一种鼠尾藻多酚的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鼠尾藻多酚的制备方法，涉及鼠尾藻多酚制备技术领域。本发明专利技术是将鼠尾藻浆液与稻壳和葡萄糖混合均匀后，加入发酵剂进行发酵，发酵结束后再加入复合酶进行酶解处理，得到酶解液；将酶解液进行冷冻干燥、研磨得到酶解鼠尾藻粉末；对所述酶解鼠尾藻粉末进行醇提，得到鼠尾藻多酚粗提物；最后依次经过离心、过滤、浓缩以及纯化后得到鼠尾藻多酚，其中所述复合酶为褐藻胶裂解酶和木聚糖酶的混合物。本发明专利技术所得到的鼠尾藻多酚具有纯度高且良好的抗氧化活性，具有一定细胞保护性。具有一定细胞保护性。具有一定细胞保护性。

【技术实现步骤摘要】
一种鼠尾藻多酚的制备方法


[0001]本专利技术属于鼠尾藻制备
，具体涉及一种鼠尾藻多酚的制备方法。

技术介绍

[0002]随着人们生活水平的提高，对健康的追求也越来越高，对具有维持机体健康，预防疾病发生的抗氧化产品的需求也越来越大。褐藻多酚作为从褐藻中提取出的一类酚类化合物，具有如抗菌、抗病毒、抗肿瘤、保护肝脏等多种生物活性，同时其抗氧化能力也尤为突出。
[0003]鼠尾藻是一类在我国分布广泛，易于采集的褐藻，目前主要作为鲍鱼、海参等海洋珍稀产品的饵料，但这大大降低了鼠尾藻的市场价值和应用前景，其精深加工水平与高值化利用程度较低。从鼠尾藻中提取褐藻多酚，即鼠尾藻多酚具有较高的经济价值，但是目前的提取工艺存在工艺复杂、提取率低以及获得的褐藻多酚纯度低，活性相对较差的问题。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种鼠尾藻多酚的制备方法，该方法具有提取周期短、成本低以及安全性高的特点，极大程度保护鼠尾藻中的有效成分，最终得到的鼠尾藻多酚产品具有较好的抗氧化活性。
[0005]本专利技术的目的至少通过如下技术方案之一实现。
[0006]本专利技术公开了以鼠尾藻为原料，制备一种具有抗氧化活性的鼠尾藻多酚的方法。该方法是将鼠尾藻浆液与稻壳和葡萄糖混合均匀后，加入发酵剂进行发酵，发酵结束后再加入复合酶进行酶解处理，得到酶解液；将酶解液进行冷冻干燥、研磨得到酶解鼠尾藻粉末；对所述酶解鼠尾藻粉末进行醇提，得到鼠尾藻多酚粗提物；最后依次经过离心、过滤、浓缩以及纯化后得到鼠尾藻多酚；所述复合酶为褐藻胶裂解酶和木聚糖酶的混合物。
[0007]优选的，所述鼠尾藻浆液是将新鲜鼠尾藻进行清洗、沥干水分后打浆制备而成。
[0008]优选的，所述稻壳的添加量为鼠尾藻浆液质量的20%，所述葡萄糖添加量为鼠尾藻浆液质量的1
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2%；所述发酵剂为里氏木霉，所述发酵的时间为48h，发酵温度为28℃。
[0009]优选的，所述复合酶中褐藻胶裂解酶和木聚糖酶的质量比为1:1，所述复合酶的添加量占所述鼠尾藻浆液质量的1%。本专利技术所述褐藻胶裂解酶和木聚糖酶为商业购买，其酶活力均为50000U/g。
[0010]优选的，所述酶解温度为40
‑
50℃，酶解时间4
‑
6h。
[0011]优选的，所述醇提方式为超声醇提，具体的超声功率为400～600w，超声提取的时间为30～60min，超声提取的温度为40～70℃，提取剂为体积浓度30
‑
70%的乙醇；所述酶解鼠尾藻粉末与提取剂的料液比为1g:(5～25)mL。在一些实施例中，本专利技术鼠尾藻粉末与提取剂的料液比为1g:5mL、1g:10mL、1g:15mL、1g:20mL、1g:25mL。在一些实施例中超声提取时间为30min、45min、60min。在一些实施例中本专利技术的超声提取温度为40℃、50℃、60℃、70
℃；在一些实施例中本专利技术所采用的乙醇的体积浓度为30%、40%、50%、60%、70%。
[0012]优选的，将所述鼠尾藻多酚粗提物在8000rpm/min的条件下离心去除大颗粒杂质，随后澄清液在
‑
0.1～
‑
0.2MPa的真空条件下，使用孔径为1μm的水相滤膜进行过滤。
[0013]优选的，所述浓缩为减压浓缩，具体过程是在
‑
0.1～
‑
0.2MPa的真空下，以旋转速度为75～125rpm/min、蒸发温度为40～50℃、循环冷凝温度0～5℃的条件下进行浓缩，得到鼠尾藻多酚浓度为1.0
‑
3.0mg/mL的浓缩液。
[0014]优选的，所述纯化是将减压浓缩后的浓缩液利用AB
‑
