抗爱帕琳肽抗体及其用途制造技术

本发明专利技术描述了抗爱帕琳肽抗体及其抗原结合片段。本发明专利技术还描述了编码所述抗体的核酸、包含所述抗体的组合物、制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗或预防疾病的方法，所述疾病包括：糖尿病性视网膜病变(DR)(包括增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR))、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、癌症(例如，实体瘤和血液系统恶性肿瘤)、纤维化，和/或相关并发症。

Anti eipalin peptide antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗爱帕琳肽抗体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年8月24日提交的美国临时申请62/549,523；2017年10月31日提交的美国临时申请62/579,287；2018年4月12日提交的美国临时申请62/656,586；和2018年4月16日提交的美国临时申请62/658,111的优先权。每个公开通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及单克隆抗爱帕琳肽(apelin)抗体、编码该抗体的核酸和表达载体、包含该载体的重组细胞，以及包含该抗体的组合物。本专利技术还提供了制备所述抗体的方法、将所述抗体用于诊断目的的测量血液和/或组织中爱帕琳肽水平的方法，以及使用所述抗体治疗疾病的方法，所述疾病包括：糖尿病性视网膜病变(DR；包括增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR))、老年性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞(RVO)后黄斑水肿、视网膜变性、近视脉络膜新生血管(mCNV)、糖尿病性肾病、慢性肾病(CKD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、斑块新生血管、虹膜红变、新生血管性青光眼、角膜新生血管(CNV)、早产儿视网膜病变(ROP)、视网膜病变、黄斑变性、卵巢过度刺激综合征(OHSS)、子宫出血、子宫内膜异位、子宫内膜增生和癌症、子宫肌层平滑肌瘤、子宫腺肌病、癌症(例如，实体瘤和血液系统恶性肿瘤)、纤维化(例如，病理性和生理性纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肝纤维化和肺纤维化)，和/或相关并发症。电子提交的序列表的引用本申请包含序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子提交，文件名为“689204.1WO序列表”，创建日期为2018年8月15日，大小为88kb。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，其全文通过引用并入本文。专利技术背景爱帕琳肽是一种具有几种内源形式的天然存在的肽。它最初是以77个氨基酸的前体(前爱帕琳肽蛋白(preproapelin))产生的，所述前体被蛋白水解加工成爱帕琳肽-36(或爱帕琳肽36)(包含爱帕琳肽前体的C末端36个氨基酸)、爱帕琳肽-17(或爱帕琳肽17)(包含前爱帕琳肽蛋白的C末端17个氨基酸；K17F)和爱帕琳肽-13(或爱帕琳肽13)(包含前爱帕琳肽蛋白的C末端13个氨基酸)(Tatemoto等，BiochemBiophysRes.Commun.251(2)：471-6(1998)；Habata等，BiochimBiophysActa1452(1)：25-35(1999)；Lee等，神经化学杂志，74(1):34-41(2000))。也已经报道了其他形式的衍生自77个氨基酸的前体的爱帕琳肽(Mesmin等，JProteomeRes.10(11)：5222-31(2011)；Shin等，BiochimBiophysActa.1861(8):1901-12(2017))。爱帕琳肽13的N末端谷氨酰胺残基可以被焦谷氨酰化，生成爱帕琳肽13的焦谷氨酰形式(pE13F)。爱帕琳肽是爱帕琳肽受体APJ(也称为apelinR、AGTRL1或APLNR)的内源性配体。APJ是G蛋白偶联受体基因家族的成员。爱帕琳肽结合并激活APJ，并触发一系列下游信号传导事件，包括下调福司可林(forskolin)诱导的cAMP产生并促进细胞外信号调节激酶(ERK)、Akt和p70S6激酶的磷酸化(DeMota，神经内分泌学，72(6):400-7(2000)；Li等，FrontBiosci.13:3786-92(2008)；Masri等，BiochemBiophysResCommun.290(1):539-45(2002)；Liu等，BiochemBiophysResCommun.468(4):617-21(2015)；Masri等，FASEBJ.18(15):1909-11(2004)；O'Carroll等，内分泌杂志.219(1):R13-35(2013))。K17F和pE13F均可诱导APJ受体内化。K17F对APJ的亲和力高于pE13F，而爱帕琳肽-36与pE13F的亲和力相似(Iturrioz等，生物化学杂志，285(42):32627-37(2010)；Medhurst等，神经化学杂志，84(5):1162-72(2003))。爱帕琳肽和APJ均在中枢神经系统和周围组织中表达(O'Carroll等，内分泌杂志，219(1):R13-35(2013))。爱帕琳肽/APJ通路调节许多生理功能，包括心脏收缩性、血压、心血管张力、组织血管生成、水稳态、胃肠道生理、血管平滑肌细胞(VSMC)和其他细胞类型的增殖、单核细胞对人脐静脉内皮细胞的粘附、心肌梗死后的心脏修复，以及几种组织或器官的病理性纤维化(O'Carroll等，内分泌杂志，219(1):R13-35(2013))。爱帕琳肽在内皮细胞(EC)的血管生成和细胞增殖中起重要作用(Kalin等，DevBiol.305(2):599-614(2007)；Kasai等，BiochemBiophysResCommun.325(2):395-400(2004))。爱帕琳肽和APJ均在血管生成过程中在新生血管的EC上表达(Kidoya等，EMBOJ.27(3):522-34(2008)；Saint-Geniez等，MechDev.110(1-2):183-6(2002))，并且，爱帕琳肽的表达由缺氧诱导(Kasai等，ArteriosclerThrombVascBiol.30(11):2182-7(2010))。爱帕琳肽基因敲除小鼠的视网膜血管形成和眼部发育受损(Kasai等，ArteriosclerThrombVascBiol.28(10):1717-22(2008))，这暗示了爱帕琳肽在视网膜发育中的重要作用。患有增生性糖尿病性视网膜病变(PDR)的患者中爱帕琳肽的玻璃体浓度高于没有糖尿病的个体(Tao等，InvestOphthalmolVisSci.51(8):4237-42(2010))。升高的爱帕琳肽水平可发挥较强的血管生成和增殖作用，并导致糖尿病和其他眼部疾病的视网膜发生病理变化。爱帕琳肽中和单克隆抗体(mAb)可以与爱帕琳肽特异性结合，并阻断其对表达爱帕琳肽受体APJ的细胞的生物学活性；它也可以称为具有中和活性的抗爱帕琳肽mAb。诸如爱帕琳肽中和性mAb的药剂可用于治疗糖尿病性视网膜病变(DR)、年龄相关性黄斑变性(AMD)，和糖尿病性黄斑水肿(DME)。由于爱帕琳肽/APJ通路可协同作用于VEGF途径，因此爱帕琳肽中和性mAb与VEGF阻断剂(如雷珠单抗(ranibizumab))的组合可对DR、DME、AMD和/或其他眼部疾病的患者产生叠加甚至协同的治疗作用。同时靶向爱帕琳肽和VEGF的双特异性抗体可能具有相似的作用。爱帕琳肽-13已显示在多种类型的癌症中促进肿瘤增殖，包括乳腺癌、肝细胞癌、淋巴癌、肺癌和卵巢癌。在各种肿瘤中，爱帕琳肽和APJ的表达上调(Sorli等，Oncogene.26(55):7692-9(2007)；Picault等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：/n(1)分别为SEQ ID NO：168、169、170、171、102和172；/n(2)分别为SEQ ID NO：50、51、52、110、111和112；/n(3)分别为SEQ ID NO：173、174、175、176、114和115；/n(4)分别为SEQ ID NO：68、177、178、128、129和130；/n(5)分别为SEQ ID NO：74、75、76、134、135和136；/n(6)分别为SEQ ID NO：179、78、180、137、138和139；/n(7)分别为SEQ ID NO：83、84、85、143、144和145；/n(8)分别为SEQ ID NO：86、87、88、146、147和148；/n(9)分别为SEQ ID NO：89、90、91、149、150和151；/n(10)分别为SEQ ID NO：92、93、94、152、153和154；/n(11)分别为SEQ ID NO：95、96、97、155、156和157；或/n(12)分别为SEQ ID NO：98、99、100、158、159和160；/n其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170824 US 62/549,523;20171031 US 62/579,287;20181.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
(1)分别为SEQIDNO：168、169、170、171、102和172；
(2)分别为SEQIDNO：50、51、52、110、111和112；
(3)分别为SEQIDNO：173、174、175、176、114和115；
(4)分别为SEQIDNO：68、177、178、128、129和130；
(5)分别为SEQIDNO：74、75、76、134、135和136；
(6)分别为SEQIDNO：179、78、180、137、138和139；
(7)分别为SEQIDNO：83、84、85、143、144和145；
(8)分别为SEQIDNO：86、87、88、146、147和148；
(9)分别为SEQIDNO：89、90、91、149、150和151；
(10)分别为SEQIDNO：92、93、94、152、153和154；
(11)分别为SEQIDNO：95、96、97、155、156和157；或
(12)分别为SEQIDNO：98、99、100、158、159和160；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合爱帕琳肽，优选人爱帕琳肽。


