一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法。属于益生元和益生菌技术领域。本发明专利技术联合超高压和生物酶解技术，定向酶解桑叶多糖，并结合醇沉、纳滤、柱层析及反渗透制备得到具有特定结构的益生元；本发明专利技术制备的益生元可特异性地调控肠道中约氏乳杆菌，并验证其调控糖脂代谢活性，建立了一种益生元特异性筛选肠道益生菌的方法；本发明专利技术定向筛选益生菌的方法简单，并且制备得到的肠道益生菌能够有效调控糖脂代谢活性。有效调控糖脂代谢活性。有效调控糖脂代谢活性。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法


[0001]本专利技术涉及益生元和益生菌
，更具体的说是涉及一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法。

技术介绍

[0002]糖脂代谢是机体能量供给的重要生命过程，其稳态平衡是宿主应对体内外各种应激反应的重要保障。糖脂代谢紊乱会引发肥胖、糖尿病、血脂异常及脂肪肝等系列慢性疾病，严重威胁人类健康。随着人们生活节奏及饮食习惯的改变，与环境及营养等因素息息相关的慢性疾病的患病人数急速上升。
[0003]糖脂代谢紊乱的发生与高脂饮食及缺乏运动的生活方式、遗传、代谢及环境等因素相关。此外，研究证实肠道菌群在肥胖和糖尿病等糖脂代谢紊乱疾病的发病过程中起关键作用。近年来研究显示，膳食干预是影响肠道菌群结构及功能的重要手段，其中，肠道菌群可对营养组分的变化作出迅速反应，而好的饮食习惯也对肠道微生物结构的稳定起到了关键性的作用，由此，通过膳食干预肠道微生物改善糖脂代谢紊乱成为食品营养学研究的新切入点。而通过直接补充肠道益生菌是一种直接有效的方式，但目前益生菌的主要从环境或者土壤中筛选，存在工作量大、且不确定性高等缺点。
[0004]综上，如何提供一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法。通过制备特定结构的益生元，定向富集具有调控糖脂代谢活性的肠道益生菌。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]益生元在筛选调控糖脂代谢益生菌中的应用，所述益生元为8个聚合度的功能性低聚糖，主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖通过α
‑
1,2、β
‑
1,4、β
‑
1,2链接而成，其不能被机体消化酶所降解，直接作用于肠道菌群，其具体结构如下：
[0008]α
‑
(2
‑
OAc)
‑
Manp
‑1→2‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑
1。
[0009]进一步的，所述益生元的制备方法如下：
[0010](1)桑叶经过水提醇沉得到桑叶多糖；
[0011](2)桑叶多糖经过超高压辅助半纤维素酶水解、浓缩得到益生元粗反应液；
[0012](3)将益生元粗反应液经过醇沉、纳滤、反渗透得到初步纯化的益生元溶液；
[0013](4)将初步纯化的益生元溶液经过柱层析分离进行纯化，即得益生元。
[0014]进一步的，所述益生元的制备方法如下：
[0015](1)以干燥的桑叶为原料，将16～20％(w/v)桑叶粉添加至pH7.0的去离子水中，在75℃的条件下水提多糖10～15h，使用终浓度为60％～80％(v/v)的乙醇醇沉，5000
×
g离心
10min，收集沉淀，得到桑叶多糖；
[0016](2)取5～9％(w/v)桑叶多糖溶液，加入半纤维素酶0.2～0.5％(w/v)，调整pH值为6.0～6.5，在300～600MPa的条件下反应4～5h，8000
×
g离心5min，将上清液过反渗透膜进行浓缩，得到益生元粗反应液；
[0017]所取得的有益效果：半纤维素酶的添加量会影响益生元结构和聚合度，进而对其活性产生影响。采用本专利技术参数可最终得到具有特定结构α
‑
(2
‑
OAc)
‑
Manp
‑1→2‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑
1的益生元。
[0018](3)将益生元粗反应液(25％～50％，w/v)依次经过醇沉、纳滤、反渗透得到初步纯化的益生元溶液；
[0019]所取得的有益效果：若益生元粗反应液浓度过低，影响纳滤效果；浓度过高，容易产生传质阻力，对纳滤分离膜造成损伤。
[0020](4)将20～25％(w/v)初步纯化的益生元溶液加入到离子交换树脂层析柱DEAE
‑
Spepharose Fast Flow(60cm
×
5.0cm)中，以去离子水为洗脱剂，洗脱流速为1.0～2.0mL/min，收集100～300min洗脱液，反渗透浓缩，然后将20～25％(w/v)浓缩液加入到葡聚糖凝胶G
‑
25(60cm
×
5.0cm)柱中，以去离子水为洗脱剂，洗脱流速为0.5～1.0mL/min，收集150～200min洗脱液，反渗透浓缩，即得益生元。
[0021]一种筛选肠道中调控糖脂代谢益生菌的方法，筛选过程中使用益生元，所述益生元为8个聚合度的功能性低聚糖，主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖通过α
‑
1,2、β
‑
1,4、β
‑
1,2链接而成，其不能被机体消化酶所降解，直接作用于肠道菌群，其具体结构如下：
[0022]α
‑
(2
‑
OAc)
‑
Manp
‑1→2‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑
1。
[0023]进一步的，包括如下步骤：
[0024](1)使用益生元灌胃糖脂代谢紊乱的小鼠；
[0025](2)分析益生元对糖脂代谢紊乱小鼠肠道菌群的影响，筛选出对肠道菌群有显著影响的菌群；
[0026](3)在对肠道菌群有显著影响的菌群中，通过相关性分析筛选出和其他所有菌群都存在显著相关性的菌为益生菌；
[0027](4)将筛选出的益生菌灌胃给糖脂代谢紊乱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.益生元在筛选调控糖脂代谢益生菌中的应用，所述益生元为8个聚合度的功能性低聚糖，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖通过α
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1,2、β
‑
1,4、β
‑
1,2链接而成，其具体结构如下：α
‑
(2
‑
OAc)
‑
Manp
‑1→2‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
β
‑
Glcp
‑1→4‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Glcp
‑1→2‑
α
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
‑1→2‑
β
‑
Galp
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1。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述益生元的制备方法如下：(1)桑叶经过水提醇沉得到桑叶多糖；(2)桑叶多糖经过超高压辅助半纤维素酶水解、浓缩得到益生元粗反应液；(3)将益生元粗反应液经过醇沉、纳滤、反渗透得到初步纯化的益生元溶液；(4)将初步纯化的益生元溶液经过柱层析分离进行纯化，即得益生元。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述益生元的制备方法如下：(1)以干燥的桑叶为原料，将16～20％(w/v)桑叶粉添加至pH7.0的去离子水中，在75℃的条件下水提多糖10～15h，使用终浓度为60％～80％(v/v)的乙醇醇沉，5000
×
g离心10min，收集沉淀，得到桑叶多糖；(2)取5～9％(w/v)桑叶多糖溶液，加入半纤维素酶0.2～0.5％(w/v)，调整pH值为6.0～6.5，在300～600MPa的条件下反应4～5h，8000
×
g离心5min，将上清液过反渗透膜进行浓缩，得到益生元粗反应液；(3)将益生元粗反应液依次经过醇沉、纳滤、反渗透得到初步纯化的益生元溶液；(4)将20～25％(w/v)初步纯化的益生元溶液加入到离子交换树脂层析柱DEAE
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Spepharose Fast Flow(6...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡腾根，余元善，徐玉娟，吴继军，温靖，邹波，安可婧，傅曼琴，李璐，彭健，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：