腺病毒的免疫测定方法及免疫测定器具技术

本发明专利技术的目的在于提供可迅速且简便地、而且高灵敏度地检测和测定被检试样中含有的腺病毒的单克隆抗体、使用该单克隆抗体的腺病毒的免疫测定方法和免疫测定器具。本发明专利技术提供与腺病毒的六邻体三聚体发生抗原抗体反应的单克隆抗体或其抗原结合片段、使用该单克隆抗体或其抗原结合片段的免疫测定方法和免疫测定器具。器具。器具。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】腺病毒的免疫测定方法及免疫测定器具


[0001]本专利技术涉及腺病毒的免疫测定方法及免疫测定器具以及用于其的抗腺病毒抗体。

技术介绍

[0002]腺病毒已知是急性发热性咽炎、咽结膜炎、急性呼吸道炎、病毒性肺炎等呼吸系统疾病，急性滤泡性结膜炎、流行性角结膜炎等眼病，感染性胃肠炎等消化系统疾病，尿道炎等泌尿系统疾病等的病原体。目前，腺病毒分为A~G这7种，存在超过80个类型。51型以前作为血清型报告，而52型以后基于确定的全部碱基序列作为基因型报告(非专利文献1)。在腺病毒感染人时，呈现多种多样的临床症状，由于特异性的病情少，所以难以根据临床症状证明腺病毒的感染。另外，腺病毒的感染性强，为了防止群体感染，需要在早期证明病毒的感染。
[0003]作为迅速且简便地检测腺病毒的方法，也开发了使用抗腺病毒抗体的免疫色谱法或使用EIA的方法，但在可采集的试样量少的眼科领域阳性率为60%以下，需要更高灵敏度的迅速诊断法或可用于其的抗腺病毒单克隆抗体。
[0004]在日本国立感染症研究所的发病动向调查中，作为腺病毒相关疾病，掌握了咽结膜热、感染性胃肠炎、流行性角结膜炎的患者发病信息。急性呼吸系统疾病、咽结膜热的原因已知是B、C、E种的腺病毒，感染性胃肠炎的原因已知是A、F、G种的腺病毒，流行性角结膜炎的原因已知是B、D、E种的腺病毒(非专利文献2)。B种的腺病毒3型和E种的腺病毒4型是流行性角结膜炎和咽结膜热的最普遍的病因，D种的腺病毒8型、19型和37型是一些国家、特别是东亚和东南亚的流行性角结膜炎大爆发的原因。腺病毒8型、19型和37型是众所周知的院内感染的流行病学原因。最近，由腺病毒引起的院内感染成为公共卫生中的重要社会问题，成为医院的经济性和伦理性问题。
[0005]目前制作并报告了多种与腺病毒反应的单克隆抗体。例如，报告了使用与腺病毒的特定亚型反应的单克隆抗体来检测腺病毒的方法(专利文献1和2)。另外，使用针对腺病毒的单克隆抗体的腺病毒检测试剂盒也有市售。
[0006]现有技术文献非专利文献非专利文献1：Seto D等人, J Virol 85: 5701
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5702, 2011非专利文献2：IASR Vol. 38 p.133
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135: 2017年7月号专利文献1：日本特开2000
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290298专利文献2：日本特开2000
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290299。

