用于在哺乳动物中刺激嵌合抗原受体介导的免疫应答的方法中的包含PD-L1和/或PD-L2的靶向模块技术

本发明专利技术涉及一种包含至少一个PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于在哺乳动物中刺激嵌合抗原受体介导的免疫应答的方法中的包含PD
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L1和/或PD
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L2的靶向模块
[0001]本专利技术涉及一种包含至少一个PD
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L1和/或PD
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L2结合结构域、和标签结合结构域或标签的靶向模块，用于在哺乳动物中刺激嵌合抗原受体介导的免疫应答的方法中；包含编码所述靶向模块的核苷酸序列的核酸、载体或细胞；包含所述靶向模块和包含编码开关型嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞的药物组合物和药盒。
[0002]嵌合抗原受体(CAR)是由提供抗原特异性的结合部分和源自于免疫受体的一个或几个信号转导链组成的人工受体(Cartellieri等2010)。这两个主要的CAR结构域通过连接肽链连接，该连接肽链包含将CAR锚定在细胞质膜中的跨膜结构域。免疫细胞，特别是T和NK细胞，可以通过基因修饰来表达插入其质膜中的CAR。如果这类CAR修饰的免疫细胞遇到表达或缀有CAR结合部分的适当靶标的其它细胞或组织结构，则在CAR结合部分与靶抗原结合后，CAR修饰的免疫细胞与靶标交联。交联导致诱导通过CAR信号转导链的信号通路，这将改变CAR移植的免疫细胞的生物学性质。例如，在效应CD4+和CD8+T细胞中触发CAR会激活典型的效应子功能，如分泌裂解化合物和细胞因子，最终导致杀伤相应的靶细胞。相反，在基因修饰的调节性T细胞(Treg)中的CAR激活导致Treg特异性免疫调节和抑制机制的激活，如白介素(IL)
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10或肿瘤生长因子β(TGF
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β)的分泌。用嵌合抗原受体(CAR)工程改造的免疫细胞进行过继转移目前被认为是治疗原本无法治愈的恶性、感染性或自身免疫性疾病的一种非常有前景的治疗选择。迄今为止，两种CAR
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T细胞治疗剂已获得市场批准用于治疗B细胞源性的恶性肿瘤，证明了这种方法的临床可行性。
[0003]然而，常规CAR技术伴随着许多关键性问题，需要解决这些问题之后才能将这种治疗模式广泛应用于临床治疗。首先，必须解决几个安全性问题。迄今，用常规CAR工程改造的T细胞在输注到患者体内后难以控制其免疫应答。严重不良事件率高(Titov等2018)。尤其是，正常组织上意外的靶基因表达可能引起工程改造的T细胞对抗正常细胞的迅速而剧烈的免疫反应，这会导致严重的副作用(Lamers等2006，Morgan等2010)。此外，由于CAR
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T细胞是新的一类自放大型(self
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amplifying)细胞药物，输注的T细胞在存在重肿瘤负荷的情况下会发生剧烈扩增，导致肿瘤溶解综合征、细胞因子释放综合征和巨噬细胞活化综合征(Brudno和Kochenderfer 2016，Maude等2014)。常规CAR技术的另一个缺点是工程改造的T细胞重新靶向单一抗原的限制。这样的单一治疗方法意味着在治疗期间发展出失去靶抗原的肿瘤逃逸变体的风险。在临床试验中已经观察到，在常规CAR T细胞疗法下几个月后出现肿瘤逃逸变异(Grupp等2013，Sotillo等2015)。总而言之，这些障碍将CAR
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T细胞的应用局限在很少的适应症上。实际上，迄今为止，临床有效性的实例限于靶向CD19和BCMA的CAR
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T细胞。
[0004]模块化的“通用(universal)”CAR
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T(UniCAR)方法可以通过将CAR的抗原识别和激活结构域分成两个独立的操作单元来克服这些限制。T细胞经工程改造以表达具有识别标签的通用结合结构域的CAR(Cartellieri等2016)。抗原特异性由可溶性衔接蛋白提供，该衔接蛋白由与通用CAR识别的标签融合的抗原结合结构域组成。Cartellieri等描述了体外和体内对CD33和/或CD123阳性的急性骨髓性白血病细胞的处理。
[0005]WO 2012/082841 A2公开了通用抗标签嵌合抗原受体表达型T细胞以及细胞相关疾病例如癌症的治疗方法。此外，WO 2013/044225 A1公开了一种由T细胞表达的通用免疫受体，用于靶向多样和多种抗原。这两种方法都描述了使用表达通用抗标签免疫受体的修饰的T细胞。通过额外应用结合细胞表面表面抗原并携带相应标签的可溶性模块，可以使这些T细胞重定向于疾病相关的这些表面抗原。WO 2016/030414 A1提供了一种基因修饰的免疫细胞，其允许采用基于核蛋白的内源性标签，以安全有效的方式针对多种疾病进行重定向。
[0006]WO 2018/224660 A1描述了用于通用抗标签嵌合抗原受体表达型T细胞的靶模块，其包含化学合成的对人表面蛋白质或蛋白质复合体特异性的肽结合单元，以及该靶模块的优点，特别是快速和容易制备、改善的稳定性和良好的药学性质。WO 2016/168773 A2公开了一种用于CAR
