间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了一种用于治疗脑卒中的药物组合物，其含有间充质干细胞来源的外泌体。本发明专利技术还提供了用间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法。本发明专利技术的方法和药物组合物中采用的外泌体通过特定的制备方法和条件从间充质干细胞中获得，具有修复因缺氧缺糖引起的细胞损伤的活性，同时，通过特定的给药剂量和方式，能够有效地治疗缺血性脑卒中，并且不产生细胞损伤的副作用。生细胞损伤的副作用。生细胞损伤的副作用。

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法和组合物
[0001]本申请为2021年4月16日提交的、申请号为202110411486.8、专利技术名称为“间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法和组合物”的分案申请，其全部内容通过引用结合在本申请中。


[0002]本专利技术涉及细胞学和药物学领域。具体的，本专利技术提供了一种采用间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的方法和用于治疗脑卒中的药物组合物。

技术介绍

[0003]脑卒中(stroke)是全球第二大死亡原因和致残的主要原因。缺血性脑卒中约占脑卒中的80％。传统的药物——溶栓剂可在急性脑卒中患者中用于恢复脑部血流，但只能在部分患者中发挥作用，而且必须在中风发作4.5小时内使用。在过去的二十年中对缺血性脑卒中的治疗进行了积极的创新性的研究，其中，基于干细胞的神经修复疗法成为其中一种研究方向。
[0004]间充质干细胞是干细胞家族的重要成员。研究发现，间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能、具有免疫调节功能、不存在免疫排斥的特性和异体移植排异性较轻等特性。天然的间充质干细胞来源于发育早期的中胚层。间充质干细胞可从各种组织分离出来并培养。间充质干细胞还可从万能干细胞分化得到。其中，诱导万能干细胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)，也称为诱导多能干细胞或人工万能干细胞，是人工制备的具有胚胎干细胞的干性的细胞。诱导万能干细胞由日本科学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)于2006年首次制备成功，是利用病毒载体将四个转录因子(Oct4,Sox2,Klf4和c
‑
Myc)的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞和胚胎APSC多能细胞的一种细胞类型。诱导万能干细胞已广泛在生物技术和医学研究领域得到应用。
[0005]细胞外囊泡(extracellular vesicles，EVs)是细胞通讯中的重要介体，并被证明有助于干细胞旁分泌对组织再生的作用。细胞外囊泡是纳米级(50
–
1000nm)的脂质双层球，包裹着母细胞的成分，例如膜蛋白，RNA，小的非编码RNA等。根据直径，重量梯度，RNA/蛋白质的含量，衍生来源和生物学功能的不同，细胞外囊泡可分为多种类别，其中，外泌体是主要类型，其直径为约30至200nm，通常带有表面标记，例如CD9，CD81和CD63。
[0006]然而，无论是干细胞或各种来源的细胞外囊泡在用于治疗时，它们在受损伤的组织或器官中的作用包括风险都还没有充分地记录或证明。因此，本领域还需要治疗脑卒中特别是缺血性脑卒中的有效和安全的疗法和药物，例如新的基于干细胞或其分泌的外泌体的疗法和药物。

