单克隆抗体融合制造技术

本发明专利技术提供了包含任何抗体或其片段、可操作地连接并表达为与目的标记的融合物的抗体融合物。本发明专利技术还提供了与所述抗体融合物相关的质粒、载体、宿主细胞、方法和试剂盒。所述抗体融合物至少在诊断和试剂设置中是有用的。体融合物至少在诊断和试剂设置中是有用的。体融合物至少在诊断和试剂设置中是有用的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单克隆抗体融合
[0001]【相关申请的交叉引用】
[0002]本申请要求于2019年12月19日提交的美国临时申请号62/950,397的权益，该申请通过引用并入本文。


[0003]本公开总体上涉及抗体和抗体诊断领域，特别是抗体与目标试剂的融合。

技术介绍

[0004]当前的抗体生产和测试技术涉及目的抗体的表达，确保抗体具有适当的折叠、糖基化等。抗体表达后，必须对抗体进行纯化和加工，往往会导致一定量的抗体损失。对于诊断和其他用途，抗体通常与目的蛋白质(例如标签或标记)或固体支持物(例如微珠、硝酸纤维素或塑料，例如聚苯乙烯)缀合，从而使抗体经常暴露于苛刻的结合条件。这会对抗体标记产品产生负面影响。本领域需要产生标记的抗体融合物同时避免或避免上述缺点。
[0005]本公开提供了克服这些技术的缺点的抗体融合，从而导致增加的产量、易于制造和降低生产成本。抗体是用目的蛋白质试剂重组表达的，并且带有与抗体融合的标签。因此，检测试剂不需要在表达后进行“偶联”，从而消除了对抗体损失的后纯化处理或将单克隆抗体暴露于苛刻的偶联条件的需要。
[0006]【专利技术概述】
[0007]在一个方面，描述了用于免疫测定的重组单克隆抗体(Mab)，其中的每一个都具有重组表达并融合到目的抗体上的融合蛋白试剂。抗体可以包括任何目的抗体。在一些实施方式中，目的抗体可以包括例如抗降钙素原(PCT)单克隆抗体、TSHR
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特异性M22单克隆抗体、莱姆病单克隆抗体、Flu ANP/BNP和RSV ANP单克隆抗体等。可以表达并融合至目的抗体的蛋白质试剂可以包括，例如，包括酶、荧光蛋白、共价样附着试剂、接头试剂等。融合抗体提供改进的功能以及降低的生产成本。这是通过重组表达带有与抗体融合的标签的蛋白质试剂来实现的，这样就不需要额外的步骤或努力来缀合检测试剂，从而无需进行后纯化处理。这避免了通常的抗体损失，也避免了将单克隆抗体暴露在苛刻的偶联条件下的需要。
[0008]在一个实施方式中，描述了一种具有高亲和力和特异性的单克隆抗体(Mab)融合物，其与一个或多个融合标签缀合(例如，表达)。例如，这些融合物可用作诊断测定中的试剂，例如即时(POC)快速免疫测定和用于体外诊断(IVD)测试的ELISA。在一个实施方式中，基于免疫荧光的侧向流免疫测定包括一种或多种本文所述的抗体融合物。
[0009]本公开进一步涉及核酸。核酸可以存在于全细胞中、细胞裂解物中或以部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术(包括碱/SDS处理、CsCl带、柱层析、琼脂糖)从其他细胞成分或其他污染物(例如其他细胞核酸或蛋白质)中纯化时，核酸是“分离的”或“呈现基本纯的”凝胶电泳和本领域熟知的其他方法。本公开的核酸组合物，虽然通常在来自cDNA、基因组或其混合物的天然序列(除了修饰的限制性位点等)中，但可以根据标准技术进行突变以提供基因序列。对于编码序列，这些突变，可以根据需要影响氨基酸序列。特别
地，考虑了与天然V、D、J、恒定、开关和本文描述的其他此类序列基本同源或衍生的DNA序列。
[0010]在又一方面，提供了产生抗体融合物的方法，该方法包括(a)获得目的抗体或其片段的核酸序列，(b)将抗体或其核酸片段的核酸序列可操作地连接至目的标记的核酸序列，(c)将具有目的标记的抗体或其片段作为抗体融合物在宿主细胞中表达，和(d)分离抗体融合物。目的抗体可以包括任何抗体。在一些实施方式中，目的抗体可以选自抗PCT抗体、抗甲状腺TRAb、抗莱姆病VlsE/C6、抗OspC/10和抗DbpA 抗体。应当理解，额外的抗体，例如能够与多种传染病因子结合的那些，可用于毒理学和/或过敏组、过敏组的那些，以及激素抗体(例如，hCG等)都在方法的范围内。目的标记可以是包含荧光素酶的发光标记和/或包含GFP(绿色荧光蛋白)、RFP(红色荧光蛋白)、CFP(青色荧光蛋白)或YFP(黄色荧光蛋白)中的至少一种的荧光标记，和/或磷酸酶标记和/或标签，例如亲和素/生物素或由Corp.MadisonWI出售的系统。
[0011]应当理解，萤光素酶可以是NLuc(NanoLuc)、RLuc(RetinaLuc)和FLuc (FireflyLuc)中的至少一种。
[0012]在一个实施方式中，磷酸酶标记包括SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)。
[0013]在另一个实施例中，荧光标记包括GFP(绿色荧光蛋白)、RFP(红色荧光蛋白)、 CFP(青色荧光蛋白)或YFP(黄色荧光蛋白)。
[0014]在另一个实施方式中，目的抗体包括抗PCT抗体或其片段，并且目的标记包括 NanoLuc。
[0015]在又一个实施方式中，目的抗体包括抗PCT抗体或其片段并且目的标记包括 SEAP。
[0016]在又一个实施方式中，目标抗体包含抗甲状腺TRAb或其片段并且目标标记包含 NLuc。
[0017]在又一个实施方式中，目的抗体包括莱姆病VlsE/C6抗体、OspC/10抗体或DbpA 抗体或其片段。
