人参皂苷CK自胶束化固体分散体的代谢组学分析方法技术

本发明专利技术公开了人参皂苷CK自胶束化固体分散体的代谢组学分析方法，该方法采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪（UPLC

【技术实现步骤摘要】
人参皂苷CK自胶束化固体分散体的代谢组学分析方法


[0001]本专利技术属于代谢组学分析方法
，具体涉及人参皂苷CK固体分散体的代谢组学分析方法。

技术介绍

[0002]代谢组学(metabonomics/metabolomics)是效仿基因组学和蛋白质组学的研究思想，对生物体内所有代谢物进行定量分析，并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系的研究方式，是系统生物学的组成部分，广泛用于疾病及药物作用机理研究，揭示机体生命活动代谢本质，同时将这些物质与生理病理学生物信息相关联，从而获得相应的病理标志物，研究对象包括糖类、氨基酸、有机酸等代谢物。
[0003]代谢组学数据采集分析技术手段众多，主要用到的有核磁共振（NMR）、气质联用（GC
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MS）和液质联用（LC
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MS）。相对于核磁共振技术而言，近年来新兴的UPLC
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MS联用技术，具有很高的灵敏度和专属性，可显著提高色谱的分辨率和灵敏度，缩短检测时间，也可以用来测定挥发性和热稳定性样品，待检样品简单预处理后进样，即可获得差异代谢组信息，进而得到代谢组分的结构信息。其中，UPLC
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Q
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TOF
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MS是集快速、高效分离，高精度、高通量检测于一体的先进分析技术，其在非靶标代谢组学应用中有着突出的优势，质谱分析可以采用的样本有血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液及心、肝、脾、肺、肾、脑等各种组织。
[0004]人参皂苷化合物K（Ginsenoside compound K，人参皂苷CK，CK）于1972年在人参皂苷的土壤细菌水解产物中被发现，并进行结构鉴定，其结构式为：，分子式为C
36
H
62
O8，分子量为622.87Da。人参皂苷CK是原人参二醇如人参皂苷Rb1、Rb2、Rc等在肠道菌群中主要的代谢产物，它能进一步代谢成20（S）PPD。有报道称人参皂苷的抗癌活性和糖基的数目成反比，而CK只有一个葡萄糖基，被认为是人参中最重要的活性物质。人参皂苷CK是人参皂苷的主要代谢产物之一，具有多种药理活性，研究表明人参皂苷CK具有很好的抗细胞突变、抑制肿瘤细胞转移、诱导肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞耐药性和抗肿瘤诱导的血管生成等活性，还可以增强放疗和化疗的效果。除此之外，人参皂苷CK还有具有抗过敏和抗炎活性，并且可以起到神经保护作用，抗糖尿病作用和抗皮肤衰老作用。人
参皂苷CK药理作用显著，但几乎不溶于水，pH在5.0
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8.0范围内LogP在1
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3之间，提示CK是偏脂溶性药物，其水中溶解度仅为35.2μg/mL，大鼠口服生物利用度只有4.3%，严重限制了其临床应用。因此，提高人参皂苷CK的水中溶解性，增加口服吸收，进而提高其生物利用度，是人参皂苷CK临床应用中亟待解决的问题。
[0005]自胶束化固体分散体属于第五代固体分散体，是药物高度分散于固体载体中形成的一种以固体形式存在的分散系统，遇水相可以自组装形成胶束，能够提高难溶性药物的溶出速率和溶解度，延缓或控制药物释放，提高药物的稳定性，提高药物的生物利用度。
[0006]石家庄以岭药业股份有限公司于2020年7月17日申请了名称为“一种含有人参皂苷CK的制剂组合物及其制备方法”的专利技术专利，专利中公开了人参皂苷CK的自胶束化固体分散体制剂，但未提供自胶束化固体分散体中人参皂苷CK的代谢组学分析的内容。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供人参皂苷CK自胶束化固体分散体的代谢组学分析方法，为人参皂苷CK的代谢组学研究提供参考依据。
[0008]为了实现上述目的，专利技术人提供了以下技术方案。
[0009]人参皂苷CK自胶束化固体分散体的代谢组学分析方法，包括以下操作步骤：a. 对血浆样本进行预处理，制备待测样品；b. 采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪（UPLC
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Q
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TOF
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MS）对步骤a得到的待测样品进行分析；c. 利用小分子数据分析软件对步骤b得到的数据进行处理，再将获得的数据采用SIMCA
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P软件进行PCA和OPLS
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DA数据分析。
[0010]上述代谢组学分析方法，步骤a所述预处理的过程包括：取血浆样本，加入色谱甲醇，依次进行第一次涡旋震荡，第一次超声，第一次离心，取上清液，加入超纯水，冷冻干燥，得到固体，然后向固体中加入50%甲醇复溶，依次进行第二次涡旋震荡，第二次超声，第二次离心，得到上清液，即待测样品，备用。
