一种抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开的是一种抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段及其应用，涉及抗HBsAg鲨鱼单域抗体及其氨基酸、核苷酸编码序列，还涉及包含该核苷酸编码序列的重组质粒和重组表达菌及其用途，具有更高亲和力和其它药理特性,有助于医学水平提高，适合药物的制备，市场前景广阔。景广阔。景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及抗HBsAg鲨鱼单域抗体，更具体一点说，涉及抗HBsAg鲨鱼单域抗体及其核苷酸，本专利技术还涉及包含该核苷酸编码序列的重组质粒和重组表达菌，属于单域抗体技术开发领域。

技术介绍

[0002]免疫球蛋白新抗原受体(Immunoglobulin New Antigen Receptor IgNAR)是已知的除骆驼重链抗体之外的另一种重链抗体，存在于软骨鱼类中，在护士鲨(Ginglymostomacirratum)中首次被分离出来，后续又在条纹斑竹鲨(Chiloscylliumplagiosum)这种浅海底栖小型鲨鱼体内被发现。
[0003]IgNAR中的可变结构域(VNAR)是目前已知的最小的抗原结合区域，VNAR有一些与VHH相同的可取特性，已被确定为可能的生物治疗试剂，其依据是：(1)相比于IgG，VNAR的小尺寸和穿透能力使其有可能进入IgG无法进入的致密组织；(2)鲨鱼血清中的高尿素含量使得VNAR具有优良的稳定性和溶解性；(3)VNAR具有与抗原裂隙结合和阻断酶的活性位点的倾向，有利于其在体内更稳定的存在；(4)VNAR对多种抗原裂解酶的活性位点具有高的(潜在的亚纳米分子)结合亲和力。鲨鱼来源的VNAR片段的应用开发仍处于临床前阶段。然而，近年研究表明，IgNAR的可变结构域在生物医学应用方面具有多功能性。抗原特异的VNAR分子已经被分离出来，以对抗广泛的疾病相关靶点，包括与癌症和关节炎有关的蛋白质、细胞因子、毒素以及病毒靶标等。
[0004]乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是由于乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)侵染生命体而导致的一种疾病，乙肝主要有两类，一种是急性乙型肝炎，一种是慢性乙型肝炎。人体在感染HBV后很容易由急性乙型肝炎转变成慢性乙型肝炎，甚至转变成肝硬化、肝细胞癌症。根据WHO对慢性乙型肝炎的防治指南，慢性乙型肝炎的治疗目标是通过各种手段消除患者体内的HBV，减轻肝细胞的炎性坏死及肝纤维化，延缓患者的病情恶化，进而减少肝硬化、肝衰竭、肝癌等不良并发症的发生率，提高患者的生活质量，延长患者的生存时间。目前针对慢性乙型肝炎的治疗策略主要是进行抗病毒治疗。使用药物对病毒生长周期中的各个步骤产生抑制作用，从而抑制病毒扩增，延缓病情恶化。近年来关于慢性乙型肝炎治疗的研究，更多的集中在各种治疗性疫苗上，包括多表位疫苗、DNA疫苗等。
[0005]但目前关于条纹斑竹鲨中IgNAR的研究相对较少，且没有关于抗乙肝表面抗原(HBsAg)的VNAR的相关报道，利用鲨鱼免疫特点，探究制备HBsAg的单域抗体具有积极的临床应用愿景，开发针对HBsAg更高亲和力和其它药理特性的单域抗体还十分必要和具有重要医疗价值的。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种抗HBsAg的单域抗体，同时提供了该单域抗体的编码序列，含有该编码序列的质粒，具有和人或鼠同源HBsAg蛋白结合活性的重组
IgNAR蛋白。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0008]本专利技术一种抗乙肝表面抗原HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段，所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段包含IgNAR蛋白的可变区VNAR，所述可变区VNAR的氨基酸序列包含PZ
‑
cluster 1329；所述PZ
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cluster 1329序列为：
[0009]NVFTQRVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLKGSRYALCKTYWYFTKKGATKKESLTNGGRYSVTMNKASKSFLLGISDLRVEDSGTYNCKAYSSGYTVHCDTGGQYYEGGGTILTVKPGKQPSPPIISLHYSAT。
[0010]本专利技术一种抗乙肝表面抗原HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段包含IgNAR蛋白的可变区VNAR，所述可变区VNAR的氨基酸序列包含PZ
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cluster 4364；所述PZ
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cluster4364序列为：
[0011]NVFTQWVEQTPTTTTTEAGESLTINCVLRGSSYALCNTYWYFTKKGATKKEILSNGGRYAATVNKASKSFSLRISDLRVEDSGTYHCVTTGCDGIAYYYEGGGTILTVKPGKQPSPPIISLHYSAT。
[0012]本专利技术一种编码所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列，其特征在于，包含编码多肽的核苷酸，所述多肽包含鲨鱼单域抗体可变区VNAR；所述可变区VNAR包含PZ
‑
