示：
[0009]EVQLEESATELARPGASVKLSCKASGYIFSWDVCVWIKQRPGQGLEWIGIEQSMLTSRWCHYATWGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCAGSGNYRTVWGLGTTLAVSS，轻链可变区序列如SEQ ID NO：2所示：
[0010][0011]本专利技术另外一方面，提供了本专利技术优选利用腹水制备的方法制备所述单克隆抗体，本专利技术对所述腹水制备的方法并没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可。本专利技术所述单克隆抗体与SAA发生特异性反应，表明单克隆抗体具有良好的特异性；可用作本专利技术SAA检测试纸条的抗体。
[0012]在一些实施例中，抗体或其片段(如本文提供的抗SAA抗体)特异性结合靶(SAA)，结合常数至少为10
‑9M或更大的结合常数。在一些实施例中，抗体(例如，单克隆抗体)或其片段，具有10nM或更小的平衡常数(Kd)，例如9nM或更小，8.1nM或更小，8nM或更小，7nM或更小，6nM或更小，6.5nM或更小，6.3nM或更小，5nM或更小，4.3nM或更小，4nM或更小，3nM或更小，2nM或更小，5nM或更小，5nM或更小，4nM或更小，3nM或更小或1.2nM或更小。例如，抗体或其片段以至少约0.1
×
106的结合亲和力与靶例如GPC1结合
‑8M，至少约0.3
×
10
‑8M，至少约0.5
×
10
‑8M，至少约0.75
×
10
‑8M，至少约0
×
10
‑8M，至少约3
×
10
‑8M至少约5
×
10
‑8M，或至少约2.0
×
10
‑8M，至少约2.5
×
10
‑8，至少约3.0
×
10
‑8，至少约3.5
×
10
‑8，至少约4.0
×
10
‑8，至少约4.5
×
10
‑8，至少约5.0
×
10
‑8M，至少约1
×
10
‑9M，至少约3
×
10
‑9M，至少约5
×
10
‑9M，至少约2
×
10
‑9M，至少约3
×
10
‑9M，至少约4
×
10
‑9M，至少约4.3
×
10
‑9M，至少约5
×
10
‑9M，至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对SAA的单克隆抗体3C5，其特征在于：其重链可变区序列如SEQ ID NO：1所示；轻链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。2.如权利要求1所述的单克隆抗体2A4在制备磁微粒标记的SAA检测试剂盒中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述试剂盒中含有磁微粒标记的试纸条。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述试纸条包括检测线和质控线。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳静，詹先发，
申请(专利权)人：北京科跃中楷生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：