偶联脂肪酸分子的抗体及其用途制造技术

描述了单克隆抗体(mAb)或双特异性抗体(bsAb)或多特异性抗体，其包含偶联于抗原结合结构域上或在其附近的脂肪酸(FA)分子。还描述了编码该抗体的核酸，包含该抗体的组合物，以及生产该抗体和使用该抗体治疗或预防疾病(例如癌症和/或相关的并发症)的方法。如癌症和/或相关的并发症)的方法。如癌症和/或相关的并发症)的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】偶联脂肪酸分子的抗体及其用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年2月27日提交的第62/982,476号美国临时申请的优先权。该公开内容通过引用整体并入本文。
专利

[0002]本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区(VH)；和轻链可变区(VL)；其中所述抗体或其抗原结合片段能够特异性结合靶抗原；其中VH、VL中的氨基酸残基、或距离VH或VL二十(20)个氨基酸距离(优选五(5)个氨基酸距离)以内的氨基酸残基被能够被偶联到脂肪酸(FA)的氨基酸残基取代，并且其中所述抗体或其抗原结合片段在被取代的氨基酸残基处与FA偶联后，仍能够与靶抗原特异性结合；并且其中在存在生理水平的白蛋白(例如35至50mg/mL)的情况下，所述结合FA的抗体或其抗原结合片段与靶抗原的特异性结合减少或消除。本专利技术还涉及多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含一个或多个抗原结合臂，该抗原结合臂包含与FA偶联的被取代的氨基酸残基。本专利技术还涉及编码抗体的核酸和表达载体、含有该载体的重组细胞以及包含该抗体的组合物。还提供了制备抗体的方法、将抗体与FA偶联的方法、制备包含偶联的抗体的组合物的方法以及使用偶联的抗体治疗癌症的方法。以电子形式提交的序列表的引用
[0003]本申请包含序列表，该序列表以电子形式通过EFS
‑
Web途径以ASCII格式序列表提交，其文件名为“065799.32WO1序列表”，创建日期为2021年2月22日，大小为29kb。通过EFS
‑
Web途径提交的序列表构成本说明书的一部分，其通过引用整体并入本文。专利技术背景
[0004]T细胞接合器是由两个结合结构域组成的分子，其中一个结合结构域结合癌细胞表面表达的肿瘤相关抗原(TAA)，另一个结合到T细胞表面分子以激活T细胞。虽然各种T细胞结合结构域已被用作激活成分，但抗CD3结合域已广泛用作T细胞接合器的一部分。抗CD3双特异性抗体已被用作T细胞接合免疫治疗剂，用于将T细胞招募到肿瘤细胞中，以促进癌症的杀伤。这种免疫肿瘤学方法的一个主要问题是细胞因子释放综合征(CRS)的风险。在远离肿瘤微环境的部位调节这些试剂在T细胞激活中的活性可以帮助降低CRS和其他毒性的风险。
[0005]脂肪酸(FAs)在循环血液中浓度较高。由于其疏水性，脂肪酸与范围为35
‑
50mg/mL的血液白蛋白分子结合(Peters,T.,1996.关于白蛋白的一切：生物化学、遗传学和医学应用(All About Albumin:Biochemistry,Genetics and Medical Applications).加利福尼亚州圣地亚哥：学术出版社有限公司)。已鉴定出白蛋白上七种常见的FA结合位点(Bhattacharya等人,J Mol Biol.2000.303:721
‑
32；Petitpas等人,J Mol Biol.2001.314:955
‑
60)。此外，有人提出肿瘤使用白蛋白作为能量来源来支持其侵袭性生长(Merlot等人，Front Physiol.2014.5:299)，这与肿瘤部位的高白蛋白分解代谢率相符
合(HRADEC，Br J Cancer.1958.12:290
‑
304；Andersson等人，J Surg Res.1991.50:156
‑
62；Schilling等人，Int J Rad Appl Instrum B.1992.19:685
‑
95；Stehle等人，Crit Rev Oncol Hemicol.1997.26:77
‑
100)。肿瘤部位白蛋白的高周转率提示肿瘤微环境中白蛋白浓度降低。因此，预计某些肿瘤细胞周围的白蛋白水平低于循环血液中的白蛋白水平。此外，据报道，与血清浓度相比，脂肪组织和骨骼肌中的间质白蛋白浓度显著降低(Ellmerer等人,Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.278:E352
‑
E356(2000))。
