淋巴细胞转化实验在氨苯砜综合征诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了淋巴细胞转化实验在氨苯砜综合征诊断中的应用。本发明专利技术提供了用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下淋巴细胞转化实验是否为阳性的物质在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用；所述物质包括如下：1)作为刺激药物的氨苯砜；2)获取受试者外周血单个核细胞的试剂和/或设备；3)用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂和/或设备。用本发明专利技术的方法检测10例氨苯砜综合征患者中，LTT实验阳性8例，灵敏度80％，5例健康志愿者LTT实验均为阴性，特异度100％。本研究成功建立了LTT实验，为氨苯砜综合征的诊断提供了有效的技术手段。诊断提供了有效的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
淋巴细胞转化实验在氨苯砜综合征诊断中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及淋巴细胞转化实验在氨苯砜综合征诊断中的应用。

技术介绍

[0002]氨苯砜综合征是一种迟发型超敏反应，对患者存在致命威胁。氨苯砜综合征临床症状缺乏特异性，往往很难与疾病本身伴随的感染、炎症反应相鉴别，且患者往往会在同一时间段服用多种药物，这也导致致敏药物难以判定以及准确停用，以致临床漏诊、误诊现象严重。目前亟需一种能够明确诊断氨苯砜综合征的方法。
[0003]目前药物不良反应的实验诊断方法包括体内斑贴实验和体外酶联免疫斑点实验(Enzyme
‑
linked immunospot,Elispot)以及淋巴细胞转化实验(Lymphocyte transformation test,LTT)。斑贴实验以及Elispot实验灵敏度较低，有研究显示卡马西平的斑贴试验灵敏度在62％，头孢菌素超敏患者的Elispot实验灵敏度在40％，从而限制了其临床应用。LTT实验是诊断药物超敏反应的一个金标准实验，具有较高的灵敏度和特异度。

技术实现思路

[0004]本专利技术一个目的是提供用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下淋巴细胞转化实验是否为阳性的物质的用途。
[0005]本专利技术提供的用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下淋巴细胞转化实验是否为阳性的物质在如下制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用。
[0006]所述物质包括如下：
[0007]1)作为刺激药物的氨苯砜；
[0008]2)获取受试者外周血单个核细胞的试剂和/或设备；
[0009]3)用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂和/或设备。
[0010]上述应用中，所述作为刺激药物的氨苯砜的工作浓度分别为0uM、12.5uM、25uM、50uM、100uM和200uM。
[0011]上述应用中，所述用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂和/或设备包括用于检测细胞是否增殖的试剂或设备。
[0012]上述应用中，所述用于检测细胞是否增殖的试剂为CCK
‑
8试剂或其他可用于检测细胞增殖的试剂。
[0013]所述用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂和/或设备还可以包括用于形态学检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的设备，如本专利技术实施例中的倒置显微镜。
[0014]本专利技术另一个目的是提供一种诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者的产品。
[0015]本专利技术提供的产品为上述中用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下淋巴细
胞转化实验是否为阳性的物质。
[0016]上述产品还包括记载如下步骤的检测方法的可读载体：
[0017]1)获取受试者外周血单个核细胞；
[0018]2)用不同工作浓度的氨苯砜刺激受试者外周血单个核细胞，得到不同工作浓度氨苯砜刺激后细胞；
[0019]所述氨苯砜的工作浓度分别为0uM、12.5uM、25uM、50uM、100uM和200uM；
[0020]3)检测不同工作浓度氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化情况；
[0021]若任一工作浓度的氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化实验为阳性，则受试者为或候选为氨苯砜综合征患者；若任一工作浓度的氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化实验均为阴性，则受试者不为或候选不为氨苯砜综合征患者。
[0022]上述检测刺激后细胞的淋巴细胞转化实验情况具体采用CCK
‑
8法检测，具体如下：
[0023]检测不同工作浓度氨苯砜刺激后细胞(不同浓度药物刺激组)和空白组细胞(不加入药物刺激)数目，若某一工作浓度的氨苯砜刺激组/空白组细胞数目比值大于2，则该工作浓度的氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化实验为阳性(+)，若某一工作浓度的氨苯砜刺激组/空白组细胞数目比值不大于2，则该工作浓度的氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化实验为阴性(
‑
)。
[0024]在CCK
‑
8法检测后也可以辅助结合形态学判断，具体如下：
[0025]用倒置显微镜(莱卡公司)观察不同浓度氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化情况，若某一工作浓度氨苯砜刺激后细胞可见明显转化的淋巴母细胞(细胞形态改变很明显，如增大或发生有丝分裂)，则该浓度氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化实验为阳性(+)；若某一工作浓度氨苯砜刺激后细胞没有明显转化的淋巴母细胞(细胞形态改变不明显，如不增大或不发生有丝分裂)，则该工作浓度氨苯砜刺激后细胞的淋巴细胞转化实验为阴性(
‑
)。
[0026]上述受试者均为停用激素或未服用激素受试者，可以为疑似氨苯砜综合征患者也可以为健康人。
[0027]上述作为刺激药物的氨苯砜和上述用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用也是本专利技术保护的范围。
[0028]上述作为刺激药物的氨苯砜、上述获取受试者外周血单个核细胞的试剂和上述用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用也是本专利技术保护的范围。
[0029]本专利技术选取10例明确诊断为氨苯砜综合征患者作为实验组，5例健康志愿者作为对照组。对两组人群进行淋巴细胞转化实验，结果显示10例氨苯砜综合征患者中，LTT实验阳性7例，灵敏度70％，5例健康志愿者LTT实验均为阴性，特异度100％。本研究成功建立了LTT实验，具有高的灵敏度和特异性，为氨苯砜综合征的诊断提供了有效的技术手段。
附图说明
[0030]图1为CCK
‑
8法检测外周血单个核细胞增殖标准曲线。
[0031]图2为氨苯砜综合征患者外周血单个核细胞体氨苯砜刺激6天后淋巴细胞转化实验。
[0032]图3为淋巴细胞转化实验
‑
CCK
‑
8法。
具体实施方式
[0033]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0034]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0035]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。
[0036]下述实施例采用如下物质：
[0037](1)仪器：生物安全柜、二氧化碳培养箱、液氮罐、4度冰箱、
‑
20度冰箱、
‑
80度冰箱、倒置显微镜、普通显微镜、微量移液器、细胞计数仪或细胞计数板、酶标仪、水浴锅、程序降温盒等。
[0038](2)试剂：人AB血清、胎牛血清、1640培养基、双抗、Biomyc
‑
3抗生素、IL
‑
2、转铁蛋白、氨苯砜、CCK
‑
8试剂、70％酒精、二甲基亚砜、外周血单个核细胞冻存试剂盒等。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下淋巴细胞转化实验是否为阳性的物质在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用。所述物质包括如下：1)作为刺激药物的氨苯砜；2)获取受试者外周血单个核细胞的试剂和/或设备；3)用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂和/或设备。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述氨苯砜的工作浓度分别为0uM、12.5uM、25uM、50uM、100uM和200uM。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述用于检测淋巴细胞转化实验是否为阳性的试剂和/或设备包括用于检测细胞是否增殖的试剂或设备。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述用于检测细胞是否增殖的试剂为CCK
‑
8试剂。5.一种诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者的产品，为权利要求1
‑
4任一项中的所述用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下淋巴细胞转化实验是否为阳性的物质。6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述产品还包括记...

【专利技术属性】
技术研发人员：张福仁，刘红，孙乐乐，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属皮肤病医院山东省皮肤病性病防治研究所，山东省皮肤病医院，
类型：发明
国别省市：