本发明专利技术公开了一种治疗乙型肝炎的慢病毒载体和颗粒，该慢病毒载体和颗粒包含乙型肝炎病毒抗原的编码核苷酸序列，乙型肝炎病毒抗原优选大S抗原，可应用于在有需要的对象中治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染或治疗和/或预防由乙型肝炎病毒感染引起的病症的药物组合物或疫苗中，具有优异的治疗和预防效果。具有优异的治疗和预防效果。具有优异的治疗和预防效果。
【技术实现步骤摘要】
一种治疗乙型肝炎的慢病毒载体、慢病毒颗粒及其制备方法和应用
[0001]本申请涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种治疗乙型肝炎的慢病毒载体、慢病毒颗粒及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围的严重公共卫生问题之一。HBV感染是导致慢性乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌的重要原因。临床治疗慢性HBV感染的常用药物主要有核苷类似物和干扰素。核苷类似物无法完全清除肝细胞内的HBV DNA，且长期使用易导致耐药突变株的出现以及停药后反弹。干扰素使用一个疗程(通常为48周)后HBeAg血清学转换发生率仅33％，HBsAg转阴率不及10％。干扰素单药治疗HBsAg转阴率为3％
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7％，仅仅稍高于核苷类似物，而且干扰素副作用较大也限制其应用。
[0003]目前广泛应用的乙肝蛋白疫苗通过诱导体液免疫，产生保护性抗体，达到预防的目的。大量的研究发现保护性抗体仅能够消除胞外病毒颗粒，而无法清除胞内感染的病毒，难以实现已感染患者的治疗。抗病毒治疗后HBsAg阳性人群肝细胞癌发生率明显高于HBsAg转阴的人群，HBsAg阴转与肝脏功能改善、组织病理改善，以及长期预后改善相关，是目前国内外最新慢乙肝防治指南推荐的理想治疗目标，即功能性治愈，所以HBsAg转阴即功能性治愈或临床治愈是当前慢性乙型肝炎治疗的主要追求目标。本领域仍然需要可用于治疗和/或预防HBV感染或治疗和/或预防由HBV引起的疾病的药物。
[0004]专利CN109923212A中慢病毒载体插入的HBV序列为基因型A型和C型的表面抗原、Pol、HBX及共有核心MHCI和MHCII表位序列及基因型A型和C型的表面B细胞表位的嵌合VLP，且所展示结果仅有免疫原性结果，治疗效果未知。而CN1209340A公开的抗原序列经比对为HBV基因型A型序列，A型HBV主要分布于欧洲及中非地区。
技术实现思路
[0005]本专利技术提供了一种治疗乙型肝炎的慢病毒载体，该慢病毒载体包含乙型肝炎病毒抗原的编码核苷酸序列，乙型肝炎病毒抗原选自核心抗原(HBcAg)、PreS1抗原(PreS1)及大S抗原(LargeS)。优选的，乙型肝炎病毒抗原是大S抗原(LargeS)。
[0006]进一步的，核心抗原(HBcAg)的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示序列；PreS1抗原(PreS1)的氨基酸序列为SEQ ID NO:4或7所示序列；大S抗原(LargeS)的氨基酸序列为SEQ ID NO:10或13所示序列。
[0007]进一步的，核心抗原(HBcAg)的编码核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示序列；PreS1抗原(PreS1)的编码核苷酸序列为SEQ ID NO:6或9所示序列；大S抗原(LargeS)的编码核苷酸序列为SEQ ID NO:12或15所示序列。
[0008]本专利技术还提供一种制备治疗乙型肝炎的慢病毒颗粒的方法，包括如下步骤：
[0009]a)使前述的慢病毒载体、表达Gag、Rev和/或Pol蛋白的包装载体、表达包膜蛋白的
包膜载体共转染宿主细胞，或者使前述的慢病毒载体转染能够表达包膜蛋白以及能够表达Gag、Rev、Pol蛋白中的一种或多种的宿主细胞；
[0010]b)培养转染的所述宿主细胞以使慢病毒载体包装成慢病毒载体颗粒；以及
[0011]c)收获步骤b)中产生的慢病毒载体颗粒。
[0012]本专利技术还提供一种制备治疗乙型肝炎的慢病毒颗粒，该慢病毒颗粒包含前述的慢病毒载体，或通过前述的方法制备而成。
[0013]本专利技术还提供一种前述的慢病毒载体、慢病毒颗粒在制备用于在有需要的对象中治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染或治疗和/或预防由乙型肝炎病毒感染引起的病症的药物组合物或疫苗中的应用。
[0014]本专利技术还提供一种药物组合物，该药物组合物用于在有需要的对象中治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染或治疗和/或预防由乙型肝炎病毒感染引起的病症，所述药物组合物包括前述的慢病毒载体或慢病毒颗粒，以及药学可接受的载体。
[0015]其中，前述“对象”是哺乳动物，例如人。
[0016]本专利技术的有益效果包括：