[0011]步骤a中，第一次超声和第二次超声优选在冰浴条件下进行。第一次离心和第二次离心优选在低温条件下进行。第一次离心和第二次离心的转速优选为12000r/min。
[0012]上述代谢组学分析方法，步骤b所述分析的色谱条件为：色谱柱为T3色谱柱，规格为2.1 mm
×
100 mm, 1.8 μm，流动相以0.1%甲酸水溶液为A相，0.1%甲酸甲醇为B相，流速为0.35mL/min，梯度洗脱过程如下表所示。
[0013]上述代谢组学分析方法，步骤b所述分析的质谱条件为：雾化和锥孔气为N2，Gas1
为50，Gas2为50，气帘气为35，温度500℃，正离子模式电压为5500V。
[0014]上述代谢组学分析方法，步骤c所述数据分析筛选出的是VIP>1.0和P<0.05的代谢物，再去除同位素离子、加合离子与碎片离子，得到潜在化合物信息，最终确定潜在的差异代谢物。
[0015]优选地，上述代谢组学分析方法，操作步骤包括：a. 取血浆样本，加入色谱甲醇，先进行涡旋振荡，再冰浴超声5min，然后在低温、转速12000r/min条件下离心15min，取上清液，加入适量超纯水，冷冻干燥，得到固体，向固体中加入50%甲醇复溶，涡旋振荡30s，冰浴超声5min，然后在转速12000r/min条件下离心15min，取上清液，即为待测样品，备用；低温优选为4℃；b. 采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪对步骤a得到的待测样品进行分析，分析的色谱条件为：色谱柱为T3色谱柱，规格为2.1 mm
×
100 mm, 1.8 μm，流动相以0.1%甲酸水溶液为A相，0.1%甲酸甲醇为B相，流速为0.35mL/min，梯度洗脱过程如下表所示，进样量为10μL，进样器温度为4℃；分析的质谱条件为：雾化和锥孔气为N2，Gas1为50 ，Gas2为50，气帘气为35，温度500℃，正离子模式电压为5500V；c. 利用小分子数据分析软件对步骤b得到的数据进行峰提取、峰去噪、峰对齐的归一化处理，再将获得的数据采用SIMCA
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P软件进行PCA和OPLS
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DA数据分析，筛选出VIP>1.0和P<0.05的代谢物，再去除同位素离子、加合离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人参皂苷CK自胶束化固体分散体的代谢组学分析方法，其特征在于，包括以下操作步骤：a. 对血浆样本进行预处理，制备待测样品；b. 采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪对步骤a得到的待测样品进行分析；c. 利用小分子数据分析软件对步骤b得到的数据进行处理，再将获得的数据采用SIMCA
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P软件进行PCA和OPLS
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DA数据分析。2.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤a所述预处理的过程包括：取血浆样本，加入色谱甲醇，依次进行第一次涡旋震荡，第一次超声，第一次离心，取上清液，加入超纯水，冷冻干燥，得到固体，然后向固体中加入50%甲醇复溶，依次进行第二次涡旋震荡，第二次超声，第二次离心，得到上清液，即待测样品。3.根据权利要求2所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤a中，第一次超声和第二次超声在冰浴条件下进行。4.根据权利要求2所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤a中，第一次离心和第二次离心在低温条件下进行。5.根据权利要求2所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤a，第一次离心和第二次离心的转速为12000r/min。6.根据权利要求1所述代谢组学分析方法，其特征在于，步骤b所述分析过程中的色谱条件为：色谱柱为T3色谱柱，规格为2.1 mm
×
100 mm, 1.8μm，流动相以0.1%甲酸水溶液为A相，0.1%甲酸甲醇为B相，流速为0.35mL/min，梯度洗脱过程如下表所示。7.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤b所述分析过程中的质谱条件为：雾化和锥孔气为N2，温度500℃，正离子模式电压为5500V。8.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，步骤c所述数据分析筛选出的是VIP>1.0和P<0.05的代谢物，再去除同位素离子、加合离子与碎片离子，得到潜在化合物信息，最终确定潜在的差异代谢物。9.根据权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于，操作步骤包括：a. 取血浆样本，加入色谱甲醇，先进行涡旋振荡，再冰浴超声5min，然后在低温、转速12000r/min条件下离心15min，取上清液，加入适量超纯水，冷冻干燥，得到固体，向固体中加入50%甲醇复溶，涡旋振荡30s，冰浴超声5min，然后在转速12000r/min条件下离心15min，取上清液，即为待测样品，备用；b. 采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪对步骤a得到的待测样品进行
分析，分析的色谱条件为：色谱柱为T3色谱柱，规格为2.1 mm
×
100 mm, 1.8μm，流动相以0.1%甲酸水溶液为A相，0.1%甲酸甲醇为B相，流速为0.35mL/min，梯度洗脱过程如下表所示，进样量为10μL，进样器温度为4℃；分析的质谱条件为：雾化和锥孔气为N2，温度500℃，正离子模式电压为5500V；c. 利...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾振华，赵丽艳，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：