[0006]利用组织(如脂肪组织、骨骼肌和肿瘤微环境)中与循环血液相比较低的白蛋白水平，可以使用FA与白蛋白的结合来调节靶向低白蛋白水平的组织或部位的疗法的活性。这可以通过将FA偶联到治疗活性部位来实现，以便当白蛋白结合到FA时，治疗活性降低或消除。当这种方法应用于免疫肿瘤疗法(如抗CD3单克隆抗体和/或双特异性抗体)时，它有潜力降低癌症治疗方法中CRS和其他毒性的风险。

技术实现思路

[0007]在一个一般方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区(VH)；和轻链可变区(VL)；其中所述抗体或其抗原结合片段结合靶抗原，优选人靶抗原；其中VH、VL中的氨基酸残基、或距离VH或VL二十(20)个氨基酸距离(优选五(5)个氨基酸距离)以内的氨基酸残基被偶联脂肪酸(FA)的氨基酸残基取代，并且其中所述抗体或其抗原结合片段在被取代的氨基酸残基处与FA偶联后，仍与靶抗原结合；并且其中在存在生理水平的白蛋白(例如35至50mg/mL)的情况下，所述结合FA的抗体或其抗原结合片段与靶抗原的特异性结合减少或消除。例如，被取代的氨基酸残基可以是半胱氨酸残基或赖氨酸残基或适合化学偶联的修饰氨基酸。
[0008]在某些实施方式中，被取代的氨基酸位于对应于SEQ ID NO:1的残基25、27、62、64、73、76、101、112或113的氨基酸残基处，或对应于SEQ ID NO:2的残基26、27、52、53、56或67的氨基酸残基处，优选地所述取代是选自下组的取代：对应于SEQ ID NO:1的S25C、Y27C、K62C、K64C、K73C、S76C、D101C、S112C或S113C，或对应于SEQ ID NO:2的S26C、S27C、S52C、K53C、S56C或S67C，其中所述残基依照Kabat编号。在某些实施方式中，所述被取代的氨基酸位于对应于SEQ ID NO:1的残基64处或对应于SEQ ID NO:2的残基26处，优选地该取代选自对应于SEQ ID NO:1的K64C取代或对应于SEQ ID NO:2的S26C取代，其中所述残基依照Kabat编号。
[0009]在某些实施方式中，所述被取代的氨基酸位于SEQ ID NO:9、10、11或12的残基119或120处，或SEQ ID NO:13或14的残基121或124处，优选地所述取代选自SEQ ID NO:9、10、11或12的S119C或T120C、或SEQ ID NO:13或14的S121C或Q124C，其中所述残基依照EU编号进行编号。在某些实施方式中，被取代的氨基酸位于SEQ ID NO:9、10、11或12的残基120处，优选地所述取代为T120C取代，其中所述残基依照EU编号进行编号。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段包括：a.重链可变区(VH)；b.轻链可变区(VL)；其中，所述抗体或其抗原结合片段与靶抗原结合，优选为人靶抗原；其中一条或两条臂上的VH、VL中的氨基酸残基，或在距离VH或VL二十(20)个氨基酸距离以内的氨基酸残基被偶联脂肪酸(FA)的氨基酸残基取代；并且其中所述抗体或其抗原结合片段在被取代的氨基酸残基处与FA偶联后，仍与靶抗原结合。2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述被取代的氨基酸残基在一条或两条臂上距离VH或VL五(5)个氨基酸距离以内。3.如权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述被取代的氨基酸残基为半胱氨酸残基、赖氨酸残基或适于化学偶联的修饰氨基酸。4.如权利要求3所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的被取代的氨基酸残基出现在对应于下组的氨基酸残基：(1)SEQ ID NO:1的残基25、27、62、64、73、76、101、112或113；(2)SEQ ID NO:2的残基26、27、52、53、56、或67；(3)SEQ ID NO:9、10、11，或12的残基119或120；或(4)SEQ ID NO:13或14的残基121或124。5.如权利要求4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的被取代的氨基酸残基出现在对应于下组的氨基酸残基：(1)SEQ ID NO:1的K64C取代；(2)SEQ ID NO:2的S26C取代；或(3)SEQ ID NO:9、10、11，或12的T120C取代。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是抗免疫细胞调节剂(ICM)抗体或其抗原结合片段，并且能够与ICM(优选人ICM)特异性结合。7.如权利要求6所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ICM选自下组：CD3、CD27、CD28、CD40、CD122、OX40、CD16、4