cluster 1329，并且所述可变区VNAR能够结合人源HBsAg。
[0013]本专利技术一种编码所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列，其特征在于，包含编码多肽的核苷酸，所述多肽包含鲨鱼单域抗体可变区VNAR；所述可变区VNAR包含PZ
‑
cluster4364，并且所述可变区VNAR能够结合人源HBsAg。
[0014]本专利技术一种核苷酸序列，所述核苷酸序列为PZ
‑
cluster 1329
’
，属于优化后VNAR蛋白核苷酸序列，所述PZ
‑
cluster 1329
’
为
[0015]AACGTGTTTACCCAGCGTGTGGAACAGACCCCGACCACCACCACCAAAGAAGCCGGTGAAAGTCTGACCATTAATTGCGTGCTGAAAGGTAGTCGCTATGCACTGTGCAAAACCTATTGGTATTTTACCAAAAAGGGTGCCACCAAAAAAGAAAGCCTGACCAATGGCGGTCGCTATAGCGTGACCATGAATAAGGCAAGTAAAAGTTTTCTGCTGGGCATTAGCGATCTGCGCGTTGAAGATAGTGGTACCTATAATTGCAAAGCATATAGTAGCGGCTATACCGTTCATTGCGATACCGGCGGTCAGTATTATGAAGGCGGTGGCACCATTCTGACCGTTAAACCGGGCAAACAGCCGAGTCCGCCGATTATTAGCCTGCATTATAGTGCCACC。
[0016]本专利技术一种如权利要求4所述的核苷酸序列，属于优化后VNAR蛋白核苷酸序列，所述核苷酸序列为PZ
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cluster4364
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；
[0017]所述PZ
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cluster 4364
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为：
[0018]AACGTGTTTACCCAGTGGGTGGAACAGACCCCGACCACCACCACCACAGAAGCAGGCGAAAGTCTGACCATTAAT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段包含IgNAR蛋白的可变区VNAR，所述可变区VNAR的氨基酸序列包含PZ
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cluster 1329；所述PZ
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cluster 1329序列为：NVFTQRVEQTPTTTTKEAGESLTINCVLKGSRYALCKTYWYFTKKGATKKESLTNGGRYSVTMNKASKSFLLGISDLRVEDSGTYNCKAYSSGYTVHCDTGGQYYEGGGTILTVKPGKQPSPPIISLHYSAT。2.一种抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段及其应用，其特征在于，所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段包含IgNAR蛋白的可变区VNAR，所述可变区VNAR的氨基酸序列包含PZ
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cluster 4364；所述PZ
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cluster4364序列为：NVFTQWVEQTPTTTTTEAGESLTINCVLRGSSYALCNTYWYFTKKGATKKEILSNGGRYAATVNKASKSFSLRISDLRVEDSGTYHCVTTGCDGIAYYYEGGGTILTVKPGKQPSPPIISLHYSAT。3.一种编码权利要求1所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列，其特征在于，包含编码多肽的核苷酸，所述多肽包含鲨鱼单域抗体可变区VNAR；所述可变区VNAR包含PZ
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cluster 1329，并且所述可变区VNAR能够结合人源HBsAg。4.一种编码权利要求2所述抗HBsAg鲨鱼单域抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列，其特征在于，包含编码多肽的核苷酸，所述多肽包含鲨鱼单域抗体可变区VNAR；所述可变区VNAR包含PZ
‑
cluster4364，并且所述可变区VNAR能够结合人源HBsAg。5.一种如权利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列为PZ
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cluster 1329
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，所述PZ
‑
cluster 1329
’
为AACGTGTTTACCCAGCGTGTGGAACAGACCCCGACCACC...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕正兵，陈贵钱，陈剑清，王婵，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：