抗IHNV和IPNV共感染海带提取物的制备与应用制造技术

本发明专利技术公开了抗IHNV与IPNV共感染海带提取物的制备与应用，属于提取物领域。本发明专利技术公开了海带提取物在制备病毒抑制剂或抗病毒药物中的应用，所述病毒为传染性造血器官坏死病毒和传染性胰腺坏死病毒，所述海带提取物按照包括如下步骤的方法制备：1)海带提取物的制备：包括用乙醇沉淀海带水提液，收集沉淀，该沉淀为海带提取物；所述海带水提液是用水从海带中提取出来的水溶性物质；2)除去1)所述海带粗提物的蛋白质，并用透析袋法进行透析纯化后，得到所述海带提取物。本发明专利技术提供的海带提取物可显著抑制IHNV与IPNV共感染，有望成为抗IHNV和IPNV共感染的新型药物。和IPNV共感染的新型药物。

【技术实现步骤摘要】
抗IHNV和IPNV共感染海带提取物的制备与应用


[0001]本专利技术属于提取物领域，具体涉及一种抗IHNV和IPNV共感染的海带提取物的制备与应用。

技术介绍

[0002]鲑鳟是国际上主流的水产养殖品种，也是我国主要养殖的冷水性经济鱼类。传染性造血器官坏死病(Infectious hematopoietic necrosis，IHN)和传染性胰腺坏死病(Infectious Pancreatic Necrosis，IPN)属于急性病毒病，主要感染鲑鳟鱼类。目前，IHN和IPN是严重威胁鲑鳟鱼产业发展的重大疫病。
[0003]在自然发病情况下，IHN和IPN的致死率均高达90％以上。在鲑鳟养殖过程中，IHN病毒(IHNV)和IPN病毒(IPNV)具有潜伏期短，传播速度快，且常发生共感染等特点，这极大地增加了病毒性疾病暴发与流行的风险，给鲑鳟鱼养殖带来了更为严重的危害。目前，我国缺乏防控IHNV和IPNV药物。由于疫苗产品的研发周期长、技术难度较大，国内学者对IHNV和IPNV疫苗的研发仍处于实验室阶段，且疫苗的免疫效果(安全性、有效性、稳定性)仍存在很多的问题。因此，亟需开发一种新型抗IHNV和IPNV共感染的药物。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是如何抑制传染性造血器官坏死病毒和传染性胰腺坏死病毒，减少水产养殖业的损失。
[0005]为解决上述技术问题，第一个方面，本专利技术提供海带提取物在制备病毒抑制剂或抗病毒药物中的应用，所述病毒为传染性造血器官坏死病毒和传染性胰腺坏死病毒，
[0006]所述海带提取物按照包括如下步骤的方法制备：
[0007]1)海带粗提物的制备：包括去除海带浸提液中的蛋白质，得到海带粗提物；所述海带浸提液是对海带进行酶解和水提获得的提取液，
[0008]2)乙醇沉淀透析保留液收集沉淀获得海带提取物，所述透析保留液为对所述海带粗提物用透析袋法进行透析纯化获得的袋内液体。
[0009]进一步地，上述的应用中，所述海带浸提液按照包括1
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1)和1
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2)的方法制备：
[0010]1‑
1)将海带和水混合，获得海带浸泡液；
[0011]1‑
2)用纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶处理所述海带浸泡液获得水提液，对所述水提液进行过滤，收集滤液，对所述滤液进行离心，收集上清液获得海带浸提液。
[0012]进一步地，上述的应用中，所述1
‑
1)将海带和水混合，获得海带浸泡液具体包括：将干燥的海带(Laminaria japonica)(由叶状体和柄组成)粉碎过20目筛，得到海带干粉；取蒸馏水与海带干粉混合使其液料比达到30：1(即蒸馏水与海带干粉的质量比为30：1)，浸泡6h，得到海带浸泡液。
[0013]进一步地，上述的应用中，所述1
‑
2)中用纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶处理所述海带浸泡液获得水提液包括：
[0014]调节所述海带浸泡液的pH至5.0，加入纤维素酶，55℃酶解20min，得到纤维素酶解液；调节所述纤维素酶解液的pH至4.2，加入果胶酶，50℃酶解2h，得到果胶酶解液；调节所述果胶酶解液pH至6.0，加入木瓜蛋白酶，50℃酶解2h后在75℃下浸提3h，得到所述水提液。
[0015]其中，纤维素酶具体可为来源于里氏木霉ATCC26921的纤维素酶，其CAS号为9012
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8。所述纤维素酶可为阿拉丁试剂公司的货号为C128647的产品，添加量可为10U/g干燥的海带。
[0016]果胶酶具体可为来源于黑曲霉的果胶酶，其CAS号为9032
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1。所述果胶酶可为阿拉丁试剂公司的货号为P116864的产品，添加量可为10U/g干燥的海带。
[0017]木瓜蛋白酶的CAS号为9001
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4。所述木瓜蛋白酶可为阿拉丁试剂公司的货号为P164463的产品，添加量可为10U/g干燥的海带。