技术实现思路

[0007]专利技术所要解决的课题但是，目前所制作的针对腺病毒的单克隆抗体对腺病毒的检测灵敏度均不充分，需要更高灵敏度地反应的单克隆抗体。
[0008]另外，在市售的腺病毒检测试剂盒中，虽然有的也在说明书中记载使用针对腺病毒的六邻体的单克隆抗体，但检体中的六邻体的结构可根据检测试剂盒所使用的提取液的组成而变化，因此该单克隆抗体的表位未必明确。
[0009]本专利技术的目的在于，提供可迅速且简便地、而且高灵敏度地检测和测定被检试样中含有的腺病毒的单克隆抗体、使用该单克隆抗体的腺病毒的免疫测定方法和免疫测定器具。
[0010]解决课题的手段本专利技术人对上述课题进行了深入研究，结果发现，为了更高灵敏度地检测腺病毒，使用以腺病毒中含有的六邻体三聚体作为表位的单克隆抗体是有效的，从而完成了本专利技术。
[0011]即，本专利技术如下所述。
[0012][1] 与腺病毒的六邻体三聚体发生抗原抗体反应的单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0013][2] [1]所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，与六邻体单体相比，所述单克隆抗体与六邻体三聚体发生更强的抗原抗体反应。
[0014][3] 腺病毒的免疫测定方法，其包括利用[1]或[2]所述的单克隆抗体或其抗原结合片段与检体中的腺病毒的抗原抗体反应来对腺病毒进行免疫测定。
[0015][4] [3]所述的方法，其中，所述免疫测定方法为夹心法，所述单克隆抗体或其抗原结合片段用于标记或固相中的至少任一个。
[0016][5] 腺病毒的免疫测定器具，其含有[1]或[2]所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0017]专利技术的效果根据本专利技术，可提供能够迅速且简便地、而且高灵敏度地检测和测定被检试样中含有的腺病毒的单克隆抗体、使用该单克隆抗体的腺病毒的免疫测定方法和免疫测定器具。
附图说明
[0018][图1] 表示实施例3中进行的蛋白印迹的结果的图。
[0019][图2] 表示用CBB将实施例3中进行的电泳后的凝胶染色的结果的图。
具体实施方式
[0020]以下，对本专利技术的实施方式进行详细叙述。
[0021]<单克隆抗体或其抗原结合片段>本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段与构成腺病毒的六邻体三聚体发生抗原抗体反应，以腺病毒的六邻体三聚体作为表位。另外，本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段不与构成腺病毒的六邻体单体发生抗原抗体反应。
[0022]腺病毒由线形双链DNA和覆盖它的正二十面体衣壳蛋白构成，衣壳蛋白由位于顶点的五邻体壳粒和240个六邻体构成。本专利技术人发现，与腺病毒的六邻体单体相比，与六邻体三聚体发生更强的抗原抗体反应的单克隆抗体或其抗原结合片段对于腺病毒的高灵敏
度检测是有效的。
[0023]通过使用这样的单克隆抗体或其抗原结合片段来进行腺病毒的免疫测定，可高灵敏度地检测广泛的亚型和亚群(种)的腺病毒。另外，通过在利用蛋白印迹法的腺病毒的检测中使用该抗体，可检测到与分子量为200~300kD的六邻体三聚体的抗原抗体反应所产生的特异性信号。
[0024]本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段具有由重链和轻链构成的基本结构，重链和轻链分别具有可与抗原特异性结合的可变区。V
H
指重链的可变区，V
L
指轻链的可变区。重链和轻链的可变区分别包含互补决定区(CDR)、即CDR1、CDR2和CDR3，以及框架区(FR)的氨基酸序列。例如，可变区包含3个CDR和3或4个FR (例如FR1、FR2、FR3和任选的FR4)。
[0025]本专利技术的单克隆抗体包含四链抗体(例如2条轻链和2条重链)、重组抗体或修饰抗体(例如嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、CDR移植抗体、灵长类化抗体、去免疫化抗体、类人源化(synhumanized)抗体、半抗体、双特异性抗体)。另外，单克隆抗体的类别不限定于IgG，也可以是IgM或IgY。
[0026]在本专利技术中，单克隆抗体的抗原结合片段是只分离单克隆抗体的抗原结合部位的片段，例如可列举出通过公知的方法制作的Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、单链抗体(scFv)等具有特异性抗原结合性的片段。
[0027](单克隆抗体的制作方法)本专利技术的单克隆抗体可通过使用公知的免疫学方法，对被免疫动物免疫含有腺病毒的六邻体三聚体的复合体或提取物、或该腺病毒的六邻体三聚体或它们的部分肽，使用被免疫动物的细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.与腺病毒的六邻体三聚体发生抗原抗体反应的单克隆抗体或其抗原结合片段。2.权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，与六邻体单体相比，所述单克隆抗体与六邻体三聚体发生更强的抗原抗体反应。3.腺病毒的免疫测定方法，其包括利用权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫泽恭，桑原三和，
申请(专利权)人：电化株式会社，
类型：发明
国别省市：