技术实现思路

[0007]本申请提供了新的采用间充质干细胞来源的外泌体治疗脑卒中的疗法和药物组合物。本申请人的专利技术人首次发现了间充质干细胞来源的外泌体具有修复因缺氧缺糖引起
的细胞损伤的活性，能够有效地治疗脑卒中，特别是缺血性脑卒中。本申请人还出乎意料地发现了特定从干细胞培养液中获得外泌体的制备方法和条件，包括干细胞来源、细胞培养方法(如细胞传代次数)等，以及特定的给药剂量和方式等对外泌体治疗脑卒中特别有效，同时没有对受试者产生细胞损伤等的副作用。
[0008]具体的，在本专利技术的其中一个方面，本专利技术提供了一种用于治疗脑卒中的药物组合物，其含有间充质干细胞来源的外泌体。本专利技术提供的药物组合物中的外泌体具有修复细胞损伤的活性，特别是修复因缺氧缺糖引起的细胞损伤的活性。
[0009]脑卒中(Stroke)，也称为中风，是一种急性脑血液循环障碍性疾病，以猝然昏倒，不省人事，伴发口角歪斜、语言不利而出现半身不遂为主要症状。脑卒中包括出血性脑卒中、缺血性脑卒中、高血压脑病和血管性痴呆。高血压、动脉硬化、脑血管畸形、脑动脉瘤常可导致出血性中风；风湿性心脏病、心房颤动、细菌性心内膜炎等常导致缺血性中风。
[0010]在本专利技术的其中一个方面，所述药物组合物适于用于治疗缺血性脑卒中，包括短暂性脑缺血发作、动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞、腔隙性脑梗塞、脑栓塞等。
[0011]在本专利技术中，术语间充质干细胞也被称作多潜能间质细胞，主要是从脂肪或者骨髓中获得，能够分化为中胚层起源的多种细胞，例如骨、脂肪、软骨、肌腱和肌肉等。间充质干细胞可从各种组织分离出来并培养，但它们的能力和细胞表面标记依据其来源而互不相同。间充质干细胞通常由可分化为骨细胞、软骨细胞和肌细胞的细胞界定，并且表达CD73(+)、CD105(+)、CD34(
‑
)和CD45(
‑
)等细胞表面标记。
[0012]在本专利技术的其中一个方面，所述间充质干细胞为骨髓来源、脂肪来源、脐带血来源、牙齿来源或万能干细胞来源的间充质干细胞。更优选的，所述间充质干细胞为骨髓来源、脂肪来源或万能干细胞来源的间充质干细胞。
[0013]在本专利技术中，术语干细胞是指在单细胞水平上具有自我更新和分化产生子代细胞的能力的未分化细胞。干细胞的特征在于：其具有在体外由多种胚层(内胚层、中胚层和外胚层)分化成各种细胞谱系的功能细胞以及移植后产生多种胚层的组织和注入胚泡后基本上有助于所有或大部分组织形成的能力。
[0014]在本专利技术中，术语万能干细胞指能够产生所有的胚胎细胞类型的干细胞。天然的万能干细胞包括胚胎干细胞。诱导万能干细胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)，也称为诱导多能干细胞或人工万能干细胞，是人工制备的具有胚胎干细胞的干性的细胞，例如可以利用病毒载体将四个转录因子(Oct4,Sox2,Klf4和c
‑
Myc)的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到。
[0015]在本专利技术的其中一个方面，所述间充质干细胞为诱导万能干细胞来源的间充质干细胞。在本专利技术的其中又一个方面，所述间充质干细胞是以真皮成纤维细胞为起源制备诱导万能干细胞，并进一步诱导其分化得到的间充质干细胞。
[0016]细胞外囊泡是由细胞分泌的膜囊泡。细胞外囊泡可以具有在约10nm至约5000nm之间的直径(在颗粒不是球体的情况下，指其最大尺寸)。在本专利技术中，外泌体指的是小的分泌型囊泡，通常具有在约30nm至约180nm之间的直径(在颗粒不是球体的情况下，指其最大尺寸)，例如具有约30nm至约150nm之间的直径。外泌体包含核酸、蛋白或其他生物分子，或在其膜中具有核酸、蛋白或其他生物分子，并且可以在身体或生物系统中的不同位置之间充当载体。
[0017]外泌体可以从包括哺乳动物诸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猫、牛、马、山羊、绵羊、灵长类动物或人类的多种生物来源分离。外泌体可以从生物流体诸如血清、血浆、全血、尿液、唾液、母乳、泪液、汗液、关节液、脑脊液、精液、阴道液、腹水液和羊水分离。外泌体也可以从实验样品诸如从培养的细胞取得的培养基分离。
[0018]在本专利技术的其中一个方面，用于提取外泌体的间充质干细胞为从骨髓细胞、脂肪细胞或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗脑卒中的药物组合物，其含有间充质干细胞来源的外泌体，所述间充质干细胞为经3
‑
10次传代的细胞，优选为经5
‑
8次传代的细胞。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述间充质干细胞为骨髓来源、脂肪来源、脐带血来源、牙齿来源或万能干细胞来源的间充质干细胞，优选为诱导万能干细胞来源的间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述外泌体通过超滤法、超速离心法或聚合物(例如PEG)沉淀法制备得到。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述外泌体的剂量为约1
‑
500ug，优选为约5
‑
200ug，更优选为约10
‑
100ug。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其为单次或多次给药的剂型，优选为多次给药的剂型。6.根据权利要求5所述的药物组合物，其为间隔约1天
‑
10天给药的剂型，优选的，其为间隔约5
‑
7天给药的剂型，更优选的为间隔7天给药的剂型。7.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其中每次给药剂量为约1
‑
500ug，优选为约5
‑
2...

【专利技术属性】
技术研发人员：路钢，陈伟仪，苏献伟，曾金时，刘强，
申请(专利权)人：卓越细胞工程香港有限公司，
类型：发明
国别省市：