[0018]进一步地，所述1
‑
2)中的过滤可为真空抽滤，所用布氏漏斗为上海华科产品，布氏漏斗的规格为150mm，所述滤纸为皎洁牌定量滤纸，规格为中速15cm。
[0019]进一步地，上述的应用中，所述1
‑
2)中所述离心条件为3500g离心15min。
[0020]进一步地，上述的应用中，所述1)中采用sevage法去除海带浸提液中的蛋白质。
[0021]进一步地，上述的应用中，所述采用sevage法去除海带浸提液中的蛋白质包括在3500g离心10min。
[0022]进一步地，上述的应用中，所述sevage法去除海带浸提液中的蛋白质还包括：
[0023]s1)去除海带浸提液中的蛋白质前，对所述的海带浸提液60℃减压浓缩至原体积的1/10，获得浓缩的海带浸提液；
[0024]s2)将氯仿和正丁醇按4：1的体积比混合得到混合试剂。将混合试剂与浓缩的海带浸提液按照1：2的体积比混合，放置于空气振荡器中室温剧烈震荡30min；
[0025]s3)然后将震荡后的混合液进行上述条件离心。
[0026]进一步地，上述的应用中，所述2)中，所述透析的截留分子量为3500Da。
[0027]进一步地，上述的应用中，2)中所述乙醇沉淀透析保留液收集沉淀包括3500g离心10min，收集沉淀的步骤。
[0028]进一步地，上述的应用中，所述2)包括对所述沉淀冷冻干燥，制备成干粉的步骤。
[0029]本专利技术中，所述冷冻干燥可为真空冷冻干燥。
[0030]为解决上述技术问题，第二个方面，本专利技术提供海带在制备病毒抑制剂或抗病毒药物中的应用，所述病毒为传染性造血器官坏死病毒和传染性胰腺坏死病毒。
[0031]为解决上述技术问题，第三个方面，本专利技术提供海带在制备上述的海带提取物中的应用。
[0032]本专利技术中，所述传染性造血器官坏死病毒可为虹鳟传染性造血器官坏死病毒HLJ
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15。传染性造血器官坏死病毒HLJ
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15于2016年4月15日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC；地址：中国武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO：V201622。
[0033]本专利技术中，所述传染性胰腺坏死病毒可为传染性胰腺坏死病毒IPNV
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ChRtm213毒株。
[0034]本专利技术中，所述海带可为Laminaria japonica。所述海带可由叶状体和柄组成。
[0035]本研究以抗IHNV和IPNV为切入点，在细胞水平上筛选获得具有显著抗IHNV和IPNV共感染的海带提取物，这将有助于提升防控IHNV和IPNV的水平，进而减少IHNV和IPNV共感
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.海带提取物在制备病毒抑制剂或抗病毒药物中的应用，其特征在于：所述病毒为传染性造血器官坏死病毒和传染性胰腺坏死病毒，所述海带提取物按照包括如下步骤的方法制备：1)海带粗提物的制备：包括去除海带浸提液中的蛋白质，得到海带粗提物；所述海带浸提液是对海带进行酶解和水提获得的提取液，2)乙醇沉淀透析保留液收集沉淀获得海带提取物，所述透析保留液为对所述海带粗提物用透析袋法进行透析纯化获得的袋内液体。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述海带浸提液按照包括1
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1)和1
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2)的方法制备：1
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1)将海带和水混合，获得海带浸泡液；1
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2)用纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶处理所述海带浸泡液获得水提液，对所述水提液进行过滤，收集滤液，对所述滤液进行离心，收集上清液获得海带浸提液。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述1
‑
2)中用纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶处理所述海带浸泡液获得水提液包括：调节所述海带浸泡液的pH至5.0，加入纤维素酶，55℃酶解20min，得到纤维素酶解液；调节所述纤维素酶解液的pH至4.2，加入果胶酶，50℃酶解2h，得到果胶酶解液...

【专利技术属性】
技术研发人员：任广明，徐黎明，卢彤岩，赵景壮，邵轶智，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：