[0018]在又一个实施方式中，目的抗体包含M22(TSHR
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特异性)抗体或其片段，并且目的标记包含包含绿色荧光蛋白(GFP)的荧光蛋白。
[0019]在另一个实施方式中，目的抗体包括M22(TSHR
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特异性)抗体或其片段，并且目的标记包括含有红色荧光蛋白(RFP)的荧光蛋白。
[0020]在又一个实施方式中，目的抗体包含M22_NLuc或其片段，并且其中所述抗体与包含RPE
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抗人IgG或其片段的第二抗体配对。
[0021]在又一方面，提供抗体融合物，其包含任何抗体或其片段和选自下列的标记：(a) 萤光素酶、(b)荧光蛋白和(c)SEAP(分泌的胚胎碱性碱磷酸酶)。在一些实施方式中，目的抗体选自抗PCT抗体、抗甲状腺TRAb、抗莱姆病VlsE/C6、抗OspC/10 和抗DbpA抗体。
[0022]在一个实施方式中，目的抗体用融合蛋白标记，例如亲和素或亲和素的一种形式或蛋白，而单克隆抗体将附着的支持物将用生物素或小HaloTag接头标记。一旦单克隆抗体接触，就会形成共价键或新的共价键，确保单克隆抗体牢固连接，而不会暴露于标记试剂。
[0023]荧光蛋白可以是GFP(绿色荧光蛋白)、RFP(红色荧光蛋白)、CFP(青色荧光蛋白)或
YFP(黄色荧光蛋白)中的至少一种。
[0024]应当理解，萤光素酶可以是NLuc(NanoLuc)、RLuc(RetinaLuc)和FLuc (FireflyLuc)中的至少一种。
[0025]在又一方面，提供了用于诊断和/或检测人类受试者中目的疾病或病症的方法。该方法包括：(a)提供包含抗体融合物的免疫测定，其中所述融合物包含标记，(b) 使免疫测定与来自受试者的样品接触；(c)检测抗体融合物是否与样品中的靶标结合以确定所述疾病或病症的存在与否。
[0026]应当本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.产生抗体融合物的方法，其包括：(a)获得目的抗体或其片段的核酸序列；(b)将所述目的抗体或其片段的核酸序列可操作地连接到目的标记的核酸序列；(c)在宿主细胞中将带有目的标记的抗体或其片段表达为抗体融合物；和(d)分离所述抗体融合物；其中所述目的标记选自：发光标记，其包含荧光素酶，荧光标记，其包含下列中的至少一种：GFP(绿色荧光蛋白)、RFP(红色荧光蛋白)、CFP(青色荧光蛋白)或YFP(黄色荧光蛋白)，和磷酸酶标记。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述目的抗体选自：抗PCT抗体、抗甲状腺TRAb、抗莱姆病VlsE/C6、抗OspC/10、抗DbpA抗体和其片段。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述荧光素酶是下列中的至少一种：NLuc(NanoLuc)、RLuc(RetinaLuc)和FLuc(FireflyLuc)。4.根据权利要求1～3之任一项所述的方法，其中所述磷酸酶标记包括SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)。5.根据权利要求1～4之任一项所述的方法，其中所述荧光标记包括GFP(绿色荧光蛋白)、RFP(红色荧光蛋白)、CFP(青色荧光蛋白)或YFP(黄色荧光蛋白)。6.根据权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述目的抗体包括抗PCT抗体或其片段，且所述目的标记包括NanoLuc。7.根据权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述目的抗体包括抗PCT抗体或其片段，且所述目的标记包括SEAP。8.根据权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述目标抗体包含抗甲状腺TRAb或其片段，且所述目标标记包含NLuc。9.根据权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述目的抗体包括莱姆病VlsE/C6抗体、OspC/10抗体或DbpA抗体或其片段。10.根据权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述目的抗体包括M22(TSHR
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特异性)抗体或其片段，且所述目的标记包括含有绿色荧光蛋白(GFP)的荧光蛋白。11.根据权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述目的抗体包括M22(TSHR
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特异性)抗体或其片段，且所述目的标记包括含有红色荧光蛋白(RFP)的荧光蛋白。12.根据权利要求1～5之...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：奎多公司，
类型：发明
国别省市：