2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包含含有与SEQIDNO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37或39具有至少95％的同一性的多肽序列的重链可变区，或含有与SEQIDNO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40具有至少95％的同一性的多肽序列的轻链可变区。


3.如权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
a.具有SEQIDNO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：2的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQIDNO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：4的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQIDNO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：6的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQIDNO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：8的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQIDNO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：10的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQIDNO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：12的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQIDNO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：14的多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQIDNO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：16的多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQIDNO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：18的多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQIDNO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：20的多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQIDNO：21的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：22的多肽序列的轻链可变区；
l.具有SEQIDNO：23的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：24的多肽序列的轻链可变区；
m.具有SEQIDNO：25的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：26的多肽序列的轻链可变区；
n.具有SEQIDNO：27的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：28的多肽序列的轻链可变区；
o.具有SEQIDNO：29的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：30的多肽序列的轻链可变区；
p.具有SEQIDNO：31的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：32的多肽序列的轻链可变区；
q.具有SEQIDNO：33的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：34的多肽序列的轻链可变区；
r.具有SEQIDNO：35的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：36的多肽序列的轻链可变区；
s.具有SEQIDNO：37的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：38的多肽序列的轻链可变区；或
t.具有SEQIDNO：39的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：40的多肽序列的轻链可变区。


4.一种分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，特异性结合包含SEQIDNO：188的氨基酸序列的表位。


5.一种分离的针对爱帕琳肽的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，特异性结合包含SEQIDNO：204的氨基酸序列的表位。


6.如权利要求4或5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段抑制爱帕琳肽活性。


7.如权利要求4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段能够结合爱帕琳肽-13、pyro-爱帕琳肽-13、爱帕琳肽-17、爱帕琳肽-36、爱帕琳肽-55，和/或与爱帕琳肽-13具有相同的C末端的其他形式的爱帕琳肽。


8.如权利要求5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段能够结合爱帕琳肽-13和pyro-爱帕琳肽-13。


9.如权利要求1至8中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段是嵌合的。


10.如权利要求1至9中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。


11.如权利要求10所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段包括：
a.具有SEQIDNO：211的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：215的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQIDNO：212的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：215的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQIDNO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：215的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQIDNO：214的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：215的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQIDNO：213的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：216的多肽序列的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明晗，邹晖，A·塔姆，
申请(专利权)人：凡恩世制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US