一种抗CD3的纳米抗体或其抗原结合部分及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗CD3的纳米抗体或其抗原结合部分及其制备方法，所述抗体包含SEQ ID NO.1所示的重链可变区中的互补决定区CDR1

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD3的纳米抗体或其抗原结合部分及其制备方法


[0001]本专利技术属于细胞免疫学、分子生物学领域，涉及一种抗CD3的抗体及其应用。

技术介绍

[0002]CD3分子是T细胞膜上的重要分化抗原，是成熟T细胞的特征性标志。它与T细胞表面受体TCR形成复合物，在细胞内信号转导过程中起着重要作用。CD3抗体可特异性地识别T细胞表面CD3分子，引起T细胞TCR
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CD3复合体的交联，直接产生活化信号，导致T细胞活化并增殖。目前研究表明，CD3抗体在肿瘤治疗中有重要的作用。但是，抗体药物应用存在很多问题，比如研发周期长，生产成本过高；难以大规模生产；稳定性差易降解，贮存成本高；容易被污染，维护成本费用高昂；并具有免疫原性等，限制了其在临床上的应用范围。纳米抗体技术，是生物医学科学家在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术结合纳米科学的概念进行的抗体工程革命，从而研发出的最新和最小的抗体分子。
[0003]1993年Hamers等报道，羊驼的免疫系统在检测到细菌和病毒等外来入侵者时会产生两种类型的抗体：一种类似于人抗体IgG，另一种相当于普通抗体的十分之一大小，这些较小的抗体称为单域抗体或纳米抗体(即缺失轻链的“重链抗体”)，这种缺失轻链的重链抗体只有很小的片段也能和正常的IgG等抗体一样去结合抗原，并且特异性强亲和力高。纳米抗体具有完整功能的最小的抗原结合片段，其晶体结构呈椭圆形，直径2.5nm，长4nm。纳米抗体在化学组成和形状上比抗体简单许多，不具有化学疏水性，其抗热性和抗酸碱性更强，更容易相互结合或与其他化合物结合，能被单基因编码，容易用微生物合成。纳米抗体对环境具有良好的耐受性，具备高度的构象稳定性，而且分子质量更小，临床的治疗效果更好，同时这些小蛋白分子更容易合成，价格也更低。纳米抗体的独特的性质，使其在疾病的精确诊断和免疫靶向治疗等方面展现了更为广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种研发周期短、可大规模生产、稳定性强、不易降解的抗CD3纳米抗体及开发方法，该抗体可用于制备抗肿瘤的药物。
[0005]本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]本专利技术一方面提供了一种抗CD3的抗体或其抗原结合部分，其包含SEQ ID NO.1所示的重链可变区中的互补决定区CDR1
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CDR3，所述CDR1的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1的第31
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35位氨基酸；所述CDR2的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1的第49
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55位氨基酸；所述CDR3的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1的第99
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105位氨基酸。
[0007]进一步，所述抗体或其抗原结合部分还包含SEQ ID NO.1所示的重链可变区中的框架区FR1
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FR4，其中所述FR1的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1的第1
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30位氨基酸；所述FR2的氨基酸序列为序列表中SEQ IDNo.1的第36
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49位氨基酸；所述FR3的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1的第67
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98位氨基酸；所述FR4的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1的第106
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116位氨基酸。
[0008]进一步，所述抗体为纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示。
[0009]本专利技术另一方面提供了一种分离的核酸分子，其编码前面所述的抗体或其抗原结合部分，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0010]一旦获得编码VH区段的DNA片段，进一步通过标准重组DNA技术操作这些DNA片段，以例，如将可变区基因转变为全长抗体链基因、或抗原结合部分DNA片段。在这些操作中，将编码VH的DNA片段可操作的连接至编码另一蛋白质，诸如抗体恒定区或柔性接头的另一DNA片段。术语“可操作的连接”在用于本文时意图表示连接两DNA片段从而使得这两个DNA片段所编码的氨基酸序列保持在同一读码框中(in