[0017]本专利技术的免疫原能够覆盖大部分中国地区流行株序列，非整合型慢病毒载体能够在保证其安全性的前提下优化抗原提呈，打破免疫耐受。其动物实验数据证明了其良好的免疫原性，能够在野生小鼠体内诱导强烈的免疫应答。而在HBV慢性感染小鼠模型中也证实了显著的治疗效果，实现抗原和病毒DNA清除，抗体转阳，且能激活较强的T细胞免疫反应，具有重要的临床转化潜力。
附图说明
[0018]图1为质粒图谱图；
[0019]图2为实验时间轴；
[0020]图3为小鼠中HBsAg的检测图，其中，图3A
‑
3E依次为AAV
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HBV感染的小鼠肌内注射慢病毒JW27、JW28、JW27+JW28、JW29和JW30；
[0021]图4为小鼠中HBV
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DNA的检测图，其中，图4A
‑
4E依次为AAV
‑
HBV感染的小鼠肌内注射慢病毒JW27、JW28、JW27+JW28、JW29和JW30；
[0022]图5为使用小鼠IFN
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γELISPOT测定分析诱导的T细胞应答结果图，其中，图5A
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5E依次为JW27、JW28、JW27+JW28、JW29和JW30组；
[0023]图6示出肝组织HBcAg免疫组化结果图。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例对本专利技术进行进一步说明和描述，但所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术和实施例中，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他专利技术和实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0026]除非另有指示或定义，否则所有所用术语均具有本领域中的通常含义，该含义将为本领域技术人员所了解。参考例如标准手册，如Sambrook et al.,“Molecular Cloning:ALaboratory Manual”；Lewin,“Genes VIII”；及Roitt et al.,“Immunology”(第8版)，以
及本文中引用的一般现有技术；此外，除非另有说明，否则未具体详述的所有方法、步骤、技术及操作均可以且已经以本身已知的方式进行，该方式将为本领域技术人员所了解。亦参考例如标准手册、上述一般现有技术及其中引用的其他参考文献。
[0027]如本文所用，术语“和/或”涵盖由该术语连接的项目的所有组合，应视作各个组合已经单独地在本文列出。例如，“A和/或B”涵盖了“A”、“A和B”以及“B”。例如，“A、B和/或C”涵盖“A”、“B”、“C”、“A和B”、“A和C”、“B和C”以及“A和B本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种治疗乙型肝炎的慢病毒载体，其特征在于，包含乙型肝炎病毒抗原的编码核苷酸序列，所述乙型肝炎病毒抗原选自核心抗原HBcAg、PreS1抗原PreS1和/或大S抗原LargeS。2.根据权利要求1所述的治疗乙型肝炎的慢病毒载体，其特征在于，所述乙型肝炎病毒抗原是大S抗原LargeS。3.根据权利要求1所述的治疗乙型肝炎的慢病毒载体，其特征在于，所述核心抗原HBcAg的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示序列；和/或所述PreS1抗原PreS1的氨基酸序列为SEQ ID NO:4或7所示序列；和/或所述大S抗原LargeS的氨基酸序列为SEQ ID NO:10或13所示序列。4.根据权利要求1所述的治疗乙型肝炎的慢病毒载体，其特征在于，所述核心抗原HBcAg的编码核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示序列；和/或所述PreS1抗原PreS1的编码核苷酸序列为SEQ ID NO:6或9所示序列；和/或所述大S抗原LargeS的编码核苷酸序列为SEQ ID NO:12或15所示序列。5.一种制备治疗乙型肝炎的慢病毒颗粒的方法，其特征在于，所述方法包括：a)使权利要求1
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4中任一项所述的慢病毒载体、表达Gag、Rev和/或Pol蛋白的包装载体、表达包膜蛋白的包膜载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：上海劲威生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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