8大孔树脂柱进行纯化，控制纯化的流速为0.5～3.0 BV/h。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术先对鼠尾藻进行固态发酵，可以有效破碎鼠尾藻细胞壁，使鼠尾藻原料处理更充分，大大提高多酚溶出率；(2)本专利技术采用褐藻胶裂解酶和木聚糖酶复合酶解的手段，可以有效降解鼠尾藻的细胞成分，使细胞中的多酚成分得到有效释放；(3)采用真空冷冻干燥配合研磨粉碎的手段，实现低温条件下的多酚提取；与之前的固态发酵和复合酶解相耦合，整体工艺均采用了低温条件温和处理的工艺，最大限度地不破坏多酚成分，有助于提高鼠尾藻多酚提取效率和得率；(4)本专利技术制备方法所得到的鼠尾藻多酚具有纯度高且良好的抗氧化活性，具有一定细胞保护性。
附图说明
[0016]图1为实施例5得到的鼠尾藻多酚质谱图；图2为实施例5得到的鼠尾藻多酚质谱图；图3为实施例5得到的鼠尾藻多酚液相色谱图；图4为实施例5得到的鼠尾藻多酚对DPPH的清除能力；图5为实施例5得到的鼠尾藻多酚对羟基自由基和烷基自由基的清除能力；图6为实施例5得到的鼠尾藻多酚的细胞毒性测定；图7为实施例5得到的鼠尾藻多酚对APPH诱导下ROS分泌量的影响；图8为实施例5得到的鼠尾藻多酚对H2O2诱导下ROS分泌量的影响；图9为实施例5得到的鼠尾藻多酚对AAPH处理细胞的保护作用测定；图10为实施例5得到的鼠尾藻多酚对H2O2处理细胞的保护作用测定。
具体实施方式
[0017]本文中应用了具体个例对本专利技术的原理及实施方式进行了阐述，以上实例的说明只是用于帮助理解本专利技术的方法及其核心思想。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的具体结构，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合；这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将专利技术的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均应视为本专利技术的保护范围。
[0018]实施例1
一种鼠尾藻多酚提取物的制备方法具体步骤如下：1)将新鲜鼠尾藻用水仔细清洗若干遍，去除藻体表面的泥土及其他附着物，沥干水分；2)称取步骤1)清洗沥干的新鲜鼠尾藻20.0g，使用均质机均质成浆，向浆液中加入4g洁净稻壳，0.2g葡萄糖，搅拌均匀后，接种里氏木霉（接种量为新鲜鼠尾藻质量的5%），置于28℃发酵48h，每12h翻拌一次。
[0019]3)向步骤2)发酵结束后的鼠尾藻中加入0.2g由质量比为1:1褐藻胶裂解酶和木聚糖酶构成复合酶，混合均匀后置于40℃酶解4h。其中所使用褐藻胶裂解酶和木聚糖酶的酶活力均为50000U/g。
[0020]4)将步骤3)酶解后的鼠尾藻浆液进行真空冷冻干燥，随后对冻干样进行研磨，得到鼠尾藻粉末。其中，真空冷冻干燥的真空度为60Pa，真空冷冻干燥的温度为
‑
55℃，真空冷冻干燥的时间为50h。
[0021]5)将步骤4)得到的鼠尾藻粉末按料液比1g:5mL加入体积浓度为50%乙醇溶液进行超声提取，得到鼠尾藻提取液；其中超声提取的工艺条件为：超声功率为500w，超声提取的时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠尾藻多酚的制备方法，其特征在于，所述方法是将鼠尾藻浆液与稻壳和葡萄糖混合均匀后，加入发酵剂进行发酵，发酵结束后再加入复合酶进行酶解处理，得到酶解液；将酶解液进行冷冻干燥、研磨得到酶解鼠尾藻粉末；对所述酶解鼠尾藻粉末进行醇提，得到鼠尾藻多酚粗提物；最后依次经过离心、过滤、浓缩以及纯化后得到鼠尾藻多酚；所述复合酶为褐藻胶裂解酶和木聚糖酶的混合物。2.根据权利要求1所述鼠尾藻多酚的制备方法，其特征在于，所述鼠尾藻浆液是将新鲜鼠尾藻进行清洗、沥干水分后打浆制备而成。3.根据权利要求1所述鼠尾藻多酚的制备方法，其特征在于，所述稻壳的添加量为鼠尾藻浆液质量的20%，所述葡萄糖添加量为鼠尾藻浆液质量的1
‑
2%；所述发酵剂为里氏木霉，所述发酵的时间为48h，发酵温度为28℃。4.根据权利要求1所述鼠尾藻多酚的制备方法，其特征在于，所述复合酶中褐藻胶裂解酶和木聚糖酶的质量比为1:1，所述复合酶的添加量占所述鼠尾藻浆液质量的1%。5.根据权利要求1所述鼠尾藻多酚的制备方法，其特征在于，所述酶解温度为40
‑
50℃，酶解时间4
‑
6h。6.根据权利要求1所述鼠尾藻多酚的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟海津，王双童，朱长亮，王乐，朱琳，
申请(专利权)人：威海迪普森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：