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T细胞的基于肽新表位(PNE)的开关，其包含受体结合配偶体、特别是肽抗原，靶结合部分、特别是可溶性T细胞受体或其一部分或抗体片段；和接头。
[0007]WO 2015/057834A1公开了开关型CAR
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T细胞和用于CAR
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T细胞的开关，该开关包含受体结合配偶体，特别是肽抗原。该肽抗原可以是天然的、非天然的或人工的肽，特别是酵母转录因子GCN4或其同源物。此外，该开关包含靶结合部分，特别是抗体或抗体片段，优选选自抗Her2抗体、抗BCMA抗体、抗CD19抗体、抗CEA抗体及其片段，和接头。
[0008]Yu等描述了不同代的CAR
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T细胞以及降低毒性、包括所谓的细胞因子释放综合征和瘤外中靶(on
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target off
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tumour)毒性(Yu等2019)的策略，特别是开关型CAR
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T细胞，特别是利用自杀基因、例如单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV
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tk)或诱导型半胱天冬酶9(iCasp9)基因的开关型CAR
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T细胞，或使用结合FITC的CAR
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T细胞和包含FITC的小分子和针对肿瘤靶标的抗体特别是西妥昔单抗、曲妥珠单抗或利妥昔单抗的通用CAR体系。
[0009]此外，Yu等公开了PD
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1抑制型CAR
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T细胞(iCAR)，并指出了i
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CAR
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T细胞的缺点，特别是iCAR
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T细胞只识别在肿瘤上不存在或下调并由靶外组织表达的组织特异性抗原，无法对iCAR
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T细胞进行时间和空间控制。
[0010]WO 2018/078066 A1公开了一种抗接头/标记表位(抗
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LLE)的胞外CAR，其包含接头/标记表位结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域，其中胞外接头/标记表位结合结构域与靶细胞结合分子(TCBM)结合，该靶细胞结合分子包含抗原结合部分(ABM)、天然存在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种靶向模块，所述靶向模块包含i)至少一个PD
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L1和/或PD
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L2结合结构域，ii)标签结合结构域或标签；用于在哺乳动物中刺激嵌合抗原受体介导的免疫应答的方法中，其中所述靶向模块与包含编码开关型嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞联合施用，其中所述开关型嵌合抗原受体包含三个结构域，其中
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第一结构域是标签结合结构域或标签，
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第二结构域是细胞外铰链和跨膜结构域，并且
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第三结构域是信号转导结构域，其中所述靶向模块的标签结合结构域与所述开关型嵌合抗原受体的标签结合，或所述靶向模块的标签与所述开关型嵌合抗原受体的标签结合结构域结合。2.根据权利要求1所述的靶向模块，其是单价或二价的。3.根据权利要求1或2所述的靶向模块，其中所述PD
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L1和/或PD
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L2结合结构域是BMS
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936559、阿替利珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维单抗、3F2.1及其片段。4.根据权利要求1至3中的任一项所述的靶向模块，其中所述标签是肽表位标签。5.根据权利要求4所述的靶向模块，其中所述肽表位标签是myc