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frame)。
[0011]通过将编码VH的DNA可操作的连接至编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子可以将编码VH区的分离的DNA转变为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的。
[0012]本专利技术另一方面提供了前面所述的核酸分子的载体。
[0013]可用于本专利技术的载体包括质粒、表达载体、克隆载体、病毒载体等。可选用本领域已知的各种载体。比如，选用市售的载体，然后将编码本专利技术的抗体的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，可以形成表达载体。
[0014]本专利技术另一方面提供了前面所述的核酸分子或所述的载体的宿主细胞。
[0015]可用于本专利技术的宿主细胞包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。用于表达抗体的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞、COS细胞、CHO细胞等。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，更佳地是哺乳动物细胞，最佳的是HEK
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293T细胞或CHO细胞。
[0016]本专利技术另一方面提供了一种制备抗CD3的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括以下任一项：
[0017]1)一种制备抗CD3的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法是将前面所述的载体转染至宿主细胞中，培养宿主细胞，分离或回收抗CD3抗体。
[0018]进一步，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
[0019]2)一种基于SCMES(单克隆哺乳动物细胞表达筛选系统)平台开发抗CD3的抗体抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法步骤如下：
[0020]a)CD3抗原对羊驼进行免疫后，获得羊驼PBMC细胞；
[0021]b)通过液滴微流控技术对PBMC细胞进行分选，获得能够结合CD3抗原的有功能的抗体分泌细胞；
[0022]c)对分选获得的能够结合CD3抗原的有功能的抗体分泌细胞RNA捕获，通过PCR方法获得抗体基因片段，构建真核表达载体；
[0023]d)通过哺乳动物细胞高通量表达系统诱导抗CD3抗体高通量表达；
[0024]e)通过抗体检测技术及测序结果分析获得抗CD3抗体。
[0025]进一步，所述PCR方法为巢氏PCR方法。
[0026]进一步，所述抗体检测技术为ELISA或FACS检测。
[0027]本专利技术另一方面提供了一种检测CD3的产品，所述产品包括前面所述的抗体或其抗原结合部分。
[0028]所述功能性连接包括例如通过化学偶联、基因融合、非共价结合或其它方式连接。
[0029]进一步，所述产品可为偶联物或缀合物，所述偶联物或缀合物包括：
[0030]1)前面所述的抗体或其抗原结合部分；
[0031]2)与前面所述抗体或其抗原结合部分偶联或缀合的诊断剂；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD3的抗体或其抗原结合部分，其包含SEQ ID NO.1所示的重链可变区中的互补决定区CDR1
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CDR3；优选地，所述抗体或其抗原结合部分还包含SEQ ID NO.1所示的重链可变区中的框架区FR1
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FR4。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗体是纳米抗体。3.分离的核酸分子，其编码权利要求1
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2中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。4.包含权利要求3所述的核酸分子的载体。5.包含权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的载体的宿主细胞。6.一种制备抗CD3的抗体或其抗原结合部分的方法，其特征在于，所述方法包括以下任一项：1)一种制备抗CD3的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法是将权利要求4所述的的载体转染至宿主细胞中，培养宿主细胞，分离或回收抗CD3抗体；优选地，所述宿主细胞为哺乳动物细胞；2)一种基于SCMES平台开发抗CD3抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法步骤如下：a)CD3抗原对羊驼进行免疫后，获得羊驼PBMC细胞；b)通过液滴微流控技术对PBMC细胞进行分选，获得能够结合CD3抗原的有功能的抗体分泌细胞；c)对分选获得的能够结合CD3抗原的有功能的抗体分泌细胞进行RNA捕获，通过PCR方法获得抗体基因片段，构建真核表达载体；d)通过哺乳动物细胞高通量表达系统诱导抗CD3抗体高通量表达；e)通过抗体检测技术及测序结果分析获得抗CD3抗体；优选地，所述PCR方法为巢氏PCR方法；优选地，所述抗体检测技术为ELISA或FACS检测。...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜继文，卢海松，王玉芳，于蒙，
申请(专利权)人：上海百英生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：