‑
1BB、GITR、ICOS、CTLA
‑
4、PD
‑
1、LAG
‑
3、TIM
‑
3、TIGIT、VISTA、SIGLEC7、NKG2D、SIGLEC9、KIR、CD91、BTLA、NKp46、B7
‑
H3、SIPRα、和其他细胞表面免疫调节抗原。8.如权利要求7所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述ICM为CD3，并且所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其分别具有SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8所示的多肽序列，或分别具有SEQ ID NO：33、34、35、36、37和38所示的多肽序列。9.如权利要求7或8所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的被取代的氨基酸残基出现在选自下组的氨基酸残基：(1)SEQ ID NO:1或27的残基25、27、62、64、73、76、101、112或113；(2)SEQ ID NO:2或28的残基26、27、52、53、56、或67；
(3)SEQ ID NO:9、10、11，或12的残基119或120；或(4)SEQ ID NO:13或14的残基121或124。10.如权利要求5
‑
9中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：1)具有SEQ ID NO:1所示多肽序列并具有K64C氨基酸取代的VH区和具有SEQ ID NO:2所示多肽序列的VL区；2)具有SEQ ID NO:27所示多肽序列并具有K64C氨基酸取代的VH区和具有SEQ ID NO:28所示多肽序列的VL区；3)具有SEQ ID NO:1所示多肽序列的VH区和具有SEQ ID NO:2所示多肽序列并具有S26C氨基酸取代的VL区；4)具有SEQ ID NO:27所示多肽序列的VH区和具有SEQ ID NO:28所示多肽序列并具有S26C氨基酸取代的VL区；5)具有选自SEQ ID NO:9、10、11或12所示多肽序列并具有T120C氨基酸取代的CH1区和具有选自SEQ ID NO:13或14所示多肽序列的CL区；6)具有SEQ ID NO:1所示多肽序列的VH区、具有SEQ ID NO:2所示多肽序列的VL区、具有选自SEQ ID NO:9、10、11或12所示多肽序列并具有T120C氨基酸取代的CH1区，以及具有选自SEQ ID NO:13或14所示多肽序列的CL区；7)具有SEQ ID NO:27所示多肽序列的VH区、具有SEQ ID NO:28所示多肽序列的VL区、具有选自SEQ ID NO:9、10、11或12所示多肽序列并具有T120C氨基酸取代的CH1区，以及具有选自SEQ ID NO:13或14所示多肽序列的CL区。11.一种分离的多特异性抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述多特异性抗体或其抗原结合片段包括如权利要求1
‑
10中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，并且其中所述多特异性抗体或其抗原结合片段包括一个或多个抗原结合臂，其包含与FA偶联的被取代的氨基酸残基。12.如权利要求11所述的分离的多特异性抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的多特异性抗体或其抗原结合片段为双特异性抗体或抗原结合片段，其包括第一抗原结合臂(Ab1)和第二抗原结合臂(Ab2)，其中Ab1和/或Ab2包含与FA偶联的被取代的氨基酸。13.如权利要求12所述的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其中Ab1结合免疫细胞调节剂(ICM)，优选为人ICM。14.如权利要求13所述的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的ICM选自下组：CD3、CD27、CD28、CD40、CD122、OX40、CD16、4
‑
1BB、GITR、ICOS、...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰克，
申请(专利权)人：凡恩世制药公司，
类型：发明
国别省市：