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标签、His
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标签、来自酵母转录因子GCN4的短线性肽序列、亮氨酸拉链序列、或来自人核蛋白、优选来自人La蛋白的短线性肽序列。6.根据权利要求1至5中的任一项所述的靶向模块，其还包含效应细胞结合结构域，其中所述效应细胞结合结构域特异性结合人CD3链、人T细胞受体(TCR)或人CD16上的表位。7.根据权利要求1至6中的任一项所述的靶向模块，其中所述至少一个PD
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L1和/或PD
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L2结合结构域和/或所述效应细胞结合结构域的可变区包含人源化氨基酸序列。8.根据权利要求1至7中的任一项所述的靶向模块，其中长度在20至1600个氨基酸的范围内。9.根据权利要求1至8中的任一项所述的靶向模块，用于在哺乳动物中刺激嵌合抗原受体介导的免疫应答的方法中，其中所述靶向模块与包含编码开关型嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞以及至少一种其它靶向模块联合施用，其中所述至少一种其它靶向模块包含至少一个靶细胞结合结构域和标签结合结构域或标签，其中所述至少一个靶细胞结合结构域是与选自下列的表面抗原结合的抗体、抗体片段、蛋白质、肽或低分子量有机配体：CD2、CD3、CD4、CD8、CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD52、CD90、CD99、CD123、CD133、CD150、CD181、CD182、CD184、CD223、CD229、CD269(BCMA)、CD273、CD274、CD276、CD279、CD319、CD366和CD371，白介素受体，尤其优选IL
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8Rα(CXCR1)、IL
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8Rβ(CXCR2)、IL
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11Rα、IL
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11Rβ、IL
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13Rα1和IL
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13Rα2，CXCR4，c
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Met，间皮素，表皮生长因子受体家族成员及其突变体，尤其优选ErbB1、ErbB2、ErbB3、ErbB4或其突变体，肿瘤坏死因子受体超家族成员，肝配蛋白，肝配蛋白受体，尤其优
选EphA1
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10、EphA5或EphB1
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6，前列腺特异性抗原前列腺干细胞抗原(PSCA)和前列腺特异性膜抗原(PSMA)，胚胎抗原癌胚抗原(CEA)和胎儿乙酰胆碱受体，血管内皮生长因子家族成员，上皮细胞粘附分子EpCAM，甲胎蛋白AFP，细胞间粘附分子家族成员，粘蛋白家族成员，促卵泡激素受体(FSHR)，人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW
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MAA)，叶酸结合蛋白FBP，叶酸受体，生长抑素受体，NKG2D受体的配体，细胞因子受体，上皮糖蛋白家族成员，双唾液酸神经节苷脂，磷脂酰肌醇蛋白聚糖，G蛋白偶联受体，碳酸酐酶家族成员，糖抗原家族成员，Notch配体，黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)、糖蛋白A33，鸟苷酸环化酶2C和肿瘤特异性聚糖；包括所指定的抗体、抗体片段、蛋白质、肽或低分子量有机配体的突变体和类似物，其中根据权利要求1至8之一所述的靶向模块和所述至少一种其它靶向模块包含不同的靶细胞结合结构域、以及相同的标签结合结构域或标签。10.一种核酸、载体或细胞，其包含编码根据权利要求1至9之一所述的靶向模块的核苷酸序列，用于在哺乳动物中刺激嵌合抗原受体介导的免疫应答的方法中，其中所述核酸、载体或细胞与包含编码开关型嵌合抗原受体的核苷酸序列的载体或细胞联合施用，其中所述开关型嵌合抗原受体包含三个结构域，其中
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第一结构域是标签结合结构域或标签，
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第二结构域是细胞外铰链和跨膜结构域，并且
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第三结构域是信号转导结构域，其中所述靶向模块的标签结合结构域与所述开关型嵌合抗原受体的标...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿尔明，
申请(专利权)人：阿文塞勒欧洲有限公司，
类型：发明
国别省市：